一种人参果花青素的制备方法及用途技术

本发明专利技术公开了人参果花青素（Ginseng Fruit Anthocyanins，GFA）的制备方法及用途。通过将成熟的人参果挤压去除种子后，将果浆低温提取后，通过大孔树脂柱色谱，收集低浓度乙醇洗脱部分，浓缩至干燥即得在制备保护扑热息痛（APAP）诱导的急性肝损伤药物中的应用，属于医药产品研究开发领域。同时发现GFA能够有效减少对乙酰基氨基酚致小鼠肝损伤引起的血清ALT和AST水平上升，减少肝脏组织GSH和降低肝脏组织MDA含量。因此，可以把该花青素制备成预防急性肝损伤的药物。其药物形式可以是现有的任何剂型，如片剂，胶囊剂，粉针剂，注射剂，丸剂，软胶囊，颗粒剂和贴剂等。

Preparation method and application of ginseng fruit anthocyanin

The present invention discloses ginseng fruit anthocyanin (Ginseng Fruit Anthocyanins, GFA) of the preparation method and application thereof. The mature ginseng fruit squeeze to remove the seeds, fruit pulp temperature after extraction by macroporous resin column chromatography, collected low concentration ethanol elution, concentrated to dry to be in the preparation of protection of paracetamol (APAP) application in acute liver injury induced by drugs, which belongs to the field of pharmaceutical research and development products. It was also found that GFA could effectively decrease the levels of serum ALT and AST caused by acetaminophen, and decrease the liver tissue GSH and MDA content in liver tissue. Therefore, the anthocyanin can be prepared into a drug for preventing acute liver injury. Its drug form can be any of the existing dosage forms, such as tablets, capsules, powder injections, injections, pills, soft capsules, granules and patches.

