球孢白僵菌菌株EHM-068及其应用制造技术

本发明专利技术涉及农作物害虫生物防治技术领域，具体涉及一种球孢白僵菌菌株EHM‑068及其应用。本发明专利技术提供的菌株已于2016年3月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.12110。本发明专利技术还提供了球孢白僵菌菌株EHM‑068在防治水稻二化螟和稻水象甲中的应用以及在制备杀虫剂中的应用。本发明专利技术提供的球孢白僵菌菌株EHM‑068能够同时对水稻二化螟和稻水象甲具有高致病力，大幅度提高对水稻二化螟和稻水象甲的防治效果。

Beauveria bassiana strain EHM 068 and its application

The present invention relates to the technical field of biological control of agricultural pests, in particular to a Beauveria bassiana strain EHM 068 and its application. The present invention provides strains have been preserved in general in March 30, 2016 China microbial center microbe preservation Management Committee for the preservation of CGMCC No.12110. The invention also provides a 068 Beauveria bassiana strain EHM in rice stem borer and rice water weevil and its application in the preparation of pesticide application. The invention provides a Beauveria bassiana strain EHM 068 can also have high pathogenicity to rice stem borer and rice water weevil, greatly improve the control effect of rice stem borer and rice water weevil.

【技术实现步骤摘要】
球孢白僵菌菌株EHM-068及其应用
本专利技术涉及农作物害虫生物防治
，尤其涉及一种球孢白僵菌菌株EHM-068及其应用。
技术介绍
二化螟(ChilosuppressalisWalker)，属鳞翅目，螟蛾科，俗名钻心虫、蛀心虫、蛀秆虫等，是我国水稻上危害最为严重的常发性害虫之一。二化螟除为害水稻外，还能为害茭白、玉米、高粱、甘蔗、油菜、蚕豆、麦类以及芦苇、稗、李氏禾等杂草。二化螟幼虫通过蛀害水稻叶鞘、心叶、稻茎等部位造成枯鞘、枯心苗、白穗等危害，在成熟期则会造成半枯穗状虫伤株，导致严重减产。二化螟一般可导致水稻减产5％-10％，严重的高达20％-30％。稻水象甲(LissorhoptrusoryzophilusKuschel)属鞘翅目，象虫科，沼泽象亚科，稻水象属，主要为害水稻等禾本科农作物的生长，其成虫啃食稻叶，幼虫蛀食稻根，具有危害时间长、繁殖传播速度快、抗药性和抗逆性强等特点。一般造成水稻减产15％-20％，严重的减产50％以上，甚至绝收，是水稻上重要检疫性害虫，严重影响水稻的生长发育及稻谷产量，稻水象甲已经成为我国水稻生产的一大潜在威胁，我国将其列为近年来重点加强防治的5个外来入侵生物之一。目前在水稻生产过程中对二化螟和稻水象甲的防治主要以化学药剂防治为主。但长期使用化学药剂不仅会使害虫对多种常用杀虫剂产生抗药性，致使二化螟和稻水象甲频繁爆发，进而导致用药量的不断增加。此外，化学药剂的施用还会对环境造成污染，不利于农业生产的可持续性发展。因此，寻找一种环保、无公害、高效且能同时防治两种水稻害虫的生物防治手段具有十分重要的意义。球孢白僵菌(BeauveriaBassiana)是一种丝状真菌，属半知菌亚门(Deuteromycotina)丝孢纲(Hyphomycetes)丛梗孢目(Moniliales)丛梗孢科(moniliaceae)白僵菌属(Beauveriaspp.)，是广谱性昆虫致病性真菌，主要进行无性繁殖，产生分生孢子，也可进行有性生殖产生子实体。白僵菌具有致病力强，能在寄主间形成流行病、不污染环境、易于规模化生产等优点，使得球孢白僵菌在农业生产过程中大范围应用于害虫的防治，是十分高效的微生物杀虫剂。球孢白僵菌存在一定的寄主专化性，有研究表明不同来源区域、不同寄主来源的菌株对靶标害虫的致病能力差异十分显著，不同菌株的致死时间(LT90)可相差数倍至数十倍。目前，在利用白僵菌进行田间害虫防治时，常因为针对不同靶标害虫生产相应的专化性菌种，在一定程度上造成了不便，不利于应用球孢白僵菌进行生物防治的进一步推广。有鉴于此，提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种能够同时对水稻害虫二化螟和稻水象甲具有高致病力的球孢白僵菌菌株EHM-068，该菌株能够大幅度提高对水稻害虫二化螟和稻水象甲的防治效果，并且该菌株的生物学特性良好，且环保无污染、不易产生抗药性。