The invention provides a quick observation of Arabidopsis ovule morphology and statistics were the number of cells, the fluorescence bleaching of Arabidopsis ovules, in confocal microscope and optical microscope can quickly and quickly to Arabidopsis embryo cell number were counted by beads. Compared with the ordinary section and differential interference method transparent to simple, and the effect is better.
【技术实现步骤摘要】
快速观察拟南芥胚珠形态及统计外珠被细胞数目的方法
本专利技术属于生物学领域,涉及一种快速观察拟南芥胚珠形态及统计外珠被细胞数目的方法。
技术介绍
胚珠是植物雌性生殖器官,是受精后发育为种子的结构,因此胚珠发育是否正常,直接决定了植物能否形成种子繁衍后代。成熟胚珠由几个特化的部分组成,包括孢子体组织(珠柄、珠被、珠心)和雌配子体组织(胚囊)。裸子植物一般只有一个珠被(integument)结构覆盖珠心形成封闭结构,而被子植物的胚珠通常包括两个珠被结构,即由外珠被和内珠被包裹珠心和胚囊(KelleyandGasser,2009)。胚珠受精后,珠被发育成种皮,对保护胚胎、种子传播和种子发芽具有重要作用。而在胚珠发育过程中,珠被发育对胚珠轴向的建立和形态建成具有重要作用。胚珠发育过程中,孢子体和配子体之间存在信号交流,珠被发育缺陷往往导致胚囊裸露或胚囊发育异常,最终影响胚珠的受精而形成败育(Loraetal.,2011;YadegariandDrews,2004)。拟南芥的胚珠很小,而且隐藏在雌蕊的中心,在观察胚珠形态和统计外珠被细胞数目时要先将胚珠外面的组织器官去掉,只留下整个完整的胚珠进行观察。现在国内外常用的方法主要有一下的几种方法:①电子显微镜扫描的方法:先将组织材料固定在4%(v/v)的戊二醛的磷酸缓冲液(25mM,pH=7.0)中过夜,然后再将样品置于1%的四氧化锇磷酸缓冲液(25mM,pH=7.0)中,在4℃冰箱中放置4-5天,然后再进行电子显微镜扫描,成像后观察胚珠珠被的形状;②透明-干涉观察方法:先将胚珠或者雌蕊固定在(福尔马林:乙醇:乙酸:水= ...
【技术保护点】
一种快速观察拟南芥胚珠形态及统计外珠被细胞数目的方法,其特征在于,其具体步骤如下:(1)溶液的配制:配制1‰w/v荧光增白剂溶液和浓度为2M的氢氧化钾的溶液;(2)材料的获得:取刚要露白的拟南芥花苞放置在贴有双面胶的载玻片上,用注射器的针头挑取拟南芥的胚珠;(3)玻片制备:吸取1‰w/v荧光增白剂10µL置于载玻片上,将步骤(2)所得胚珠连同胎座置于荧光增白剂液滴上,再加入2M的氢氧化钾溶液10µL,用移液枪轻轻混匀,盖上盖玻片;(4)孵育:将步骤(3)制备好的玻片在室温中放置10‑15分钟,让荧光增白剂充分渗透进入拟南芥的胚珠中;(5)Confocal显微镜拍照:将步骤(4)所得孵育好的玻片放置在Confocal显微镜下,用波长范围在100~400nm之间的紫外线观察,并拍照;(6)外珠被细胞数目统计:统计步骤(5)所得照片中的外珠被细胞数目。
【技术特征摘要】
1.一种快速观察拟南芥胚珠形态及统计外珠被细胞数目的方法,其特征在于,其具体步骤如下:(1)溶液的配制:配制1‰w/v荧光增白剂溶液和浓度为2M的氢氧化钾的溶液;(2)材料的获得:取刚要露白的拟南芥花苞放置在贴有双面胶的载玻片上,用注射器的针头挑取拟南芥的胚珠;(3)玻片制备:吸取1‰w/v荧光增白剂10µL置于载玻片上,将步骤(2)所得胚珠连同胎座置于荧光增白剂液滴上,再加入2M的氢氧化钾溶液10µL,用移液枪轻轻混匀,盖上盖玻片;(4)孵育:将步...
【专利技术属性】
技术研发人员:秦源,蔡汉阳,张曼,赵丽华,王路路,
申请(专利权)人:福建农林大学,
类型:发明
国别省市:福建,35
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