用于多元RNA引导的基因组编辑和其它RNA技术的方法和组合物技术

本发明专利技术包括材料和方法，用于从一个多核苷酸构建体(合成基因)产生许多小RNA来促进RNA‑引导的多元基因组编辑、修饰、表达抑制以及其他基于RNA的技术。所述合成基因/多核苷酸构建体编码由tRNA所分开的多顺反子RNA组件，并且优选还包括调节组件如启动子或终止子，以形成表达盒。一旦在细胞中经转录，转录物经内源tRNA加工系统而被细胞加工成多个RNA分子。所述系统可用于任何基于RNA的基因操纵方法，包括RNA‑介导的基因组编辑、人工微RNA介导的基因沉默、小RNA介导的遗传操纵、双链RNA介导的基因沉默、反义机制等等。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于多元RNA引导的基因组编辑和其它RNA技术的方法和组合物专利
本专利技术涉及在分子生物学和遗传工程领域内用于基因靶向和基因组编辑的方法。更具体地，本专利技术描述了使用tRNA加工系统来使得能够进行基于多元RNA的或多元RNA引导的基因组工程、基因抑制等。专利技术背景用于特异性基因靶向或精准基因组编辑的方法学对于植物或动物基因的功能性表征而言是非常重要的。近年来，已经开发了序列特异性核酸酶来提高基因靶向或基因组编辑在植物、动物或微生物体系中的效率。近来，基于成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)-相关核酸酶系统，已经在微生物和哺乳动物体系中开发了新的基因组编辑工具。所述CRISPR-相关核酸酶是细菌和古细菌获得性免疫的一部分。Cas9内切核酸酶，酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)II型CRISPR/Cas系统的成分，与称为CRISPRRNA(crRNA)和反式激活crRNA(transcrRNA)的两个短RNA分子形成复合物，所述RNA分子引导核酸酶在特异性位点对非自身DNA的两条链进行切割。所述crRNA-transcrRNA异源双链体可以由一个本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于在受体细胞中产生多元RNA介导的遗传操纵的方法，其包括：获得多核苷酸构建体，其编码两个或更多个与一或多个tRNA切割序列串联排列的RNA介导的遗传操纵序列，和将所述构建体引入所述细胞，从而所述受体细胞的tRNA加工系统在所述tRNA序列处切割该异源多核苷酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.17 US 62/065,0931.用于在受体细胞中产生多元RNA介导的遗传操纵的方法，其包括：获得多核苷酸构建体，其编码两个或更多个与一或多个tRNA切割序列串联排列的RNA介导的遗传操纵序列，和将所述构建体引入所述细胞，从而所述受体细胞的tRNA加工系统在所述tRNA序列处切割该异源多核苷酸。2.权利要求1的方法，其中所述RNA介导的遗传操纵序列在所述受体细胞中靶向单一基因内的多个位点。3.权利要求1的方法，其中所述RNA介导的遗传操纵包括多个不同的基因。4.权利要求1的方法，其中所述RNA介导的遗传操纵是RNA引导的基因组编辑，其可包括靶向突变、依赖同源性的修复、转录激活和抑制、表观基因组编辑、和/或基因组标记。5.权利要求1的方法，其中所述RNA遗传操纵包括RNA干扰。6.权利要求6的方法，其中所述RNA干扰是微RNA和/或小RNA介导的RNA干扰。7.权利要求4的方法，其中所述RNA引导的基因组编辑包括CRISPRS。8.权利要求1的方法，其中所述tRNA切割序列包括pretRNA受体茎、D-环臂和TΨC-环臂。9.权利要求1的方法，其中所述tRNA切割序列包括用于RNaseP和/或RNaseZ和/或RNaseE中的一或多个的活性位点。10.权利要求1的方法，其中所述tRNA切割序列是SEQIDNO:13、188或189。11.权利要求1的方法，其中所述异源多核苷酸序列包括串联排列的tRNA-引导RNA。12.权利要求13的方法，其中所述引导RNA包括间隔区RNA和支架RNA序列。13.权利要求14的方法，其中所述异源多核苷酸序列包括tRNA-引导RNA-tRNA。14.权利要求1的方法，其中所述受体细胞是植物细胞。15.权利要求1的方法，其中所述受体细胞是动物细胞。16.权利要求1的方法，其中所述细胞是微生物细胞。17.权利要求1的方法，其中所述细胞是人类细胞。18.用于多元RNA介导的基因组操纵的核酸构建体，其包含：两个或更多个RNA介导的遗传操纵序列和tRNA切割序列。19.权利要求18的核酸构建体，其中所述两个或更多个RNA介导的遗传操纵序列在所述受体细胞中靶向单一基因内的多个位点。20.权利要求18的核酸构建体，其中所述RNA介导的遗传操纵序列靶向多个不同的基因或DNA元件。21.权利要求18的核酸构建体，其中所述RNA介导的遗传操纵序列是干扰RNA序列。22.权利要求21的核酸构建体，其中所述RNA干扰序列是微RNA和/或...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y·杨，K·谢，
申请(专利权)人：宾州研究基金会，
类型：发明
国别省市：美国,US