The invention belongs to the technical field of molecular biology, in particular to a method for efficiently extracting microbial phospholipid fatty acid in soil. The freeze drying soil by adding extract excess, vortex mixing, and then at room temperature for 30-40 minutes after ultrasonic treatment, ultrasonic, adding glass beads, avoid light oscillation at room temperature for 1-1.5 hours, the supernatant was collected by centrifugation, precipitation extract was resuspended, and then repeat the above operation, vortex, ultrasound, light oscillation after centrifugation, and the supernatant was collected with the combined supernatant, adding citric acid buffer solution and chloroform at room temperature in the dark standing overnight; collecting the static lower chloroform layer by N
【技术实现步骤摘要】
一种高效提取土壤中微生物磷脂脂肪酸的方法
本专利技术属于分子生物学
，具体的说是一种高效提取土壤中微生物磷脂脂肪酸的方法。
技术介绍
磷脂脂肪酸是活体生物细胞膜磷脂的重要成分，周转速率极快且随细胞死亡而迅速降解，脂肪酸结构与种类多样，对环境因素敏感，分析结果重复性较好，既可以确定微生物总量，也可以根据特殊微生物类群的标志脂肪酸来进行特殊微生物类群的生物量分析，同时可以根据脂肪酸种类来确定微生物群落结构。土壤磷脂脂肪酸(PLFA)提取技术的发展很快，首先基于酯类物质提取方法演变而来。Bligh和Dyer(1959)采用提取剂氯仿：甲醇：水，提取冻鱼中的脂质物质，方法简便，快速，但此方法仅限于食品，特别是鱼类的磷脂提取，而且是总酯的提取，只能来表征总微生物生物量。20世纪70年代末White等进一步发展了这个方法，将提取剂改为氯仿：甲醇：磷酸盐缓冲液(体积比为1:2:0.8)，分析了河口和海底沉积物中磷脂的含量，并与ATP和DNA合成等表征沉积物生物量的方法进行了比较，认为磷脂可以作为表征微生物生物量的一个指标。Tunlid等(1985)，通过提取和分离磷脂脂肪...
【技术保护点】
一种高效提取土壤中微生物磷脂脂肪酸的方法，其特征在于：将冷冻干燥土样加入过量的提取液中，涡旋振荡混匀，而后于室温超声处理30‑40分钟，超声后，加入玻璃珠，室温下避光振荡1‑1.5小时，离心收集上清液，沉淀再经提取液重悬，涡旋振荡混匀，而后于室温超声处理30‑40分钟，超声后，室温下避光振荡1‑1.5小时，离心，收集上清液与上述上清液合并，合并后加入柠檬酸缓冲液和三氯甲烷，室温下，于黑暗中静置过夜；收集上述静置后下层的三氯甲烷层，经N
【技术特征摘要】
1.一种高效提取土壤中微生物磷脂脂肪酸的方法，其特征在于：将冷冻干燥土样加入过量的提取液中，涡旋振荡混匀，而后于室温超声处理30-40分钟，超声后，加入玻璃珠，室温下避光振荡1-1.5小时，离心收集上清液，沉淀再经提取液重悬，涡旋振荡混匀，而后于室温超声处理30-40分钟，超声后，室温下避光振荡1-1.5小时，离心，收集上清液与上述上清液合并，合并后加入柠檬酸缓冲液和三氯甲烷，室温下，于黑暗中静置过夜；收集上述静置后下层的三氯甲烷层，经N2吹干，吹干后经过量的氯仿重悬，而后经硅酸柱分离，并依次用氯仿、丙酮和甲醇依次洗脱，收集甲醇洗脱液，即得到磷脂脂肪酸。其中，提取液...
【专利技术属性】
技术研发人员：李新宇，孙京，李旭，王萱，张惠文，
申请(专利权)人：中国科学院沈阳应用生态研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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