一种生产香蕉菌根组织培养种苗的方法技术

本发明专利技术公开了一株地表球囊霉LCGX‑58及其菌剂在香蕉种植中的应用：(1)将香蕉植株带生长点的茎尖依次进行诱导培养、继代培养、生根培养，即得香蕉组培苗；(2)取步骤(1)中组培苗炼苗；(3)移栽，将地表球囊霉LCGX‑58菌剂与育苗基质混合，培养。本发明专利技术提供的菌剂对香蕉生长有良好的促进作用，适应力以及定殖力强，能促进香蕉对土壤中养分的吸收，促进香蕉植株的生长；本发明专利技术将植物组织培养、菌根化育苗和大棚移栽技术相结合，建立一套香蕉菌根化组织培养种苗育苗的技术体系，为香蕉的工厂化生产提供技术支持，同时也为其它植物的菌根化育苗，快速繁殖提供相关技术依据。

Method for producing banana mycorrhizal tissue culture seedling

The present invention discloses the application of strain LCGX 58 and g.versiforme agents in banana cultivation: (1) the banana plants with growing point of the shoot tip were induced by culture, subculture, rooting culture, the banana plantlets; (2) take steps (1) tissue culture seedling; (3) the transplanting, g.versiforme LCGX 58 agent and seedling substrate mixed culture. The present invention provides the agent has a good promoting effect on the growth of banana, adaptability and colonization ability, can promote the absorption of nutrients in soil of banana, banana to promote plant growth; the transplanting technology of mycorrhizal seedlings and in the combination of plant tissue culture, and establish a mycorrhizal seedling culture of banana seedlings the technology system for banana production to provide technical support, but also for the mycorrhizal seedlings of other plants, to provide technical basis for rapid propagation.

