The present invention relates to a new method for delivering analytes to a transmembrane hole in a membrane. The method relates to the use of particles.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】向跨膜孔输送分析物的方法
本专利技术涉及向膜中的跨膜孔输送分析物的新方法。所述方法涉及微粒的使用。
技术介绍
目前需要一种具有广泛的应用范围的快速且便宜的多核苷酸(例如,DNA或RNA)测序和识别技术。现有技术缓慢且昂贵,主要是因为其依赖于扩增技术来制备大量的多核苷酸,并且需要大量专门的荧光化学品用于信号检测。作为聚合物和各种小分子的直接电生物传感器,跨膜孔(纳米孔)具有巨大潜力。特别是作为潜在的DNA测序技术,纳米孔最近受到关注。当跨纳米孔施加电势时,分析物如核苷酸在桶中短暂停留一段时间时,会产生电流的变化。对核苷酸进行纳米孔检测产生已知特征和持续时间的电流变化。在“链测序”方法中,单个多核苷酸链穿过所述孔并实现对核苷酸的鉴定。链测序可涉及使用多核苷酸结合蛋白来控制多核苷酸穿过所述孔的移动。之前已经证明,通过将分析物的偶联到存在相关检测器的膜可以实现超低浓度分析物的输送。这样可以将进行检测所需的分析物的量降低几个数量级(WO2012/164270)。
技术实现思路
专利技术人已经出乎意料地证明可以使用微粒来提高向膜中的跨膜孔输送分析物的效率。所述微粒使得利用跨膜孔进行检测所需的分析物的量降低了几个数量级。因此,本专利技术提供一种向膜中的跨膜孔输送分析物的方法,包括(a)提供连接到微粒的分析物;和(b)将所述微粒输送向所述膜,并由此向所述跨膜孔输送所述分析物。本专利技术还提供:-一种表征多核苷酸分析物的方法,包括(a)在多核苷酸分析物上实施本专利技术的所述方法;(b)使多核苷酸与跨膜孔相互作用,使得所述多核苷酸移动穿过所述孔;和(c)随着所述多核苷酸相对于所述 ...
【技术保护点】
一种向膜中的跨膜孔输送分析物的方法,包括:(a)提供连接到微粒的分析物;和(b)将所述微粒输送给所述膜,并由此向所述跨膜孔输送所述分析物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.17 GB 1418469.11.一种向膜中的跨膜孔输送分析物的方法,包括:(a)提供连接到微粒的分析物;和(b)将所述微粒输送给所述膜,并由此向所述跨膜孔输送所述分析物。2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述方法用于向膜中的跨膜孔输送浓度增加的分析物。3.根据权利要求1或3所述的方法,其中,所述方法是通过向所述跨膜孔输送浓度增加的分析物来采用膜中的跨膜孔对分析物进行表征的改进方法。4.根据权利要求2或3所述的方法,其中,输送给所述跨膜孔的分析物的浓度优选增加至少约10倍。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,步骤(b)包括设置所述微粒靠近或邻近所述膜并使所述微粒向所述膜移动。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述方法包括(a)使所述微粒沿着电化学梯度、扩散梯度、亲水梯度或疏水梯度移动;(b)使所述微粒在磁场内移动;(c)使所述微粒在电场内移动;(d)使所述微粒在压力下移动;或(e)使所述微粒随重力移动。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述分析物暂时连接到所述微粒。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,2个或更多个、3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、20个或更多个、30个或更多个、50个或更多个、100个或更多个、500个或更多个、1,000个或更多个、5,000个或更多个、10,000个或更多个、100,000个或更多个、1,000,000个或更多个或者5,000,000个或更多个分析物连接到所述微粒。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述分析物包含一个或多个能够偶联到所述膜的锚定体。10.根据权利要求9所述的方法,其中,所述方法还包括使用所述一个或多个锚定体将所述分析物偶联到所述膜。11.根据权利要求9或10所述的方法,其中,所述一个或多个锚定体包含多肽锚定体和/或疏水锚定体。12.根据权利要求11所述的方法,其中,所述疏水锚定体包含脂质、脂肪酸、固醇、碳纳米管或氨基酸。13.根据权利要求9至12中任一项所述的方法,其中,所述一个或多个锚定体包含连接体。14.根据权利要求9至12中任一项所述的方法,其中,所述分析物暂时偶联到所述膜。15.根据权利要求7或14所述的方法,其中,所述分析物通过杂交连接到所述微粒和/或所述一个或多个锚定体通过杂交连接到所述分析物。16.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述膜是两亲层或固态层。17.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述微粒由陶瓷、玻璃、二氧化硅、聚合物或金属形成。18.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述微粒直径为500μm或更小。19.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述微粒是磁性的。20.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述跨膜孔是跨膜蛋白孔。21.根据权利要求20所述的方法,其中,所述跨膜蛋白孔衍生自耻垢分枝杆菌孔蛋白(Msp)、α-溶血素(α-HL)或胞溶素。22.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述分析物是聚合物。23.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述分析物是多核苷酸。24.根据权利要求23所述的方法,其中,所述方法用于向膜中的跨膜孔输送浓度增加的多核苷酸。25.根据权利要求22或23所述的方法,其中,所述方法是通过向所述跨膜孔输送浓度增加的多核苷酸来采用膜中的跨膜孔对所述多核苷酸进行表征或测序的改进方法。26.一种表征多核苷酸的方法,包括(a)实施根据权利要求23至25中任一项所述的方法;(b)使多核苷酸与跨膜孔相互作用,使得所述多核苷酸移动穿过所述孔;和(c)随着所述...
【专利技术属性】
技术研发人员:克莱夫·布朗,丹尼尔·赖安·加拉尔达,安迪·赫伦,丹尼尔·约翰·特纳,詹姆斯·怀特,
申请(专利权)人:牛津纳米孔技术公司,
类型:发明
国别省市:英国,GB
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。