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种球孢白僵菌菌株EHM-068，所述球孢白僵菌菌株EHM-068，分类命名为球孢白僵菌(BeauveriaBassiana)，已于2016年3月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCCNo.12110。进一步地，所述球孢白僵菌菌株EHM-068的序列如SEQIDNO:1所示。进一步地，所述球孢白僵菌菌株EHM-068菌落培养初期表现为绒状，后期形成乳粉状的孢子层，孢子层厚度均匀，中心稍有凸起；菌丝透明，具有分隔和分支，无色光滑；分生孢子梗多呈瓶装，单生或簇生；分生孢子为单细胞，无色，呈球形或卵圆形，大小2-3μm×2-2.5μm。上述球孢白僵菌菌株EHM-068在防治二化螟中的应用。上述球孢白僵菌菌株EHM-068在防治稻水象甲中的应用。上述球孢白僵菌菌株EHM-068在制备杀虫剂中的应用。在球孢白僵菌孢子粉中加入分散剂、湿润剂、乳化剂、消泡剂、调节剂等中的一种或几种作为助剂，或吸附载体按一定比例混合后，制备成粉剂、可湿性粉剂、悬浮剂或微粒剂。杀虫剂中球孢白僵菌株EHM-068菌株的分生孢子的含量为40-100亿孢子/g菌剂。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：1.本专利技术提供的球孢白僵菌菌株EHM-068，能够同时对水稻二化螟和稻水象甲具有高致病力的球孢白僵菌菌株，大幅度提高且明显超过实验室原保存菌株(菌株XJ8)对水稻二化螟和稻水象甲的防治效果，并且该菌株的生物学特性良好，且环保无污染、不易产生抗药性。2.本专利技术提供的球孢白僵菌菌株EHM-068可用于制备杀虫剂，使用方便，对水稻的主要害虫二化螟和稻水象甲的防治效果好。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术提供的球孢白僵菌EHM-068的菌落形态图；图2为本专利技术提供的球孢白僵菌EHM-068的分生孢子形态图。具体实施方式下面将结合附图对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供的球孢白僵菌菌株EHM-068，分类命名为球孢白僵菌(BeauveriaBassiana)，已于2016年3月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCCNo.12110。实施例1球孢白僵菌菌株EHM-068的分离与鉴定(1)分离纯化将从吉林省公主岭市稻田内采集到的自然感染的稻水象甲成虫僵虫充分僵化后，将其体表上的白粉状物轻轻抖落至含有0.1％吐温-80灭菌水溶液的灭菌三角瓶中，充分震荡使白僵菌孢子均匀分散，取配好的孢子悬浮液进行梯度稀释后，用无菌涂布棒蘸取不同稀释倍数的白僵菌孢子液均匀涂布于PDA培养基平板上，置于温度为26℃、相对湿度为90％的环境下培养。当有单个菌落长出后，用无菌接种针挑取菌落转移至另一个新的PDA培养基平板上单独培养，继续培养确认无其他杂菌后，分离纯化完成。将得到的白僵菌菌株转入盛有PDA斜面培养基，在25℃、相对湿度为90％的下培养10-15天，待有大量分生孢子长出后，在4℃冷藏箱中保藏。(2)形态学鉴定：将分离到的球孢白僵菌EHM-068菌株接种在PDA平板上，26℃的条件下，培养观察菌落形态特征、产孢结构和孢子形状与大小。将分离到的球孢白僵菌EHM-068菌株接种在温度为26℃、相对湿度为95％的培养箱中培养15天，用0.1％吐温-80的水溶液冲洗平面，离心后重悬于0.1％吐温-80的水溶液中，稀释成1×107个/mL的孢子悬液，接种到PDA培养基平板后置于培养箱中培养，观察菌落形态特征、产孢结构和孢子形状与大小。图1为本专利技术提供的球孢白僵菌EHM-068的菌落形态图；图2为本专利技术提供的球孢白僵菌EHM-068的分生孢子形态图。如图1和图2所示，菌落逐渐本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种球孢白僵菌菌株EHM‑068，其特征在于，所述球孢白僵菌菌株EHM‑068已于2016年3月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.12110。

【技术特征摘要】
1.一种球孢白僵菌菌株EHM-068，其特征在于，所述球孢白僵菌菌株EHM-068已于2016年3月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.12110。2.根据权利要求1所述的球孢白僵菌菌株EHM-068，其特征在于，所述球孢白僵菌菌株EHM-068的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。3.根据权利要求1所述的球孢白僵菌菌株EHM-068，其特征在于，所述球孢白僵菌菌株EHM-068菌落培养初期表现...

【专利技术属性】
技术研发人员：田志来，朱晓敏，张强，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院，
类型：发明
国别省市：吉林,22