【技术实现步骤摘要】
一种生产香蕉菌根组织培养种苗的方法
本专利技术属于植物菌根
，特别涉及香蕉菌根组织培养种苗生产技术。
技术介绍
香蕉是我国南方地区重要的经济作物，目前，制约我国香蕉产业健康发展的两大问题是香蕉主产区枯萎病病害严重和土壤肥力偏低。香蕉枯萎病又名香蕉巴拿马病，黄叶病，是一种由古巴专化型尖孢镰刀菌侵染维管束引起植株凋萎的毁灭性真菌土传病害。丛枝菌根(AM)真菌是菌根真菌的一种，能促进植物宿主对水分和养分(特别是磷)的吸收和利用，在促进植物生长、改善土壤生态、抑制土传病害和提高植株抗病性方面极具应用潜力的微生物资源。利用香蕉组织培养技术，规模化生产香蕉种苗，能有效提高香蕉种苗质量。同时，利用菌根技术，在移栽时对组培苗进行高效菌根真菌的人工辅助接种，实现种苗菌根化，这对提高香蕉组织培养苗的移栽成活率、改善其生长状况将起到至关重要的作用。但是目前在香蕉的实际生产中，未见有AM菌根在香蕉组培苗上的应用，更没有找到一种具有明显促生作用的AM菌剂。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术分离得到一株丛枝菌根真菌的优势菌株，地表球囊霉LCGX-58，用该菌株制成AM菌剂，在适宜的共生培养体系条件下，对香蕉有显著的促生功能。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一株地表球囊霉(Glomusversiforme)LCGX-58，保藏编号为CGMCCNo.8775。本专利技术提供了上述技术方案所述地表球囊霉LCGX-58在制备地表球囊霉(Glomusversiforme)LCGX-58菌剂中的应用。本专利技术提供了上述技术方案所述地表球囊霉LCGX-58菌剂的制备方法，包含以下步骤：(a)以玉米为宿主，将地表球囊霉LCGX-58的孢子接种于玉米幼苗根系，种植、培养；(b)长出地表球囊霉菌丝后，对所述步骤(a)培养中的玉米停止浇水，待植株干枯后除去茎秆，保留根系，培养基质中所得菌丝、培养基质和玉米根系即为地表球囊霉LCGX-58菌剂。优选的，步骤(a)中的玉米幼苗种植于培养基质中，大棚光照培养12～16周。优选的，所述培养基质包括河砂和沸石；优选的，所述河沙和沸石的体积比为2:1～3:1；优选的，所述培养基质使用前经过灭菌处理。优选的，LCGX-58菌剂包含培养基质中所得菌丝、培养基质和玉米根系。本专利技术还提供了上述技术方案所述LCGX-58菌剂在香蕉生产中的应用，包含以下步骤：(1)将香蕉植株的吸芽无菌处理后修剪成带生长点的茎尖，将所述茎尖在温度为25℃～28℃、光强度为2000～3000lx、光照时间为l2h·d-1的培养条件下依次进行诱导培养35～40天、继代培养25～30天和生根培养20～30天，得到香蕉组培苗；(2)将所述步骤(1)得到的香蕉组培苗进行为期15～20天的炼苗；(3)将所述步骤(2)炼苗后的香蕉组培苗移栽至育苗培养基上进行培养，所述育苗培养基包括体积比为1:1～1:2的地表球囊霉LCGX-58菌剂与育苗基质。优选的，所述步骤(3)的培养过程中进行养护管理，所述养护管理具体为：盖塑料薄膜保湿15～20天，保持湿度70～80％；在所述培养过程中，每2周喷施一次Hoagland′s营养液。优选的，步骤(1)中所述诱导培养用诱导培养基包括MS基础培养基、占所述MS基础培养基浓度为2～5mg/L的BA和占所述MS基础培养基浓度为0.1～0.2mg/L的NAA。优选的，步骤(1)中所述继代培养用继代培养基包括MS基础培养基、占所述MS基础培养基浓度为1～3mg/L的BA和占所述MS基础培养基浓度为0.05～0.15mg/L的NAA。优选的，步骤(1)中所述生根培养用生根培养基包括1/2MS基础培养基、占所述1/2MS基础培养基浓度为0.1～0.2mg/L的NAA和占所述1/2MS基础培养基浓度为0.1～0.5％的活性炭。技术效果本专利技术分离得到一株丛枝菌根真菌的优势菌株，地表球囊霉LCGX-58，用该菌株制成AM菌剂，所得菌剂对香蕉生长有很好的促进作用，适应力以及定殖力强，能促进香蕉对土壤中养分的吸收，促进香蕉植株生长。进一步的本专利技术将植物组织培养、菌根化育苗和大棚移栽技术相结合，建立一套香蕉菌根化组织培养种苗育苗的技术体系，为香蕉的工厂化生产提供技术支持，同时也为其它植物的菌根化育苗，快速繁殖提供相关技术依据。生物保藏说明地表球囊霉(Glomusversiforme)LCGX-58，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期：2014年01月16日，保藏号：CGMCCNo.8775。附图说明图1为地表球囊霉LCGX-58的菌株形态特征；图2为采用本专利技术制备所得地表球囊霉LCGX-58菌剂在香蕉种植中应用后所得香蕉菌根植株，其中AM为添加地表球囊霉LCGX-58菌剂的香蕉菌根植株，CK为未添加菌剂的空白对照；图3为地表球囊霉LCGX-58菌剂与对照组香蕉植株根系菌根侵染检测，其中A为菌丝，B为泡囊，C为丛枝，D为对照组。具体实施方式本专利技术提供了一株地表球囊霉(Glomusversiforme)LCGX-58，生物保藏编号为CGMCCNo.8775。优选的，地表球囊霉LCGX-58的形态特征为：孢子：土壤中单生，球形或近球形，黄至黄棕色，显微镜下沿孢壁有一圈深色，大小82～136μm；孢子壁：孢壁3层，L1无色透明易逝壁，约1μm，成熟时常脱落或只剩部分残屑；L2浅黄至黄棕色层状壁，厚2～4μm，厚度较均匀；L3单一壁，约1μm，不易与L2分离，亮金黄色；连孢菌丝：无色透明，宽4.3～6.8μm，成熟孢子中常萎缩或脱落。连点宽7.6～12.0μm，直或小喇叭形，开放或由一内壁形成的隔封闭；内含物：油滴状。本专利技术公开了地表球囊霉LCGX-58在制备地表球囊霉(Glomusversiforme)LCGX-58菌剂中的应用。本专利技术提供了所述地表球囊霉LCGX-58菌剂的制备方法，包含以下步骤：(a)以玉米为宿主，将地表球囊霉LCGX-58的孢子接种于发芽玉米种子，种植、培养；(b)长出地表球囊霉菌丝后，对所述步骤(a)培养中的玉米停止浇水，待植株干枯后除去茎秆，保留根系，培养基质中所得菌丝、培养基质和玉米根系即为地表球囊霉LCGX-58菌剂。本专利技术中，将根系中接种了地表球囊霉孢子的发芽玉米种子种植于培养基质中进行培养。优选的，接种方法为：用移液枪将单个孢子放置于发芽玉米种子附近或混合。在本专利技术中，所述培养基质用来培养发芽玉米种子，优选包括河砂和沸石；所述河沙和沸石的体积比优选为2:1～3:1，更优选为3:1。在本专利技术中，所述培养基质使用前优选经过灭菌处理，本专利技术对所述灭菌的方法没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的培养基质灭菌技术方案即可；具体的在本专利技术的实施例中可采用高压蒸汽灭菌；所述的灭菌处理优选为：在121℃、103.4kPa条件下高压蒸汽灭菌1h。本专利技术中，所述宿主的种植密度优选的为35～45株/盆，更优选的为40株/盆，所述盆的规格为上表面直径×下表面直径×盆高为780×350×250mm。密度太大，植物根系太密集，不利于孢子的侵染；密度小，根系过少，不利于孢子的生长繁殖。在本专利技术中，所述培养为光照培养；所述光照培养的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株地表球囊霉(Glomus versiforme)LCGX‑58，保藏编号为CGMCC No.8775。

【技术特征摘要】
1.一株地表球囊霉(Glomusversiforme)LCGX-58，保藏编号为CGMCCNo.8775。2.权利要求1所述的LCGX-58在制备地表球囊霉(Glomusversiforme)LCGX-58菌剂中的应用。3.根据权利要求2所述的LCGX-58菌剂的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：(a)以玉米为宿主，将地表球囊霉LCGX-58的孢子接种于玉米幼苗根系，种植、培养；(b)长出地表球囊霉菌丝后，对所述步骤(a)培养中的玉米停止浇水，待植株干枯后除去茎秆，保留根系，培养基质中所得菌丝、培养基质和保留的玉米根系即为地表球囊霉LCGX-58菌剂。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)中的玉米幼苗种植于培养基质中，大棚光照培养12～16周。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述培养基质包括河砂和沸石，所述河沙和沸石的体积比为2:1～3:1；所述培养基质使用前经过灭菌处理。6.权利要求3～5任意一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：覃晓娟，陈廷速，李冬萍，张金莲，刘增亮，汪茜，龙艳艳，冯重阳，宋娟，晏卫红，黄京华，陈振松，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院微生物研究所，广西物宝农业科技集团有限责任公司，
类型：发明
国别省市：广西,45