一种固定化的荧光标记细胞色素c、其制备方法及用途技术
Immobilized fluorescent labeled cytochrome c, preparation method and application thereof
The invention relates to a immobilized fluorescent labeled cytochrome c, a preparation method and an application thereof, belonging to the field of biological detection. The method comprises the following steps: (1) the extraction and purification of cytochrome c from microorganism; (2) cytochrome c and fluorescein was prepared by the reaction of fluorescence labeled cytochrome c, removal of free fluorescein; (3) preparation of alumina mother liquor with aluminum isopropoxide; (4) the step (2) and (3). Product mix, coated solid carrier. The immobilized fluorescent labeled cytochrome c prepared by the method has fast response to NO in the solution and can be repeatedly used, and has a better application prospect.
【技术实现步骤摘要】
一种固定化的荧光标记细胞色素c、其制备方法及用途
本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种荧光标记的细胞色素c的固定化方法，以及所述固定化的荧光标记细胞色素c在生物样品检测中的用途。
技术介绍
一氧化氮(NO)是具有多种生物活性的信使分子和效应分子，对心脑血管系统、消化系统、神经系统都具有重要的调节作用，近来研究表明NO还能发挥非特异性宿主防御作用，介导组织损伤、细胞凋亡等病理过程，进而引起炎症反应和自身免疫性皮肤病。NO虽然结构简单，但在有氧环境下极不稳定，检测难度大，因而相关分析方法的研究极大的关注，CN105153214提供了一种硅基罗丹明一氧化氮荧光探针、CN103923641提供了一种检测线粒体中一氧化氮的荧光探针。细胞色素c是一种定位于线粒体内外膜间隙的血红素蛋白，广泛存在于各种含线粒体呼吸链的生物体中。细胞色素c含有c型血红素，能够与NO通过配位反应完成各种生理功能。早期的研究表明细胞色素c能够直接与NO结合与解离。目前，专利技术人前期针对细胞色素c与NO反应机制的研究发现NO进入溶液以NO形式存在，使Cytc周围的微环境发生变化，进入到Heme腔中...
【技术保护点】
一种荧光标记细胞色素c的固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从微生物中提取纯化细胞色素c；(2)将细胞色素c与荧光素反应制备荧光标记的细胞色素c，除去游离荧光素；(3)用异丙醇铝制备铝胶母液；(4)将步骤(2)和(3)的产物混匀，涂布固相载体；其中，所述细胞色素c来自光合细菌。
【技术特征摘要】
1.一种荧光标记细胞色素c的固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从微生物中提取纯化细胞色素c；(2)将细胞色素c与荧光素反应制备荧光标记的细胞色素c，除去游离荧光素；(3)用异丙醇铝制备铝胶母液；(4)将步骤(2)和(3)的产物混匀，涂布固相载体；其中，所述细胞色素c来自光合细菌。2.根据权利要求1所述荧光标记细胞色素c的固定化方法，其特征在于，所述细胞色素c包含的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。3.根据权利要求2所述的固定化方法，其特征在于，步骤(1)具体为：将菌体冻融后，超声破碎，上清液过离子交换色谱，洗脱液再过分子筛层析，获得电泳纯的细菌源细胞色素c。4.根据权利要求1或2所述的固定化方法，其特征在于，步骤(2)具体为：将1mg细胞色素c溶解于NaHCO3溶液中，加入5μl20mM的荧光素琥珀酰亚胺酯，混匀，4℃反应2h，...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐乾，曹洪玉，王立皓，郑学仿，
申请(专利权)人：大连大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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