一种重组腺相关病毒及其应用制造技术

本发明专利技术适用于生物医药技术领域，提供了一种重组腺相关病毒及其应用。所述重组腺相关病毒由SelP‑H基因与腺病毒基因重组而成。本发明专利技术提供的重组腺相关病毒，由SelP‑H基因与腺病毒基因重组而成，所述重组腺相关病毒可在动物脑内特定区域稳定表达。重组腺相关病毒可以提高动物脑内尼氏小体的数量；降低患AD动物脑内GSK3β和磷酸化的蛋白水平，同时提高PP2A的表达量；提高神经突触相关蛋白的表达量。本发明专利技术实施例提供的重组腺相关病毒通过以上作用，起到调控脑内多种金属离子的含量和分布。

Recombinant adeno-associated virus and uses thereof

The invention is applicable to the technical field of biomedicine, and provides a recombinant adeno-associated virus and the use thereof. The recombinant adeno-associated virus by SelP H gene and adenovirus gene recombination and. The present invention provides a recombinant adeno-associated virus, by SelP H gene and adenovirus gene reorganization, the recombinant adeno-associated virus can be stably expressed in specific regions of the animal brain. Recombinant adeno-associated virus can increase the number of animal brain Nissl's body; reduce the protein level of patients with AD in animal brain GSK3 beta and phosphorylation, and enhance the expression of PP2A; to improve the expression of synapse related protein. The recombinant adeno-associated virus provided by the embodiment of the invention can regulate the content and distribution of a plurality of metal ions in the brain through the above actions.

