一种绿藻多糖及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种绿藻多糖及其制备方法，本发明专利技术的绿藻多糖是以α‑L‑(1,3)‑连接的鼠李糖和α‑L‑(1,2)‑连接的鼠李糖为主链，β‑D‑葡萄糖醛酸位于支链的一种结构新颖的海洋硫酸多糖。本发明专利技术的绿藻多糖具有明显抗凝血活性、纤溶和溶栓活性以及降血糖降血脂活性，可用于制备抗凝血和降血糖药物及保健食品。本发明专利技术的绿藻多糖来源于天然海藻，对人体无毒副作用，可以通过添加各种附剂制成片剂、散剂、颗粒剂、胶囊等作为预防和治疗血栓栓塞性疾病的抗凝血药物以及预防和治疗糖尿病的降血糖药物，将具有良好的市场应用前景。

Green algae polysaccharide and preparation method thereof

The invention discloses a green alga polysaccharide and its preparation method, the invention of the green algae polysaccharides with alpha L (1,3) and alpha L rhamnose connection rat (1,2) linked rhamnose backbone, sulfated polysaccharide a beta D glucose in the novel branched chain acid. The green alga polysaccharide of the invention has obvious anticoagulant activity, fibrinolytic and thrombolytic activity, hypoglycemic and hypolipidemic activity, and can be used for preparing anticoagulant and hypoglycemic drugs and health-care food. The invention of the green algae polysaccharides derived from natural seaweed, toxic side effects on the human body, can add a variety of agent tablet, powder, granules, capsules and other as anticoagulant drugs and the prevention and treatment of diabetes hypoglycemic drugs for prevention and treatment of thromboembolic disease, will have the good market application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种绿藻多糖及其制备方法
本专利技术涉及海洋生物多糖
，具体来说涉及一种绿藻多糖及其制备方法。
技术介绍
海藻自古就在我国沿海民间直接用作药材医治各种疾病，有关海藻中有效成分的分离及其化学组成的研究，始于上世纪50年代中期。至今，从海藻中分离出的各种化合物中，多糖类化合物占有重要地位。多糖作为海藻细胞结构的主要支撑物质，大量存在于其细胞壁和细胞间质中。由于海藻多糖独特的结构和性质，引起人们的广泛关注。有关海藻多糖的化学组成、结构和生物活性已被大量研究。但是，这些研究主要集中于来自于各种褐藻和红藻的多糖，而有关绿藻中的多糖的研究极少。目前，绿藻多糖的研究主要集中于绿藻中的石莼属、松藻属、浒苔属、礁膜属、蕨藻属和刚毛藻属中的藻类，其化学组成和结构随着绿藻种类的不同而不同，已有资料表明这些多糖主要分为两类：木糖-阿拉伯糖-半乳糖聚合物，这类多糖以阿拉伯糖和半乳糖为主要组分，并含有较高的硫酸根，其代表藻类为松藻、蕨藻和刚毛藻等；葡萄糖醛酸-木糖-鼠李糖聚合物，此类多糖以鼠李糖、木糖和葡萄糖醛酸为主要组分，代表藻属为石莼、礁膜、浒苔和顶管藻等。由于绿藻多糖结构的复杂性和不均一性，大大限制了对其深入研究。