地黄分子标记指纹图谱的构建及其常见栽培品种的鉴别方法技术

本发明专利技术公开了一种地黄分子标记指纹图谱的构建及其常见栽培品种的鉴别方法，包括新鲜地黄样品的收集和预处理，新鲜地黄样品基因组DNA的提取与纯化，SCoT‑PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳，构建各供试样品的SCoT分子标记指纹图谱和利用构建的SCoT分子标记指纹图谱进行7种地黄常见栽培品种的鉴别等步骤。本发明专利技术节约了时间和成本，操作方便，快速准确，通过对地黄DNA的提取，SCoT‑PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳就能得到准确可靠的鉴别图谱，利用筛选的6个SCoT引物构建指纹图谱，可以将7个地黄常用栽培品种红薯王、抗育831、北京3号、北京2号、金状元、金九和温85‑5区分开。

Construction of molecular marker fingerprint of Rehmannia glutinosa and identification methods of common cultivated varieties

The invention discloses a molecular marker fingerprint of Rehmannia construction and common Cultivars Identification, collection and pretreatment of samples including fresh rehmannia root, fresh rehmannia samples of genomic DNA extraction and purification, SCoT PCR amplification and agarose gel electrophoresis, SCoT fingerprints of molecular markers and the samples by SCoT molecular marker fingerprinting of 7 cultivars of Rehmannia common identification procedures. The invention saves time and cost, convenient operation, fast and accurate, the extraction of Rehmannia DNA, SCoT PCR amplification and agarose gel electrophoresis can get accurate and reliable identification of fingerprints, using 6 SCoT primers, 7 can be separated from common cultivated sweet potato varieties, Rehmannia Wang 831, anti fertility Beijing No. 3, No. 2, Beijing gold champion, Kim Gu and Wen 85 5 district.

【技术实现步骤摘要】
地黄分子标记指纹图谱的构建及其常见栽培品种的鉴别方法
本专利技术属于地黄常见栽培品种的鉴别方法
，具体涉及一种地黄分子标记指纹图谱的构建及其常见栽培品种的鉴别方法。
技术介绍
地黄(Rehmanniaglutinosa)是玄参科地黄属多年生草本植物，包括天目地黄、裂叶地黄、高地黄、湖北地黄、茄叶地黄和地黄6个种，分布于中国、日本和韩国等国家。在我国，地黄主要分布于河南、山西、辽宁、山东、陕西和安徽等地。地黄根作为药材和食材，具有重要的经济价值。因此，地黄备受人们青睐，广为研究。目标起始密码子多态性分子标记(startcodontargetedpolymorphism，SCoT)是一种基于单引物扩增反应的新型目的基因分子标记，是根据植物基因ATG起始密码子侧翼保守区域设计单引物，对基因组中ATG两侧的区域进行扩增，产生偏向候选功能基因区显性多态性标记，具有能获得与性状联系紧密的目的基因、能对性状进行跟踪、操作简单、重复性好﹑多态性丰富与引物通用性好等优点，已被广泛应用于硬粒小麦遗传多样性分析、中间偃麦草与普通小麦种的系统关系、突尼斯柑橘种的鉴定、君迁子分类、指纹图谱构建、间接器官本文档来自技高网...

【技术保护点】
地黄分子标记指纹图谱的构建及其常见栽培品种的鉴别方法，其特征在于具体步骤为：（1）新鲜地黄样品的收集和预处理，试验用地黄种质收集于河南4个市县、山东2个区县和上海华东师范大学，包括裂叶地黄和地黄这2个种，共30份种质，均经过ITS测序与NCBI比对，确定为裂叶地黄或地黄种质，取其叶片保存于‑70℃冰箱备用，为DNA的提取备用；（2）新鲜地黄样品基因组DNA的提取与纯化，取新鲜地黄叶片，根据改良的CTBA提取叶片DNA，并用1wt%琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性，再用紫外分光光度计测定其浓度和纯度，将样品按所需浓度稀释后置于‑20℃条件下保存备用；（3）SCoT‑PCR扩增，利用所提取的DNA为...

【技术特征摘要】
1.地黄分子标记指纹图谱的构建及其常见栽培品种的鉴别方法，其特征在于具体步骤为：（1）新鲜地黄样品的收集和预处理，试验用地黄种质收集于河南4个市县、山东2个区县和上海华东师范大学，包括裂叶地黄和地黄这2个种，共30份种质，均经过ITS测序与NCBI比对，确定为裂叶地黄或地黄种质，取其叶片保存于-70℃冰箱备用，为DNA的提取备用；（2）新鲜地黄样品基因组DNA的提取与纯化，取新鲜地黄叶片，根据改良的CTBA提取叶片DNA，并用1wt%琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性，再用紫外分光光度计测定其浓度和纯度，将样品按所需浓度稀释后置于-20℃条件下保存备用；（3）SCoT-PCR扩增，利用所提取的DNA为模板，在MJResearchPTC.200型扩增仪上进行SCoT-PCR扩增，PCR扩增体系特征为：总体积为25μL，含有8μLddH2O、1μL浓度为80ng•μL-1的模板DNA、1μL浓度为8μmol•L-1的引物和15μLMix，退火温度为45℃，扩增程序为：94℃预变性4min，94℃变性1min，45℃退火1min，72℃延伸2min，36个循环，4℃保存，所用的SCoT-PCR扩增引物为下列6条单引物：SCoT4ACCATGGCTACCACCGCG，SCoT5ACGACAT...

【专利技术属性】
技术研发人员：周延清，杨珂，段红英，王向楠，张丹丹，
申请(专利权)人：河南师范大学，
类型：发明
国别省市：河南,41