【技术实现步骤摘要】
一种重组腺相关病毒及其应用
本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种重组腺相关病毒及其应用。
技术介绍
阿尔兹海默症(Alzheimer’sdisease,AD)是一种渐进性神经退行疾病，又称原发性老年痴呆症。AD的临床症状主要表现为渐进性记忆障碍、认知功能障碍和语言障碍等，是一种严重影响患病者社交与生活、给家庭和社会带来沉重负担的疾病。AD患者主要的病理特征为脑内观察到大量的老年斑(Senileplaque,SP)和神经纤维缠结(Neurofibrillarytangle,NFT)，相应地，AD病发目前最流行的是Aβ淀粉样蛋白级联假说和Tau蛋白异常磷酸化导致的神经纤维缠结假说。根据上述发病机理假说，近年来研究者对AD开发出不少新的药物和治疗方法，目前临床上的治疗方法主要有：影响胆碱系统功能药物(包括胆碱酯酶抑制剂、Ach受体激动剂)；脑血循环改善剂；脑代谢激活剂；纠正钙稳态失调、抗氧化、抗炎药物；神经营养因子等。这些药物治疗机制不明确，也不确定是否产生确切疗效，一部分甚至有很大的毒副作用。此外，这些药物大多只能缓解AD的表面症状，不能防止AD的迅速发展。而某些在基础研究中表现出防治AD作用的药物，又因为不易透过血脑屏障而预测不到应用前景。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种重组腺相关病毒及其应用。本专利技术是这样实现的，一种重组腺相关病毒，所述重组腺相关病毒由SelP-H基因与腺病毒基因重组而成。进一步地，所述腺病毒为9型重组腺相关病毒载体。进一步地，所述重组腺相关病毒基因中携带有绿色荧光蛋白基因。进一步地，所述重组腺相关病毒的碱基序列为如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提供了上述所述的重组腺相关病毒的应用，所述应用为将所述重组腺相关病毒用于制备防治阿尔茨海默症的药物或保健品。进一步地，所述药物或保健品中所述重组腺相关病毒的含量为500-2000PFU/mL。进一步地，所述药物或保健品用于调控阿尔茨海默症患者脑内金属离子的浓度。进一步地，所述金属离子包括Cu2+、Zn2+和Fe2+，所述Cu2+的浓度为200-400μmol/L，所述Zn2+的浓度为500-1500μmol/L，所述Fe2+的浓度为500-1500μmol/L。本专利技术还提供了上述所述的重组腺相关病毒的应用，所述应用为将所述重组腺相关病毒用于制备调控动物脑内金属离子的含量的片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸、散剂、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂或浸膏剂剂型的药物或保健品。本专利技术与现有技术相比，有益效果在于：本专利技术实施例提供的重组腺相关病毒，由SelP-H基因与腺病毒基因重组而成，所述重组腺相关病毒可在动物脑内特定区域稳定表达。重组腺相关病毒可以提高动物脑内尼氏小体的数量；降低患AD动物脑内GSK3β和磷酸化的蛋白水平，同时提高PP2A的表达量；提高神经突触相关蛋白的表达量。本专利技术实施例提供的重组腺相关病毒通过以上作用，起到调控脑内多种金属离子的含量和分布。附图说明图1是本专利技术实施例2提供的重组腺相关病毒在小鼠海马区的感染效果的结果示意图；图2是本专利技术实施例3提供的Morris水迷宫检测的SelP-H对AD模型小鼠的空间探索和记忆能力的影响的结果示意图；图3是本专利技术实施例4提供的以硫黄素T染色检测的SelP-H对AD模型小鼠脑内老年斑数量的影响的结果示意图；图4是本专利技术实施例5提供的以尼氏染色检测的SelP-H对AD模型小鼠脑内神经元功能的影响的结果示意图；图5是本专利技术实施例6提供的通过ICP-MS检测的SelP-H对AD模型小鼠脑内金属离子含量的影响的结果示意图，其中图5a是关于锌离子，图5b是关于铁离子，图5c是关于锰离子，图5d是关于钒离子。图6是本专利技术实施例7提供的通过XRF检测SelP-H对AD模型小鼠脑内金属离子含量和分布的影响的结果示意图；图7是本专利技术实施例8提供的以免疫印迹检测SelP-H对AD模型小鼠脑内tau蛋白过度磷酸化状况的影响(GSK3β，PP2A，磷酸化tau)的结果示意图，其中图7a是与tau蛋白磷酸化相关的蛋白的WB条带，图7b是对AD模型小鼠脑内对ptau404的影响的结果示意图，图7c是对AD模型小鼠脑内对ptau-422的影响的结果示意图，图7d是对AD模型小鼠脑内对GSK3β的影响的结果示意图，图7e是对AD模型小鼠脑内对PP2A的影响的结果示意图；图8是本专利技术实施例9提供的以免疫印迹检测SelP-H对AD模型小鼠脑内突触相关蛋白及脑源性生长因子(BDNF)的影响的结果示意图，其中图8a是突触功能相关蛋白的WB条带，图8b是对AD模型小鼠脑内对PSD95的影响的结果示意图，图8c是对AD模型小鼠脑内对Synaptophysin-1的影响的结果示意图，图8d是对AD模型小鼠脑内对BDNF的影响的结果示意图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提供了一种重组腺相关病毒，所述重组腺相关病毒由SelP-H基因与腺病毒基因重组而成。本专利技术实施例提供的重组腺相关病毒，由SelP-H基因与腺病毒基因重组而成，所述重组腺相关病毒可在动物脑内特定区域稳定表达。重组腺相关病毒可以提高动物脑内尼氏小体的数量；降低患AD动物脑内GSK3β和磷酸化的蛋白水平，同时提高PP2A的表达量；提高神经突触相关蛋白的表达量。本专利技术实施例提供的重组腺相关病毒通过以上作用，起到调控脑内多种金属离子的含量和分布。具体地，所述腺病毒为9型重组腺相关病毒载体(Recombinantadeno-associatedvirus9,rAAV9)。具体地，所述重组腺相关病毒的碱基序列如下：aggtttcagagcatattcctgtttatcaacaagaagaaaaccaaacagatgtctggactcttttaaatggaagcaaagatgacttcctcatatatgatagatgtggccgtcttgtatatcatcttggtttgcctttttccttcctaactttcccatatgtagaagaagccattaagattgcttactgtgaaaagaaatgtggaaactgctctctcacga。具体地，所述重组腺相关病毒基因中携带有绿色荧光蛋白基因。本专利技术实施例还提供了上述所述的重组腺相关病毒的应用，所述应用为将所述重组腺相关病毒用于制备防治阿尔茨海默症的药物或保健品。具体地，所述药物或保健品中所述重组腺相关病毒的含量为500-2000PFU(Plaque-formingunit，空斑形成单位)/mL，优选1000PFU/mL。具体地，所述药物或保健品用于调控阿尔茨海默症患者脑内金属离子的浓度。所述金属离子包括Cu2+、Zn2+和Fe2+，所述Cu2+的浓度为200-400μmol/L，优选393μmol/L，所述Zn2+的浓度为500-1500μmol/L，优选1055μmol/L，所述Fe2+的浓度为500-1500μmol/L，优选940μmol/L。经本研究表明，脑内金属离子代谢失衡与AD的发病密切。如Cu2+和Zn2+，可以诱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组腺相关病毒，其特征在于，所述重组腺相关病毒由SelP‑H基因与腺病毒基因重组而成。

【技术特征摘要】
1.一种重组腺相关病毒，其特征在于，所述重组腺相关病毒由SelP-H基因与腺病毒基因重组而成。2.如权利要求1所述的重组腺相关病毒，其特征在于，所述腺病毒为9型重组腺相关病毒载体。3.如权利要求1所述的重组腺相关病毒，其特征在于，所述重组腺相关病毒基因中携带有绿色荧光蛋白基因。4.如权利要求1所述的重组腺相关病毒，其特征在于，所述重组腺相关病毒的碱基序列为如SEQIDNO.1所示。5.如权利要求1至4任意一项所述的重组腺相关病毒的应用，其特征在于，所述应用为将所述重组腺相关病毒用于制备防治阿尔茨海默症的药物或保健品。6.如权利要求5所述的重组腺相关病毒的应用，其特征在于，所述药物或保健品中所述重组腺相关病毒的含量为500-...

【专利技术属性】
技术研发人员：都秀波，谭毅彬，刘琼，倪嘉缵，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东,44