一种昆虫病原线虫活体繁殖方法技术

一种昆虫病原线虫活体繁殖方法，涉及一种昆虫病原线虫的繁殖方法。是为了解决昆虫病原线虫活体繁殖效率低，无法工厂化生产的问题。方法：一、选择健康的鳞翅目夜蛾科的斜纹夜蛾6龄幼虫为昆虫病原线虫繁殖寄主；二、将斜纹夜蛾幼虫放置于容器中，使斜纹夜蛾幼虫饥饿后，将侵染期昆虫病原线虫接种到斜纹夜蛾幼虫上，在室温下进行侵染繁殖；三、昆虫病原线虫在斜纹夜蛾幼虫体内繁殖，待斜纹夜蛾幼虫死亡后，移出已经死亡的斜纹夜蛾幼虫，收集线虫。本发明专利技术在72小时以后寄主昆虫已全部死亡，5‑7天就有线虫爬出，繁殖效率高、速度快。收集、清洗线虫使用自来水，条件要求低，无需使用无菌水和培养箱，适于工厂化生产。本发明专利技术用于繁殖线虫。

Method for living reproduction of entomopathogenic nematodes

The invention relates to a method for living in vivo breeding of entomopathogenic nematodes, relating to a method for breeding insect pathogenic nematodes. In order to solve the problem of low reproductive efficiency and factory production of entomopathogenic nematodes. Method: first, select the Lepidoptera Noctuidae health of the 6 instar larvae of Spodoptera litura for entomopathogenic nematode reproduction host; two, Spodoptera litura larvae placed in the container, the Spodoptera litura larvae after starvation, the infection period of entomopathogenic nematodes inoculated to Spodoptera litura larvae were infected, breeding at room temperature; three. Entomopathogenic nematodes in Spodoptera litura larvae breeding to Spodoptera litura larvae after the death of Spodoptera litura larvae have died out, collecting the nematode. In 72 hours after the invention of host insects have been killed, 5 7 days have climbed out of the breeding nematode, high efficiency and fast speed. The collection and cleaning of nematodes using tap water requires low conditions, without the use of sterile water and incubators, and is suitable for industrial production. The present invention is useful for breeding nematodes.

