检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用制造技术

本发明专利技术涉及检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中及筛选治疗肾癌的药物的应用，根据该物质对FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的检测结果，可以对肾癌进行早期诊断或对肾癌预后作出预测，以减少肾癌患者死亡率；通过该物质对癌细胞添加测试药物后或在对肿瘤模型动物施用测试药物后的某个时期检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平来测定抗肿瘤药物的治疗效果，筛选出能治疗肾癌的有效药物；还提供了调控FGL2基因或FGL2蛋白表达下调的物质在制备治疗肾癌药物中的应用，该药物可以从阻断内源性FGL2蛋白的过多表达和分泌及减弱FGL2蛋白的活性两方面来治疗因FGL2蛋白过表达介导的肾癌。

Application of substance for detecting FGL2 gene or FGL2 protein expression in diagnosis and prediction of kidney cancer products

The invention relates to the application of drug detection of FGL2 gene or FGL2 protein expression levels of substances in the diagnosis and prediction of renal cell carcinoma and screening products in the treatment of renal cell carcinoma, according to the results of the detection level of the material on the expression of FGL2 gene or FGL2 protein, can be used for early diagnosis of renal cell carcinoma or to predict renal cancer prognosis, in order to reduce the mortality of patients with renal cell carcinoma; through the material adding test drugs on cancer cells or in the level of expression of FGL2 gene or FGL2 protein in a certain period of time after the application of animal model of tumor drug test to determine the antitumor effect of drug treatment, select effective drugs to treat renal cell carcinoma; also provides regulation of FGL2 gene or FGL2 protein expression of material preparation the application of drugs in the treatment of renal cell carcinoma, the drug activity of endogenous FGL2 protein expression from blocking and secretion and reduced FGL2 protein two To treat renal carcinoma mediated by overexpression of FGL2 protein.

