苹果树/梨树腐烂病菌的检测用引物、试剂盒及定量检测方法技术
Primers, kits and quantitative detection methods for apple tree / pear canker pathogens
The invention discloses a primer for the detection of apple / pear rot pathogen, has the following nucleotide sequences: VE F:5 AATGAAGTCAGCATCGTTT '3' VE R:5 'forward primer; GCTTATCAAGGGCTTATCT 3 \reverse primer. The primers have good specificity and can be used for specific amplification of genomic DNA of apple tree / pear canker pathogen. No primer two is generated and non-specific amplification. The invention also utilizes the primers to establish a real-time fluorescence PCR quantitative detection method for apple tree / pear tree pathogenic bacteria.
【技术实现步骤摘要】
苹果树/梨树腐烂病菌的检测用引物、试剂盒及定量检测方法
本专利技术涉及真菌分子检测领域，具体而言，涉及一种苹果树/梨树腐烂病菌的检测用引物、包含此引物的试剂盒以及借助此引物实施的苹果树/梨树腐烂病菌的定量检测方法。
技术介绍
苹果树腐烂病菌（ValsamaliMiyabeetYamada）可侵害苹果树的主枝、主干、果实等多个部位，造成苹果树腐烂病。该病在我国各主要苹果产区普遍发生且危害严重。苹果腐烂病菌具有潜伏侵染特性，说明病菌的分布要远远大于病害的流行区域，田间植株普遍带菌。梨树腐烂病菌主要危害梨树的主枝和侧枝，导致梨树势衰弱，果实产量和品质下降。有研究者从我国15个省市梨产区采集腐烂病样品，通过79份梨腐烂病菌纯化分离株的rDNA-ITS核苷酸序列分析，证明我国梨树腐烂病病原菌均为Valsamalivar.pyri，为苹果黑腐皮壳梨变种。有效而精确地检测苹果树腐烂病菌，对深入研究该病菌的致病机制及进行科学防治均有重要意义，而合适的苹果腐烂病菌的检测体系也有可能特异性地检测梨树腐烂病菌。目前，对苹果树腐烂病菌的检测通常有普通PCR（聚合酶链反应）和巢氏PCR两种...
【技术保护点】
一种苹果树/梨树腐烂病菌的检测用引物，其特征在于具有如下核苷酸序列：VE‑F：5’‑AATGAAGTCAGCATCGTTT‑3’；VE‑R：5’‑GCTTATCAAGGGCTTATCT‑3’。
【技术特征摘要】
1.一种苹果树/梨树腐烂病菌的检测用引物，其特征在于具有如下核苷酸序列：VE-F：5’-AATGAAGTCAGCATCGTTT-3’；VE-R：5’-GCTTATCAAGGGCTTATCT-3’。2.含有权利要求1所述引物的用于检测苹果树/梨树腐烂病菌的试剂盒。3.一种苹果树/梨树腐烂病菌的定量检测方法，其特征在于包括如下步骤：（a）提取苹果树/梨树腐烂病菌的基因组DNA；（b）以苹果树/梨树腐烂病菌的基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的引物VE-F和VE-R进行PCR扩增，扩增产物经琼胶糖凝胶电泳之后切胶回收，与质粒载体连接后转化到感受态细胞进行克隆，挑选阳性克隆，提取质粒并鉴定，获得阳性重组质粒标准品；（c）测定阳性重组质粒标准品的吸光度，并计算阳性重组质粒标准品的拷贝数浓度，然后进行梯度稀释，以稀释后的各阳性重组质粒标准品为模板，分别利用所述引物VE-F和VE-R进行实时荧光定量PCR扩增，获得相应的Cq值，以各拷贝数浓度的对数值和对应的Cq值绘制标准曲线；（d）提取待测样品的DNA，并以待测样品的DNA为模板，利用所述引物VE-F和VE-R进行实时荧光定量PCR扩增，获得Cq值，并将此Cq值与步骤（c...
【专利技术属性】
技术研发人员：王树桐，郭永斌，曹克强，胡同乐，王亚南，张凤巧，
申请(专利权)人：河北农业大学，
类型：发明
国别省市：河北,13
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