【技术实现步骤摘要】
一种昆虫病原线虫活体繁殖方法
本专利技术涉及一种昆虫病原线虫的繁殖方法。
技术介绍
昆虫病原线虫作为一种重要的生防因子，可通过寄生昆虫幼虫，有效地控制农田地下害虫和钻驻性害虫。根据昆虫病原线虫繁殖载体的不同，将昆虫病原线虫繁殖方法分为活体繁殖法和离体繁殖法。离体繁殖法就是利用人工培养基，通过昆虫病原线虫随身携带的共生细菌进行昆虫病原线虫繁殖，目前国内外均是采用该技术繁殖昆虫病原线虫，进行大量生产。但该技术对生产条件要求比较严格，且多采用液体发酵技术生产，导致生产成本高、技术难掌握。本专利技术是利用昆虫病原线虫寄主进行活体繁殖的工厂化生产，该技术简化了生产过程，降低了生产成本和难度。昆虫病原线虫是昆虫的专化性寄生天敌，可寄生鞘翅目﹑双翅目﹑同翅目﹑膜翅目、等翅目﹑鳞翅目﹑脉翅目﹑蜻蜓目和直翅目等近250多种昆虫。该类线虫可从昆虫的肛门、气孔、节间膜或随寄主食物进入昆虫体内，释放携带的共生细菌，使寄主昆虫患败血病死亡。因此，人们利用该线虫的特点进行害虫生物防治，该线虫对人畜安全，不污染环境。它具有寄主广泛、主动寻找寄主、高效、快速、安全、易规模化生产等优点，尤其对于一些化学药剂难以防治的钻蛀性害虫和土壤害虫，有很好的防治效果。随着化学杀虫剂污染越来越严重、人们对害虫无公害控制技术的渴望和害虫抗药性的增强，害虫生物控制也逐步引起人们的重视，昆虫病原线虫作为一种很有潜能的生防因子，近年在国内外生物防治领域发展迅速。昆虫病原线虫能否作为一种生防制剂在工业上大面积应用，关键在于解决线虫的高效生产技术问题。目前国际上活体繁殖技术主要是采用大蜡螟(Galleriamellonella)进行繁殖，但现今该技术仅局限于实验室试验繁殖，产量极低，也有利用黄粉虫生产线虫，但该技术要借助固体载体进行繁殖，技术繁琐。
技术实现思路
本专利技术是为了解决昆虫病原线虫活体繁殖效率低，无法工厂化生产的问题，提供一种昆虫病原线虫活体繁殖方法。本专利技术昆虫病原线虫活体繁殖方法，按以下步骤进行：一、选择健康的鳞翅目夜蛾科的斜纹夜蛾(Prodenialitura(Fabricius))6龄幼虫为昆虫病原线虫繁殖寄主；二、将斜纹夜蛾幼虫放置于容器中，放置密度为1头/4cm2，使斜纹夜蛾幼虫饥饿9～11小时后，将侵染期昆虫病原线虫接种到斜纹夜蛾幼虫上，在室温下进行侵染繁殖；所述接种方法为：将侵染期昆虫病原线虫悬浮液均匀喷施到斜纹夜蛾幼虫上，昆虫病原线虫与斜纹夜蛾幼虫的个数比为(0.9～1.1)万:1；三、线虫收获：昆虫病原线虫在斜纹夜蛾幼虫体内繁殖，待斜纹夜蛾幼虫死亡后，移出已经死亡的斜纹夜蛾幼虫，收集线虫。使用自来水清洗线虫，然后放入冰箱保存。一般在接种昆虫病原线虫72小时以后，斜纹夜蛾幼虫即死亡，准备收集线虫。进一步的，所述昆虫病原线虫为斯氏线虫属(Steinernemacarpocapsae)的线虫或异小杆线虫属(Heterorhabditisbacteriophora)的线虫。进一步的，步骤三所述收集线虫的及具体方法为：移出已经死亡的斜纹夜蛾幼虫到无菌滤纸上，每条滤纸放120-150头斜纹夜蛾幼虫，滤纸下方放有吸了自来水的海绵块，利用昆虫病原线虫趋水性，使线虫爬出斜纹夜蛾幼虫体内，透过滤纸进入有水的海绵块中进行收集。在接种斜纹夜蛾幼虫第5-7天就有昆虫病原线虫爬出，每天收集线虫，收集10天，将线虫放入10℃冰箱保存。本专利技术的有益效果：本专利技术方法可高效率繁殖昆虫病原线虫，繁殖技术采用的繁殖寄主是鳞翅目夜蛾科的斜纹夜蛾(Prodenialitura(Fabricius))幼虫，技术原理是根据昆虫病原线虫可对斜纹夜蛾幼虫进行活体寄生的特性；利用昆虫病原线虫的趋水性进行昆虫病原线虫收集和收获；适合该繁殖方法的昆虫病原线虫包括斯氏线虫属(Steinernemacarpocapsae)和异小杆(Heterorhabditisbacteriophora)线虫属。经过12-16天的繁殖可获得昆虫病原线虫，每头斜纹夜蛾幼虫繁殖至少7-8万头昆虫病原线虫。本专利技术在72小时以后寄主昆虫已全部死亡，5-7天就有线虫爬出，本方法的繁殖效率高、速度快。本专利技术方法使用斜纹夜蛾作为寄主昆虫，其体大，为33-50毫米，斜纹夜蛾幼虫便于繁殖，且产量高。本专利技术收集线虫所用的滤纸下海绵块里的水是自来水，清洗线虫用的也是自来水，条件要求低，无需使用无菌水，无需使用培养箱，适于工厂化生产。本专利技术是利用昆虫病原线虫寄主的寄生特性，进行活体繁殖的工厂化生产，该技术生产过程简单，生产效率提高，降低了生产成本和技术难度。因此，该技术可大大促进昆虫病原线虫制剂的应用。具体实施方式本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。具体实施方式一：本实施方式昆虫病原线虫活体繁殖方法，按以下步骤进行：一、选择健康的鳞翅目夜蛾科的斜纹夜蛾(Prodenialitura(Fabricius))6龄幼虫为昆虫病原线虫繁殖寄主；二、将斜纹夜蛾幼虫放置于容器中，放置密度为1头/4cm2，使斜纹夜蛾幼虫饥饿9～11小时后，将侵染期昆虫病原线虫接种到斜纹夜蛾幼虫上，在室温下进行侵染繁殖；所述接种方法为：将侵染期昆虫病原线虫悬浮液均匀喷施到斜纹夜蛾幼虫上，昆虫病原线虫与斜纹夜蛾幼虫的个数比为(0.9～1.1)万:1；三、线虫收获：昆虫病原线虫在斜纹夜蛾幼虫体内繁殖，待斜纹夜蛾幼虫死亡后，移出已经死亡的斜纹夜蛾幼虫，收集线虫，使用自来水清洗线虫，然后放入冰箱保存。具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述昆虫病原线虫为斯氏线虫属(Steinernemacarpocapsae)的线虫或异小杆线虫属(Heterorhabditisbacteriophora)的线虫。其它与具体实施方式一相同。具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是：步骤二中使斜纹夜蛾幼虫饥饿10小时。其它与具体实施方式一或二相同。具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是：步骤二中昆虫病原线虫与斜纹夜蛾幼虫的个数比为1万:1。其它与具体实施方式一至三之一相同。具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是：步骤三所述收集线虫的及具体方法为：移出已经死亡的斜纹夜蛾幼虫到无菌滤纸上，每条滤纸放120-150头斜纹夜蛾幼虫，滤纸下方放有吸了自来水的海绵块，利用昆虫病原线虫趋水性，使线虫爬出斜纹夜蛾幼虫体内，透过滤纸进入有水的海绵块中进行收集。在接种斜纹夜蛾幼虫第5-7天就有昆虫病原线虫爬出，每天收集线虫，收集10天，将线虫放入10℃冰箱保存。其它与具体实施方式一至四之一相同。下面对本专利技术的实施例做详细说明，以下实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方案和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1：一、繁殖寄主选择：选择健壮肥大的斜纹夜蛾(Prodenialitura(Fabricius))幼虫用于昆虫病原线虫繁殖寄主；二、寄主繁殖：人工繁殖饲养斜纹夜蛾幼虫，待幼虫达到6龄，挑选健康幼虫用于繁殖线虫；三、将侵染期昆虫病原线虫接种到斜纹夜蛾幼虫上，进行侵染繁殖。接种方法是将侵染期昆虫病原线虫悬浮液均匀喷施到斜纹夜蛾幼虫上，昆虫病原线虫与斜纹夜本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种昆虫病原线虫活体繁殖方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、选择健康的鳞翅目夜蛾科的斜纹夜蛾6龄幼虫为昆虫病原线虫繁殖寄主；二、将斜纹夜蛾幼虫放置于容器中，放置密度为1头/4cm

