一种短肽、其应用以及由其得到的抗菌组合物制造技术

本发明专利技术提供了一种短肽、其应用以及由其得到的抗菌组合物，属于生物技术领域，该短肽能够有效应用于抑制黄曲霉的生长和黄曲霉毒素的生物合成中。该短肽具有如下通式结构：

A short peptide, an application thereof, and an antibacterial composition obtained therefrom

The invention provides a short peptide and its application as well as obtained from the antimicrobial composition, which belongs to the field of biotechnology, biosynthesis of the peptide to growth and aflatoxin inhibition of Aspergillus flavus effectively applied to the. The short peptide has the following general structure:

【技术实现步骤摘要】
一种短肽、其应用以及由其得到的抗菌组合物
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种短肽、其应用以及由其得到的抗菌组合物。
技术介绍
黄曲霉毒素主要由黄曲霉和寄生曲霉产生，具有强的毒性、致畸性和致癌性，农作物如花生、玉米、大米、棉籽、坚果等容易被黄曲霉毒素污染。黄曲霉毒素B1是已知毒性最强的天然致癌物，其主要引发肝癌。现在常用物理、化学、生物法去除原料中的黄曲霉毒素。物理法如加热、吸附、提取、伽马射线辐照、紫外线照射等。化学法如用臭氧、氨水、氯气、过氧化氢、甲醛处理等。生物法如用微生物发酵原料去毒，用植物提取物抑制毒素产生等。然而，每种方法都有限制，或因原料的营养受到损失，或因需要昂贵的设备等。例如，黄曲霉毒素结构非常稳定，270℃分解，如用加热处理是一般温度越高、加热时间越长，黄曲霉毒素去除率越高，但很明显，加热法容易使物料的营养损失，且需要耐高压的设备。因此，目前急需提供一种有效的方法来抑制黄曲霉毒素的生物合成。
技术实现思路
本专利技术提供了一种短肽、其应用以及由其得到的抗菌组合物，该短肽能够有效应用于黄曲霉的生长和黄曲霉毒素的生物合成中。为了达到上述目的，本专利技术的一方面提供了一种短肽，所述短肽具有如下通式结构：其中，X代表天冬酰胺或鸟氨酸，当n＝0时，m为2-9的正整数；当n＝1时，m为1-8的正整数。作为优选技术方案，当n＝0时，所述短肽的氨基酸序列选自序列表中SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4、SEQIDNO.5、SEQIDNO.6、SEQIDNO.7、SEQIDNO.8中的任意一种。作为优选技术方案，当X代表天冬酰胺，且n＝1时，所述短肽的氨基酸序列选自序列表中SEQIDNO.9、SEQIDNO.10、SEQIDNO.11、SEQIDNO.12、SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO.15、SEQIDNO.16中的任意一种。作为优选技术方案，当X代表鸟氨酸，且n＝1时，所述短肽的氨基酸序列选自序列表中SEQIDNO.17、SEQIDNO.18、SEQIDNO.19、SEQIDNO.20、SEQIDNO.21、SEQIDNO.22、SEQIDNO.23、SEQIDNO.24中的任意一种。本专利技术的另一方面提供了一种如上述任一项技术方案所述的短肽在固体培养基上抑制黄曲霉生长中的应用。本专利技术的再一方面提供了一种如上述任一项技术方案所述的短肽在农作物储存中抑制黄曲霉的生长和黄曲霉毒素的生物合成中的应用。本专利技术的又一方面提供了一种抗菌组合物，所述抗菌组合物包括至少一种治疗或预防有效量的如上述任一项技术方案所述的短肽和至少一种的药学上可接受的载体。与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果在于：1、本专利技术所提供的短肽为从巨大芽孢杆菌发酵液中首次分离得到的，具有很好的黄曲霉毒素的抑制作用。2、本专利技术所提供的短肽不仅在固体培养基上对黄曲霉的生长具有显著的抑制作用，而且在农作物储存中也对黄曲霉的生长和黄曲霉毒素的生物合成具有显著的抑制作用，其中，部分短肽在2mg/mL的浓度时即可显著抑制黄曲霉的生长。附图说明图1为本专利技术实施例1中所提供的经SephadexG-25层析分离得到的巨大芽孢杆菌发酵液的组分纯化图，包括A1和A2两个组分；图2为本专利技术实施例1所提供的A2组分经反相高效液相色谱的分离纯化图，包括B1-B9共9个组分；图3为本专利技术实施例1所提供的巨大芽孢杆菌中各短肽的液质联用色谱图，其中，图(a)为经反相高效液相色谱分离得到的B6组分的液质图；(b)为m/z942.9606的短肽的质谱图；(c)为m/z938.0045的短肽的质谱图。