【技术实现步骤摘要】
检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用
本专利技术属于生物
，具体涉及检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用。
技术介绍
肾细胞癌是发生于肾脏实质的恶性肿瘤，简称肾癌，它来源于肾小管上皮，占成人恶性肿瘤的3％，肾脏恶性肿瘤的90％-95％，是目前最常见的肾脏恶性肿瘤。肾癌起病隐匿，早期的临床表现缺乏特异性，许多患者初诊时即发生了转移，既往典型的“血尿、肿块、疼痛”三联征出现时多属肿瘤晚期，同时肾癌对放化疗均不敏感，对晚期肾癌缺乏有效的治疗手段，预后不良。因此，肾癌的早期诊断对肾癌病人的治疗有极为重要的意义。目前肾癌的临床诊断方式主要有：X线检查(尿路平片、静脉肾盂造影)、超声、CT、MRI、肾动脉造影、术中、术后病理活检等。X线检查通常对于典型的较晚期病例才会出现特征的影像学改变，因此平片的诊断价值不大；超声检查图像无特异性，对于直径小于2cm或不典型者，诊断上有一定困难，通常需要有经验的技师才能准确诊断，受主观因素影响较大；CT及MRI对于肾癌的诊断价值相似，是目前应用最广的肾癌诊断方式，但对少数病例在术前不能做到定性诊断，对于不典型及小肾癌有可能漏诊、误诊,而且MRI检查不适用于体内有金属的患者；肾癌通常有丰富的血供，肾动脉造影可能清楚地显示病变，而且可以同时进行选择性肾动脉栓塞，有利于其后手术的进行，但属于有创检查，有可能会增加患者的痛苦；术后病理活检为诊断金标准，有利于诊断，然而对于晚期患者来说其治疗意义远没有诊断意义大。因此，研究更有效的肾癌标记物对提高肾癌的早期诊断，减少肾癌患者死亡率和改善生活质量有重要的意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于：(1)提供检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用；(2)调控FGL2基因或FGL2蛋白表达下调的物质在制备治疗肾癌药物中的应用；(3)检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在筛选治疗肾癌的药物中的应用。为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：1、检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用。进一步，所述诊断和预示具体为：肾癌的发生、TNM分期的判断、治疗效果的动态监测和预后判断。进一步，所述检测FGL2基因表达水平的物质包含能够特异性扩增FGL2基因的引物，所述引物的正向序列如SEQIDNO.1所示；所述引物的反向序列如SEQIDNO.2所示。进一步，所述检测FGL2蛋白表达水平的物质包含可以特异性结合所述FGL2蛋白的抗体或所述抗体的片段。进一步，所述产品为试剂盒、芯片、试纸或高通量测序平台中的一种。进一步，所述试剂盒为：(1)为基于染料法的FGL2mRNA实时定量检测试剂盒，包括能够特异性扩增FGL2基因的引物，所述引物的正向序列如SEQIDNO.1所示，所述引物的反向序列如SEQIDNO.2所示；或(2)FGL2免疫组化试剂盒，包括抗FGL2蛋白单抗，酶标二抗及显色剂；或(3)蛋白印迹试剂盒，包括固相载体、抗FGL2蛋白单抗、酶标二抗及显色底物。进一步，所述基于染料法的FGL2mRNA实时定量检测试剂盒还包括内参引物，所述内参引物的上游引物如SEQIDNO.3所示，下游引物如SEQIDNO.4所示。2、调控FGL2基因或FGL2蛋白表达下调的物质在制备治疗肾癌药物中的应用。3、检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在筛选治疗肾癌的药物中的应用。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用，根据该物质对FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的检测结果，可以对肾癌进行早期诊断或者对肾癌预后作出预测，在减少肾癌患者死亡率和改善生活质量方面具有重要的意义。本专利技术还提供了调控FGL2基因或FGL2蛋白表达下调的物质在制备治疗肾癌药物中的应用，该药物一方面可以从阻断内源性FGL2蛋白的过多表达和分泌及减弱FGL2蛋白的活性两方面来治疗因FGL2蛋白过表达介导的肾癌。另外，本专利技术还提供了检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在筛选治疗肾癌的药物中的应用，通过该物质对癌细胞添加测试药物后或在对肿瘤模型动物施用测试药物后的某个时期检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平来测定抗肿瘤药物的治疗效果，从而筛选出能治疗肾癌的有效药物。附图说明为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：图1为癌组织及对应癌旁组织中FGL2mRNA表达水平对比图；图2为利用ImageJ软件分析癌组织及癌旁组织中FGL2蛋白条带灰度图；图3为显微镜下(放大倍数为200倍)癌组织及癌旁组织中FGL2蛋白表达水平对比图；图4为利用Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析FGL2蛋白表达水平与肾细胞癌患者生存率之间的关系图。具体实施方式下面将对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例1检测肾癌组织中FGL2mRNA表达水平1、材料选取13例肾癌患者癌组织及对应癌旁组织，取样来源于重庆西南医院2015年10月到2015年12月期间行肾全切或部分切除的肾癌患者(病理确诊)，手术切除后立即分离肾癌及癌旁组织，编号后放入液氮保存。2、提取组织样本中RNA采用Trizol(Takara，货号9109)法提取组织中RNA实验操作按产品说明书进行，具体操作如下：(1)将13例肾癌患者癌组织及对应癌旁组织样本分别放入已用液氮预冷的研钵中研磨成粉末状，分别收集于容量为1.5mL无RNA酶离心管中：(2)分别向步骤(1)中无RNA酶离心管中加入1mLTrizol，18-25℃下放置10分钟；(3)分别向步骤(2)无RNA酶离心管中加入0.2mL氯仿，用力振荡15s，充分混匀后18-25℃下静置10分钟；(4)将步骤(3)中各离心管以12000rpm高速离心15分钟后吸取上层水相(约400ul)到对应的另一新的容量为1.5mL无RNA酶离心管中，分别加入等体积的异丙醇(约400ul)，充分颠倒混匀，冰上静置10分钟；(5)将步骤(4)中加入异丙醇的各离心管以12000rpm高速离10分钟后弃去上清，分别加入1ml体积分数为75％的DEPC乙醇洗涤沉淀，轻轻震荡，4℃下以7500rpm离心5分钟；(6)弃去步骤(5)中各离心管中乙醇后18-25℃下放置5分钟以充分晾干沉淀，再分别加入DEPC处理过的水溶解沉淀，获得各样本的RNA；3、RNA浓度、纯度检测分别取各离心管中RNA2ul，利用Nanodrop2000紫外分光光度计测量，13例肾癌患者癌组织及对应癌旁组织样本的RNAOD260/OD280值见表1，由表1可知，所提取的13例肾癌患者癌组织及对应癌旁组织样本的RNA纯度高、杂质少。将各样本RNA置于-20℃下保存。表113例肾癌患者癌组织及对应癌旁组织样本的RNAOD260/OD280值4、逆转录采用PrimeScriptTMRTreagentKit(Takara，货号RR047A)进行cDNA反转录，具体操作如下：(1)取各样本的RNA1ul分别加入逆转录缓冲液，采用20μL反应体系。具体如下表：试剂剂量(ul)gDNAEraser1gDNAEr本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测FGL2基因或FGL2蛋白表达水平的物质在诊断和预示肾癌产品中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述诊断和预示具体为：肾癌的发生、TNM分期的判断、治疗效果的动态监测和预后判断。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测FGL2基因表达水平的物质包含能够特异性扩增FGL2基因的引物，所述引物的正向序列如SEQIDNO.1所示；所述引物的反向序列如SEQIDNO.2所示。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测FGL2蛋白表达水平的物质包含可以特异性结合所述FGL2蛋白的抗体或所述抗体的片段。5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂盒、芯片、试纸或高通量测序平台中的一种。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂盒为...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐铭，曹漵，张克勤，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：重庆,50