【技术特征摘要】
1.一种昆虫病原线虫活体繁殖方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：一、选择健康的鳞翅目夜蛾科的斜纹夜蛾6龄幼虫为昆虫病原线虫繁殖寄主；二、将斜纹夜蛾幼虫放置于容器中，放置密度为1头/4cm2，使斜纹夜蛾幼虫饥饿9～11小时后，将侵染期昆虫病原线虫接种到斜纹夜蛾幼虫上，在室温下进行侵染繁殖；所述接种方法为：将侵染期昆虫病原线虫悬浮液均匀喷施到斜纹夜蛾幼虫上，昆虫病原线虫与斜纹夜蛾幼虫的个数比为(0.9～1.1)万:1；三、线虫收获：昆虫病原线虫在斜纹夜蛾幼虫体内繁殖，待斜纹夜蛾幼虫死亡后，移出已经死亡的斜纹夜蛾幼虫，收集线虫，使用自来水清洗线虫，然后放入冰箱保存。2.根据权利要求1所述的一种昆虫病原线虫活体繁殖方法，其特征在于所述昆虫病原线虫为斯氏线虫属(Steinernemacarpocapsae...

【专利技术属性】
技术研发人员：许艳丽，程清泉，王义，潘凤娟，韩晓增，张思佳，
申请(专利权)人：中国科学院东北地理与农业生态研究所，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23