【技术实现步骤摘要】
一种人参果花青素的制备方法及用途
本专利技术公开了人参果花青素在制备预防急性肝损伤药物的新用途，属于中药中化合物的新生物活性的医药

技术介绍
对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)，又称扑热息痛，在临床上广泛用于镇痛和退热，APAP在治疗范围内是安全的，但过量摄入APAP会导致肝损伤。摄入过量APAP时，细胞中大量产生的NAPQI与GSH结合，导致GSH水平下降，大量产生的活性氧ROS以及硝基酪氨酸，从而影响细胞的能量生成和脂质代谢以及细胞的增殖、分化与凋亡。肝脏疾病是人类最常见的疾病之一，严重威胁人类的健康。急性肝损伤是肝病发生、发展以及恶化的基本途径，情况严重者甚至引发肝硬化、肝癌，因此开发治疗和预防肝脏疾病的药物显得尤为重要。保肝类西药治疗强、见效快，但很多化学药常有的严重不良反应和耐药性，植物药为植物或其提取物制成的药物，具有整体和多靶点治疗观念，在人类历史上被广泛用来预防、保健和治疗疾病，且植物药很少发生单一化学药物所常有的严重不良反应和耐药性，因此天然植物药对治疗肝病具有广阔的研究前景。花青素是一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，具有抗氧化、抗炎，抑菌，抗衰老、抗癌以及对肝脏，对心脑血管和视力的保护作用。人参来源于五加科植物人参(PanaxginsengC.A.Meyer)的干燥根及根茎，是我国传统的名贵中药材[11]。人参果是人参的成熟果实，含有人参皂苷、黄酮、多糖、生物碱、甾醇和挥发油等多种化学成分，其中皂苷及多糖含量最多且被人们深入研究，人参大部分化学成分具都有显著的药理活性，在对肝保护作用方面均有显著影响。人参果花青素(Ginsengfruitanthocyanins,GFA)是从人参果中提取的类黄酮类成分，是一种水溶性色素，具有抗氧化、抗自由基等作用。目前为止，尽管人参皂苷类成分的肝损伤保护活性屡见报道，但有关人参果中花青素类成分是否具有保护肝损伤的药理作用尚不明确。本文从人参果花青素的抗氧化、抑制硝化应激，减少炎症反应及抑制细胞凋亡等机制证明人参果花青素对APAP诱导的小鼠肝损伤具有保护作用，为人参果花青素的临床应用提供一定的理论参考。
技术实现思路
本专利技术提供了人参果花青素在制备预防扑热息痛（APAP）诱导的急性肝损伤药物中的应用。本专利技术所述的人参果花青素在用于上述用途时，其口服或胃肠外给药，均是安全的，在口服情况下，其可以以任何常规的形式给药，如片剂，胶囊剂，粉针剂，注射剂，丸剂，软胶囊，颗粒剂和贴剂等。本专利技术制备保护急性肝损伤药物是由有效成分与固体或液体的赋形剂一起构成的，这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的，下面举几个例子，散剂是内服的粉末剂，它的赋形剂有乳糖，淀粉，糊精，碳酸钙，合成或天然硫酸铝，氧化镁，硬脂酸镁，碳酸氢钠，干燥酵母等；溶液剂的赋形剂有水，甘油，1，2-丙二醇，单糖浆，乙醇，乙二醇，聚乙二醇，山梨糖醇等；软膏剂的赋形剂可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂蜡、木蜡、液体石蜡等组合成的疏水剂或亲水剂。本专利技术的药物组合物可以按现有技术中已知的方法如混合、制粒、压片来制备。本专利技术药物组合物还可以包括各种药学使用的任何组分，如香味剂、着色剂、甜味剂等。本专利技术可以通过下面的实验例进一步说明。实验例1.人参果花青素的制备方法1.1人参果花青素制备方法采用如下步骤：首先，将成熟的人参果，通过机器挤压分离果肉和种子，将果肉按100:0.5加入NaCO3，充分混匀，静置72小时以上。将静置好的果肉投入提取罐，按12:1加入深井水或蒸馏水，加热至35~40℃，提取8~10小时，沉降净化10~16小时，过滤，稍浓缩至原液体积的80~90%为宜。将上述浓缩液注入大孔树脂柱进行吸附。用4倍柱体积的30~50%乙醇洗脱树脂柱，收集回收液，进一步沉降净化8~10小时，在35~45%下进行低温浓缩，分离乙醇，冷冻干燥12小时以上，取出即得人参果花青素。NaCO3能够有效去除人参果浆中的杂质，与不添加NaCO3比较，人参果花青素的收率提高15~20%。1.2人参果花青素成分分析通过分析：人参果花青素以原花青素为主，主要为儿茶素、表儿茶素及形成的二聚体，此外尚含少量黄酮类成分，如人参黄酮苷(Panasenoside)实验例2.人参果花青素对扑热息痛致小鼠肝损伤的保护作用1材料与方法1.1动物:雄性ICR小鼠，SPF级，5~6周，体重20~22g，购自长春市亿斯实验动物技术有限责任公司，合格证号：SCXK（吉）2011-0004，自由饮水，适应性饲养一周后随机分为4组后进行实验。材料仪器:人参果花青素，来自抚松安东参业有限公司；APAP（对乙酰氨基酚）源于阿拉丁试剂有限公司；苏木素-伊红染液（H&E），Hoechst33258染色液，上海碧云天生物技术有限公司；谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、丙二醛（MDA）及谷胱甘肽（GSH）试剂盒，购于南京建成生物工程有限公司；兔来源单克隆抗鼠诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、诱导型环氧化酶（COX-2）和3-硝基络氨酸（3-NT），购于美国CellSignalingTechnology公司；免疫组化试剂盒（SV0002）、免疫荧光试剂盒（SA1074），购于博士德生物技术有限公司；Hoechst33258染色试剂盒（C0003），碧云天。PL303电子天平，上海梅特勒-托利多仪器有限公司；显微镜LeicaDM500和LeicaDM2500荧光显微镜，德国徕卡；德国SPECTROstarNano全波长扫描式酶标仪，德国BMGLABTECH公司；高速冷冻离心机，北京昊特斯科技有限公司。方法1.3.1药物配制：称取GFA，加CMC-Na混悬至所需浓度（200mg/kg、400mg/kg）；称取APAP溶于热的生理盐水至所需浓度。动物分组及处理：ICR小鼠适应性饲养一周后随机分为4组，即空白对照组（Normal）、模型组（APAP）、GFA低剂量组（200mg/kg,APAP+GFA）、GFA高剂量组（400mg/kg,APAP+GFA），每组8只，GFA采用灌胃方式给药，空白对照组和模型组以等量生理盐水灌胃，一天一次，连续给药7天。末次给药后，禁食不禁水12小时后模型组按250mg/kg腹腔注射APAP，造模12小时后禁食不禁水，断颈处死。眼球取血，血液室温凝结1h后以3000rpm/10min离心，留取上清供血清指标ALT和AST检测。取肝脏组织溶于生理盐水中制成肝匀浆用于检测GSH和MDA水平，取相同部位的肝组织固定于10%甲醛中，用于肝组织切片观察病理变化。计算免疫器官指数：称取小鼠体质量和肝脏、脾脏质量，计算脏器指数。肝脏（脾脏）指数=肝脏(脾脏)质量/小鼠体质量1.3.4血清学指标：依照南京建成生物有限技术公司提供的试剂盒说明书，采用微板法检测血清中谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）肝功能指标。氧化应激指标：取冻存的肝组织，制备组织匀浆，取上清液，采用二硫代对硝基苯法和硫代巴比妥法试剂盒测定GSH和MDA的含量，按照试剂盒说明书进行操作。染色：将肝组织固定于10%甲醛中，石蜡包埋切片，将切片放入二甲苯中脱蜡30min，再放入无水乙醇中30min，依次放入95%、70%、50本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人参果花青素（Ginseng Fruit Anthocyanins）的制备方法，主要包括如下步骤：首先，将成熟的人参果，通过机器挤压分离果肉和种子，将果肉按100:0.5加入NaCO3，充分混匀，静置72小时以上，将静置好的果肉投入提取罐，按12:1加入深井水或蒸馏水，加热至35~40℃，提取8~10小时，沉降净化10~16小时，过滤，稍浓缩至原液体积的80~90%为宜，将上述浓缩液注入大孔树脂柱进行吸附，用4倍柱体积的30~50%乙醇洗脱树脂柱，收集回收液，进一步沉降净化8~10小时，在35~45%下进行低温浓缩，分离乙醇，冷冻干燥12小时以上，取出即得人参果花青素。

【技术特征摘要】
1.一种人参果花青素（GinsengFruitAnthocyanins）的制备方法，主要包括如下步骤：首先，将成熟的人参果，通过机器挤压分离果肉和种子，将果肉按100:0.5加入NaCO3，充分混匀，静置72小时以上，将静置好的果肉投入提取罐，按12:1加入深井水或蒸馏水，加热至35~40℃，提取8~10小时，沉降净化10~16小时，过滤，稍浓缩至原液体积的80~90%为宜，将上述浓缩液注入大孔树脂柱进行吸附，用4倍柱体积的30~50%乙醇洗脱树脂柱，收集回收液，进一步沉降净化8...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤立民，任素琴，李伟，乞振兰，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22