一种基于QCM-D技术检测纳米材料-蛋白冠外表面带电量的方法技术

本发明专利技术涉及一种基于QCM‑D技术检测纳米材料‑蛋白冠外表面带电量的方法。本发明专利技术利用带电荷的磷脂分子，制备成脂质体，在镀有二氧化硅的石英晶体芯片表面进行自组装修饰后，形成带电荷的磷脂双分子层薄膜。在与纳米材料‑蛋白冠复合物的结合作用下，能够检测到纳米材料‑蛋白冠复合物的外表面带电量。本发明专利技术的方法原理简单，操作简便，能直观地检测到纳米材料‑蛋白冠外表面的带电量强弱。

A method for detecting nano material protein crown QCM D technology based on the outer surface of the charge

The invention relates to a method for detecting nano material protein crown QCM D technology based on the outer surface of the charge. The invention uses the charged phospholipid molecule to prepare the liposome, and after the self decorated decoration of the quartz crystal chip surface coated with silicon dioxide, a charged phospholipid bilayer film is formed. In combination with nano protein crown complexes, can detect nano materials protein complexes of crown surface charge. The principle of the method of the invention is simple, easy to operate, can directly detect charge strength of nano materials protein on the outer surface of the crown.

【技术实现步骤摘要】
一种基于QCM-D技术检测纳米材料-蛋白冠外表面带电量的方法
本专利技术主要涉及检测纳米材料-蛋白冠外表面带电量的方法，属于耗散性石英晶体微天平检测方法的创新开发领域。
技术介绍
蛋白冠是纳米颗粒进入人体体液中，不可避免地与体液中蛋白结合，并在表面形成的特殊结构。在人体中，蛋白冠是影响纳米颗粒在人体中代谢的重要因素，因此蛋白冠的研究逐渐成为了人们的研究热点。蛋白在被纳米颗粒吸附形成蛋白冠后，可能产生多级结构的变化，目前人们运用圆二色光谱、FT-IR等一系列技术，能够研究被吸附的蛋白的二级结构变化，而对于三级结构的变化，依旧束手无策。QCM-D(耗散性石英晶体微天平)技术是一种高灵敏度的检测装置，利用电荷同性相斥、异性相吸的原理，通过蛋白具体的表面电荷分布情况，结合动态光散射、FCS等实验结果，能分析出蛋白在纳米颗粒表面的具体吸附形态。目前，关于基于QCM-D技术检测纳米材料-蛋白冠外表面带电量的技术专利技术尚未见报导。本专利技术基于QCM-D技术，利用蛋白质表面电荷分布不均匀这一特点，得以解决这一问题。
技术实现思路
为检测被纳米颗粒吸附的蛋白质的具体吸附形态，本专利技术利用蛋白质表面电本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于QCM‑D技术检测纳米材料‑蛋白冠外表面带电量的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)磷脂双分子薄膜的修饰：首先将洗净的石英晶体芯片装入QCM‑D仪器中，以100‑150μl/min的流速通入缓冲溶液，直到信号曲线平稳；将脂质体悬液用缓冲液稀释成0.05‑0.5mg/ml，以100‑150μl/min的流速通入，频率信号下降，直到再次平稳；2)将纳米材料与蛋白质在pH＝7.4的10mM Hepes缓冲液中混合，37℃下孵育1‑2h，制得充分结合的纳米材料‑蛋白冠复合物溶液；3)纳米材料‑蛋白冠外表面带电量检测：将pH＝7.4的10mM Hepes缓冲液以30‑50μl/min的流速通入Q...

【技术特征摘要】
1.一种基于QCM-D技术检测纳米材料-蛋白冠外表面带电量的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)磷脂双分子薄膜的修饰：首先将洗净的石英晶体芯片装入QCM-D仪器中，以100-150μl/min的流速通入缓冲溶液，直到信号曲线平稳；将脂质体悬液用缓冲液稀释成0.05-0.5mg/ml，以100-150μl/min的流速通入，频率信号下降，直到再次平稳；2)将纳米材料与蛋白质在pH＝7.4的10mMHepes缓冲液中混合，37℃下孵育1-2h，制得充分结合的纳米材料-蛋白冠复合物溶液；3)纳米材料-蛋白冠外表面带电量检测：将pH＝7.4的10mMHepes缓冲液以30-50μl/min的流速通入QCM-D仪器中，直到信号曲线平稳；再将步骤2)制得的充分结合的纳米材料-蛋白冠复合物溶液，以30-50μl/min的流速通入，观察频率信号的变化，从而检测出纳米材料-蛋白冠外表面带电量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所用缓冲液是pH＝7.4，150mM的NaCl和10mM的Tris-HCl溶液。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述脂质体悬液的制备方法包括以下步骤：(1)将磷脂用氯仿溶解，置于容器中，蒸发除去氯仿，即在容器壁形成一层脂质体膜；(2)用三次水将脂质体膜重悬，超声破碎，使溶液澄清透明；通过100nm的碳纤维滤膜，制得脂质体悬液；优选地，所述脂质体悬液的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈春英，王明哲，王新一，
申请(专利权)人：国家纳米科学中心，
类型：发明
国别省市：北京,11