图4为本专利技术实施例2所提供的24种短肽在固体培养基上的抑菌效果图；图5为本专利技术实施例3所提供的不同构型的Asp-Orn、Asp-Asn和Asp-Asp-Asn在农作物储存中的抑菌效果图；图6为本专利技术实施例3所提供的扫描电镜下观察得到的L-Asp-L-Orn对于黄曲霉菌菌丝形态的影响；图7为本专利技术实施例3所提供的透射电镜下观察得到的L-Asp-L-Orn对于黄曲霉菌菌丝形态的影响。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本专利技术实施例提供了一种短肽，该短肽从巨大芽孢杆菌发酵液中首次分离，具体如下:所利用的微生物：黄曲霉A.flavusNRRL3357：培养于PDA培养基中(200g土豆浸提物，20g葡萄糖，20g琼脂，1L水)。巨大芽孢杆菌Bacillusmegaterium(CGMCC7086，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心)：培养于牛肉膏蛋白胨培养基中(牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，1L水)。纯化和鉴定:培养12升巨大芽孢杆菌(160rpm，37℃，3天)，发酵液经8,000r/min离心20分钟。将离心后的上清液经80％硫酸铵沉淀，沉淀冷冻干燥后，经SephadexG-25层析，流速为5mL/min，检测波长为220nm。如图1所示，沉淀中共有两个组分，实验表明A2组分具有抑制黄曲霉的作用，收集A2组分进一步研究。将A2组分进一步经反相高效液相色谱(RP-HPLC)(Agilent,SantaClara,CA,USA)纯化，所采用的色谱柱为C18柱(25×250mm)，流动相为含0.1％三氟乙酸(TFA)的乙腈。如图2所示，共收集9个组分，实验表明B6组分具有抑制黄曲霉的作用，收集B6组分进一步研究。将B6组分进一步经液质联用色谱(LC-MS/MS)鉴定，所采用的仪器为AccurateMassquadrupletime-of-flight(Q-TOF)LiquidChromatography(TripleTOF5006,ABSCIEX,USA)。如图3可知，鉴定出3种短肽，分别为Asp-peptide、Asn-peptide和Orn-peptide，这3种短肽分别包含了多种含2-7个Asp(天冬氨酸残基)的短肽。实验表明，Asp-peptide、Asn-peptide和Orn-peptide对黄曲霉具有抑制作用。结合谱图分析可知，所述短肽具有如下通式结构：其中，X代表天冬酰胺或鸟氨酸，当n＝0时，m为2-9的正整数；当n＝1时，m为1-8的正整数。根据上述条件进行分类，所得到的短肽在不同情况下均为一系列短肽，具体如下：1)当n＝0时，所得到的短肽如下：2)当X代表天冬酰胺，且n＝1时，所得到的短肽如下：序列号短肽SEQIDNO.9Asp-AsnSEQIDNO.10Asp-Asp-AsnSEQIDNO.11Asp-Asp-Asp-AsnSEQIDNO.12Asp-Asp-Asp-Asp-AsnSEQIDNO.13Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-AsnSEQIDNO.14Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-AsnSEQIDNO.15Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-AsnSEQIDNO.16Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种短肽，其特征在于，所述短肽具有如下通式结构：

【技术特征摘要】
1.一种短肽，其特征在于，所述短肽具有如下通式结构：其中，X代表天冬酰胺或鸟氨酸，当n＝0时，m为2-9的正整数；当n＝1时，m为1-8的正整数。2.根据权利要求1所述的短肽，其特征在于，当n＝0时，所述短肽的氨基酸序列选自序列表中SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4、SEQIDNO.5、SEQIDNO.6、SEQIDNO.7、SEQIDNO.8中的任意一种。3.根据权利要求1所述的短肽，其特征在于，当X代表天冬酰胺，且n＝1时，所述短肽的氨基酸序列选自序列表中SEQIDNO.9、SEQIDNO.10、SEQIDNO.11、SEQIDNO.12、SEQIDNO.13、SEQIDNO.14、SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：孔青，陈玉洁，姚瑶，许舒静，谢翔，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东,37