一种生长抑素14肽卵黄抗体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种生长抑素14肽卵黄抗体及其制备方法。所述生长抑素14肽的卵黄抗体是将羰基活化试剂与半抗原生长抑素14肽中赖氨酸侧链上的伯氨基相耦合，对血蓝蛋白KLH进行羧基活化制成免疫抗原，并用所述免疫抗原免疫母鸡，并从免疫母鸡所产鸡蛋的卵黄液中提取得到。所述生长抑素14肽卵黄抗体中IgY的纯度为87％，蛋白浓度可达到9.6mg/mL，生长抑素14肽卵黄抗体的效价为1：64000。由于生长抑素14肽卵黄抗体在特异性、稳定性和生产便利上均优于IgG，不仅可以治疗疾病还能在免疫学检测上发挥作用，也可以实现产业化，作为药物、检测试剂大规模生产，具有很大的应用前景。

Somatostatin 14 peptide yolk antibody and preparation method thereof

The invention discloses a somatostatin 14 peptide yolk antibody and a preparation method thereof. The egg yolk antibody against somatostatin peptide 14 is the carbonyl activating reagent with the hapten peptide somatostatin 14 lysine in primary amino acid side chain coupled to hemocyanin KLH carboxyl activation to produce the immune antigen, and the immunized hens, egg yolk and extracted from immunized hens the egg production. In the somatostatin 14 peptide yolk antibody, the purity of IgY is 87%, the protein concentration can reach 9.6mg/mL, and the titer of the somatostatin 14 peptide yolk antibody is 1:64000. The somatostatin peptide 14 egg yolk antibodies were superior in specificity, stability and production facilities on IgG, not only can treat diseases can also play a role in the immunological detection, also can realize the industrialization, as a drug, kit for mass production, with a great application prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种生长抑素14肽卵黄抗体及其制备方法
本专利技术属于生物制药和免疫学检测领域，更具体地，涉及一种生长抑素14肽卵黄抗体及其制备方法。
技术介绍
生长抑素14肽是调节动物生长的小分子多肽。SS是通过抑制垂体生长激素，促卵泡素，促乳素等激素的分泌和抑制消化系统的蛋白酶、消化液的合成与分泌等途径起到抑制动物生长、消化和泌乳的作用。它最初是从羊和猪的下丘脑提取液中分离得到，并于20世纪70年代人工合成，是环状14肽，在Cys3和Cys14之间存在一个二硫键。制备的生长抑素14肽卵黄抗体可以作为药物，用于促进生长激素、促乳素及一些消化酶的分泌，也可以作为添加剂加入到动物饲料中，达到促进动物生长的目的，提高养殖效率。生长抑素卵黄抗体由于其优于IgG的免疫特性，可用于检测动物或人体中的多种激素水平的异常状态，并来作为诊断疾病的一种检验方式。由于生长抑素14肽作为半抗原没有免疫原性，其分子量只有1638，单独的多肽不足以激起充分的免疫反应，必须将半抗原与大分子蛋白偶联作为完全抗原才能激发抗原的免疫活性。最普遍使用的偶联载体蛋白是牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)，它们在一些免疫检测实验中作为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生长抑素14肽的卵黄抗体，其特征在于，所述生长抑素14肽的卵黄抗体是将羰基活化试剂与半抗原生长抑素14肽中赖氨酸侧链上的伯氨基相耦合，对血蓝蛋白KLH进行羧基活化制成免疫抗原，并用所述免疫抗原免疫母鸡，并从免疫母鸡所产鸡蛋的卵黄液中提取得到。

【技术特征摘要】
1.一种生长抑素14肽的卵黄抗体，其特征在于，所述生长抑素14肽的卵黄抗体是将羰基活化试剂与半抗原生长抑素14肽中赖氨酸侧链上的伯氨基相耦合，对血蓝蛋白KLH进行羧基活化制成免疫抗原，并用所述免疫抗原免疫母鸡，并从免疫母鸡所产鸡蛋的卵黄液中提取得到。2.根据权利要求1所述的生长抑素14肽卵黄抗体，其特征在于，所述羰基活化试剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐。3.根据权利要求1或2所述生长抑素14肽的卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括如下具体步骤：S1.免疫抗原的制备：(1)在pH4.5-5条件下，将血蓝蛋白KLH溶解于无水乙醇，再用蒸馏水稀释后，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，在4℃下搅拌反应30～60min，得到KLH处理液；(2)将半抗原生长抑素14肽用20％的乙醇溶解后，300～500μL/秒滴入KLH处理液中，使血蓝蛋白KLH含量与半抗原生长抑素14肽的摩尔量相等，调整pH值为7.0，在4℃下反应20～24h，将产物在4℃下PBS中透析，冷冻干燥后得到血蓝蛋白KLH-生长抑素14肽；(3)用磷酸盐缓冲液溶解血蓝蛋白KLH-生长抑素14肽配成1mg/mL的溶液，制得免疫抗原，-20℃冻存备用；S2.免疫：首次免疫时将免疫抗原与弗氏完全佐剂混合乳化后，采用鸡翅部多点皮下注射免疫母鸡，用免疫抗原和弗氏不完全佐剂加强免疫，首次免疫后每隔14天加强免疫一次，共加强免疫四次；S3.抗体粗品的制备：在首次免疫后的第20～80天收集鸡蛋，鸡蛋按照天数进行分批，3～4天分为一批处理，鸡蛋先用70％的酒精消毒，打破蛋壳后倾倒掉蛋清液，刺破卵黄膜，得到含有生长抑素14肽的卵黄抗体的卵黄液，即为生长抑素14肽的卵黄抗体粗品；S4.生长抑素14肽的卵黄抗体粗品经提纯处理，得到生长抑素14肽的卵黄抗体。4.根据权利要求3所述的生长抑素14肽的卵黄抗体的制备方法，其特征在于，步骤S1中(1)所述血蓝蛋白KLH与无水乙醇的质量体积比为5～6：1mg/mL，所述血蓝蛋白KLH与蒸馏水的质量体积比为1：6～10mg/mL，所述血蓝蛋白KLH和1-乙基-(3-二甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵肃清，梁雨昕，夏娜娜，吕瑞，王荣华，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44