迄今尚未见有关从绿藻中提取分离到由葡萄糖醛酸和鼠李糖为组成单元、且葡萄糖醛酸位于支链的硫酸多糖的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种绿藻多糖及其制备方法，本专利技术的绿藻多糖是以α-L-(1,3)-连接的鼠李糖和α-L-(1,2)-连接的鼠李糖为主链，β-D-葡萄糖醛酸位于支链的一种结构新颖的海洋硫酸多糖。本专利技术的绿藻多糖具有明显抗凝血活性、纤溶和溶栓活性以及降血糖降血脂活性，可用于制备抗凝血和降血糖药物及保健食品。为此，本专利技术提供了一种绿藻多糖，所述绿藻多糖是由鼠李糖和葡萄糖醛酸组成的一种硫酸多糖，其中，鼠李糖的摩尔百分比为96.12％，葡萄糖醛酸的摩尔百分比为3.88％；所述绿藻多糖的主链由α-L-(1,3)-连接的鼠李糖和α-L-(1,2)-连接的鼠李糖组成，α-L-(1,3)-连接的鼠李糖和α-L-(1,2)-连接的鼠李糖的摩尔比为5：3，在α-L-(1,3)-连接的鼠李糖的C2位存在支链；所述绿藻多糖的支链由α-L-(1,3)-连接的鼠李糖和末端连接的β-D-葡萄糖醛酸组成，β-D-葡萄糖醛酸位于支链的非还原端，β-D-葡萄糖醛酸与鼠李糖之间以1,3糖苷键连接；所述绿藻多糖的结构分子式如式Ⅰ所示，其中，n＝30，m＝0-5，R1＝H或SO3H，R2＝H或SO3H，R3＝H或SO3H，R4＝H或SO3H；本专利技术还提供了绿藻多糖的制备方法，所述方法包括如下步骤：(1)向干燥的袋礁膜中加水浸泡形成匀浆，在20℃-24℃下提取0.5-4小时，分离出清液；其中，水的质量为袋礁膜质量的10-60倍；(2)将所得清液减压浓缩、脱盐得到第一多糖溶液，将所述第一多糖溶液减压浓缩、干燥得到多糖，将所述多糖加水溶解得到第二多糖溶液，所述第二多糖溶液中所述多糖的质量分数为0.1％-6％；(3)将所述第二多糖溶液通过离子交换色谱柱分离和凝胶色谱柱分离，然后减压浓缩、脱盐，将脱盐后的溶液减压浓缩、干燥，得到所述绿藻多糖。与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果是：本专利技术提供了一种绿藻多糖及其制备方法，本专利技术的绿藻多糖是以α-L-(1,3)-连接的鼠李糖和α-L-(1,2)-连接的鼠李糖为主链，β-D-葡萄糖醛酸位于支链的一种结构新颖的海洋硫酸多糖。本专利技术的绿藻多糖具有明显抗凝血活性、纤溶和溶栓活性以及降血糖降血脂活性，可用于制备抗凝血和降血糖药物及保健食品。本专利技术的绿藻多糖来源于天然海藻，对人体无毒副作用，可以通过添加各种附剂制成片剂、散剂、颗粒剂、胶囊等作为预防和治疗血栓栓塞性疾病的抗凝血药物以及预防和治疗糖尿病的降血糖药物，将具有良好的市场应用前景。结合附图阅读本专利技术的具体实施方式后，本专利技术的其他特点和优点将变得更加清楚。附图说明图1是所述绿藻多糖的纯度测定的高效凝胶渗透色谱和葡聚糖标准品的分子量对数对保留时间(高效凝胶渗透色谱法测定)绘制的标准曲线及其回归方程；图2是本专利技术所述绿藻多糖的单糖组成测定的柱前衍生高效液相色谱；图3是本专利技术所述绿藻多糖中单糖的绝对构型测定的柱前衍生高效液相色谱；图4是本专利技术所述绿藻多糖的红外光谱；图5是本专利技术所述绿藻多糖脱硫后的1HNMR谱；图6是本专利技术所述绿藻多糖脱硫后的13CNMR谱；图7是本专利技术所述绿藻多糖脱硫后的1H-1HCOSY谱；图8是本专利技术所述绿藻多糖脱硫后的1H-13CHSQC谱；图9是本专利技术所述绿藻多糖脱硫后的1H-13CHMBC谱；图10是本专利技术所述绿藻多糖的1HNMR谱；图11是本专利技术所述绿藻多糖的13CNMR谱；图12是本专利技术所述绿藻糖的1H-1HCOSY谱；图13是本专利技术所述绿藻多糖的1H-13CHSQC谱；图14是本专利技术所述绿藻多糖的1H-1HNOESY谱；图15是本专利技术所述绿藻多糖经降解得到的寡糖在凝胶色谱柱Bio-GelP4的分离纯化图；图16是本专利技术所述绿藻多糖经降解得到的寡糖组分S1的ESI-MS谱；图17是本专利技术所述绿藻多糖经降解得到的寡糖组分S2的ESI-MS谱；图18是本专利技术所述绿藻多糖经降解得到的寡糖组分S3的ESI-MS谱；图19是本专利技术所述绿藻多糖经降解得到的寡糖组分S4的ESI-MS谱；图20是本专利技术所述绿藻多糖经降解得到的寡糖组分S1的碎片离子m/z243的ESI-CID-MS/MS谱和质谱断裂模式示意图；图21是本专利技术所述绿藻多糖经降解得到的寡糖组分S2的碎片离子m/z389的ESI-CID-MS/MS谱和质谱断裂模式示意图；图22