一种细胞内环境下蛋白质相互作用组学的分析方法技术

本发明专利技术公开了一种细胞内环境下蛋白质相互作用组学的分析方法，将静电纺丝技术与生物质谱技术相结合，首先利用静电纺丝技术为MALDI质谱分析制备大量所需样品，然后使用蛋白质组学数据库对所得数据进行检索分析，明确各样品颗粒内蛋白质的组成成分，最后利用蛋白质组学数据统计分析软件对各样品颗粒内蛋白质的组成成分进行统计，明确细胞内不同种蛋白质相互作用的几率，最终为构建细胞内各生物分子间的三维相互作用图提供云数据支持。本发明专利技术方法操作简便，可实现高通量检测分析，不需要使研究物种被基因修饰，克服了一般质谱方法灵敏度低和需要基质分子促使分析对象发生离子化的缺陷。

Proteomic analysis method for protein-protein interaction in an intracellular environment

The invention discloses a cellular environment interactomics analysis method, the electrospinning technology and biological mass spectrometry technology combined with the first preparation of a large number of samples required for MALDI mass spectrometry analysis by electrospinning technique, and then use proteomics database retrieval and Analysis on the collected data, clear the composition of each particle a sample of protein, finally the protein group statistical data analysis software components of the sample particles within the protein, clear cells of different probability of protein interactions, and ultimately provide cloud data support for the construction of 3D interaction diagrams of various biological molecules between cells. The method of the invention has the advantages of simple operation, can realize the analysis of high-throughput detection, do not need to study species that have been genetically modified, to overcome the general method of low sensitivity and mass matrix molecules prompted the defect analysis of objects of ionization.

【技术实现步骤摘要】
一种细胞内环境下蛋白质相互作用组学的分析方法
本专利技术属于蛋白质组学
，具体涉及一种细胞内环境下蛋白质相互作用组学的分析方法。
技术介绍
相互作用组学的研究对象是特定细胞内部所发生直接相互作用的蛋白，这些蛋白质往往通过非共价作用相互吸引。相互作用组学(interactomics)目前的实验数据来源主要是来自酵母双杂交(yeasttwohybrid,Y2H)或者亲和纯化与质谱联用技术(Affinitypurification/massspectrometry,AP/MS)。这两种技术目前虽然可以以所谓高通量的方法开展，但是具有非常明显的局限性。酵母双杂交技术是基于酵母表达系统的通过基于一对重组蛋白的相互作用导致报告基因表达的一项生物技术。这项技术虽然较亲和纯化与质谱联用技术有更大的通量，但是存在以下缺陷：1)异源重组蛋白在酵母表达系统中的折叠环境与原有系统差异很大，如分子伴侣系统不同，定位的信号不能被识别，通常会因为折叠错误而导致假阳性和假阴性；2)酵母双杂交技术是简单的把基因组编码的所有蛋白强制性的成对的检验可能的相互作用，完全没有考虑蛋白的表达在细胞中受到空间和时间上的严格本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞内环境下蛋白质相互作用组学的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，待分析蛋白样品的获取：将细胞或菌体破碎、离心、沉淀后得到待分析蛋白样品；步骤2，含氟聚合物的多孔硅基底的制备：以N，N‑二甲基甲酰胺和丙酮的混合溶液作为纺丝溶剂，然后将聚偏氟乙烯溶于纺丝溶剂中得到纺丝溶液，再将纺丝溶液进行静电纺丝，以多孔硅材料为接收装置，纺丝结束后真空干燥，得到含氟聚合物的多孔硅基底；步骤3，待分析蛋白样品颗粒的制备：将聚乳酸‑羟基乙酸共聚物溶于有机溶剂中配制纺丝溶剂，将步骤1得到的待分析蛋白样品溶于纺丝溶剂中得到纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，以步骤2制备的含氟聚合物的多孔硅基底为接收装置，得到铺...

【技术特征摘要】
1.一种细胞内环境下蛋白质相互作用组学的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，待分析蛋白样品的获取：将细胞或菌体破碎、离心、沉淀后得到待分析蛋白样品；步骤2，含氟聚合物的多孔硅基底的制备：以N，N-二甲基甲酰胺和丙酮的混合溶液作为纺丝溶剂，然后将聚偏氟乙烯溶于纺丝溶剂中得到纺丝溶液，再将纺丝溶液进行静电纺丝，以多孔硅材料为接收装置，纺丝结束后真空干燥，得到含氟聚合物的多孔硅基底；步骤3，待分析蛋白样品颗粒的制备：将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于有机溶剂中配制纺丝溶剂，将步骤1得到的待分析蛋白样品溶于纺丝溶剂中得到纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，以步骤2制备的含氟聚合物的多孔硅基底为接收装置，得到铺排于含氟聚合物的多孔硅材料基底的待分析蛋白样品颗粒；步骤4，MALDI质谱分析：对步骤3制备的待分析蛋白样品颗粒进行MALDI质谱分析，得到各样品颗粒的质谱图数据；步骤5，将各样品颗粒获得的质谱图数据在蛋白质组学数据库中进行检索，确定样品颗粒内的蛋白质组成成分；步骤6，统计分析各蛋白质相互作用的几率：利用蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：周敏，刘丽婷，卢颖洪，王坤，
申请(专利权)人：南京理工大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32