是本专利技术所述绿藻多糖经降解得到的寡糖组分S2的碎片离子m/z339的ESI-CID-MS/MS谱和质谱断裂模式示意图；图23是本专利技术所述绿藻多糖经降解得到的寡糖组分S3的碎片离子m/z485的ESI-CID-MS/MS谱和质谱断裂模式示意图；图24是本专利技术所述绿藻多糖经降解得到的寡糖组分S4的碎片离子m/z419的ESI-CID-MS/MS谱和质谱断裂模式示意图；图25是本专利技术所述绿藻多糖经降解得到的寡糖组分S4的碎片离子m/z565的ESI-CID-MS/MS谱和质谱断裂模式示意图；图26是本专利技术所述绿藻多糖对大鼠血浆纤维蛋白(原)降解产物含量的影响；统计学意义：**p<0.01，与空白组比较；##p<0.01，与尿激酶组比较；图27是本专利技术所述绿藻多糖对大鼠血浆D-二聚体含量的影响；统计学意义：**p<0.01，与空白组比较；##p<0.01，与尿激酶组比较；图28是本专利技术所述绿藻多糖对大鼠血浆纤溶酶原激活抑制物水平的影响；统计学意义：*p<0.05，**p<0.01，与空白组比较；##p<0.01，与尿激酶组比较；图29是本专利技术所述绿藻多糖的体外血凝块溶解率分析结果；统计学意义：**p<0.01，与空白组比较；#p<0.05，##p<0.01，与尿激酶组比较；图30是本专利技术所述绿藻多糖对HepG2细胞葡萄糖消耗能力的影响；统计学意义：**p<0.01，与空白组比较；图31是本专利技术所述绿藻多糖对棕榈酸诱导的胰岛素抵抗HepG2细胞葡本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种绿藻多糖，其特征在于，所述绿藻多糖是由鼠李糖和葡萄糖醛酸组成的一种硫酸多糖，其中，鼠李糖的摩尔百分比为96.12％，葡萄糖醛酸的摩尔百分比为3.88％；所述绿藻多糖的主链由α‑L‑(1,3)‑连接的鼠李糖和α‑L‑(1,2)‑连接的鼠李糖组成，α‑L‑(1,3)‑连接的鼠李糖和α‑L‑(1,2)‑连接的鼠李糖的摩尔比为5：3，在α‑L‑(1,3)‑连接的鼠李糖的C2位存在支链；所述绿藻多糖的支链由α‑L‑(1,3)‑连接的鼠李糖和末端连接的β‑D‑葡萄糖醛酸组成，β‑D‑葡萄糖醛酸位于支链的非还原端，β‑D‑葡萄糖醛酸与鼠李糖之间以1,3糖苷键连接；所述绿藻多糖的结构分子式如式Ⅰ所示，其中，n＝30，m＝0‑5，R1＝H或SO3H，R2＝H或SO3H，R3＝H或SO3H，R4＝H或SO3H；

【技术特征摘要】
1.一种绿藻多糖，其特征在于，所述绿藻多糖是由鼠李糖和葡萄糖醛酸组成的一种硫酸多糖，其中，鼠李糖的摩尔百分比为96.12％，葡萄糖醛酸的摩尔百分比为3.88％；所述绿藻多糖的主链由α-L-(1,3)-连接的鼠李糖和α-L-(1,2)-连接的鼠李糖组成，α-L-(1,3)-连接的鼠李糖和α-L-(1,2)-连接的鼠李糖的摩尔比为5：3，在α-L-(1,3)-连接的鼠李糖的C2位存在支链；所述绿藻多糖的支链由α-L-(1,3)-连接的鼠李糖和末端连接的β-D-葡萄糖醛酸组成，β-D-葡萄糖醛酸位于支链的非还原端，β-D-葡萄糖醛酸与鼠李糖之间以1,3糖苷键连接；所述绿藻多糖的结构分子式如式Ⅰ所示，其中，n＝30，m＝0-5，R1＝H或SO3H，R2＝H或SO3H，R3＝H或SO3H，R4＝H或SO3H；2.如权利要求1所述的绿藻多糖，其特征在于，所述绿藻多糖的平均分子量为58.4千道尔顿。3.如权利要求1所述的绿藻多糖，其特征在于，17.77％的α-L-(1,3)-连接的鼠李糖被硫酸化形成硫酸基并位于α-L-(1,3)-连接的鼠李糖的C2位，4.15％的α-L-(1,2)-连接的鼠李糖被硫酸化形成硫酸基并位于α-L-(1,2)-连接的鼠李糖的C3位。4.如权利要求1所述的绿藻多糖，其特征在于，在所述绿藻多糖的糖链中，每10个鼠李糖基中存在一个支链。5.一种如权利要求1-4中任一项所述的绿藻多糖的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)向干燥的袋礁膜中加水浸泡形成匀浆，在20℃-24℃下提取0.5-4小时，分离出清液；其中，水的质量为袋礁膜质量的10-...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛文君，刘雪，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东,37