一种简易分离卵母细胞或早期胚胎的方法技术

本发明专利技术公开了一种简易分离卵母细胞或早期胚胎的方法，用以解决现有技术中在含有卵母细胞的混合液混有血液或较浑浊时难以肉眼辨别，给捡卵造成难度，或采用密度梯度分离法时对卵母细胞损伤过大，过程复杂的问题。该方法包括：将含有卵母细胞或早期胚胎的混合液通过孔径为100微米的滤网加压过滤，用对应的卵母细胞培养液或早期胚胎培养液冲洗滤网内的卵母细胞或早期胚胎，再将滤网放入表面皿中，用捡胚针在体视镜下收集卵母细胞或早期胚胎。采用上述方法所需的仪器数量少，操作简单，且能够在短时间内分离大量卵母细胞或早期胚胎，提高了分离效率。

A simple method for isolation of oocytes or early embryos

The invention discloses a simple method of isolating oocytes or early embryos, in order to solve the existing technology in the mixed liquid containing oocytes mixed with blood or more turbid to the unaided eye, causing difficulty to pick up the eggs, or by density gradient separation of oocyte damage is too large, the process of complex problems. The method comprises: mixing liquid containing oocytes or early embryos through the aperture of 100 micron filter pressure filtration, medium or early embryo culture fluid flushing oocytes or early embryos in mesh with the corresponding oocyte, then filter into Petri dish, collected oocytes or early embryos in stereoscopic pick up embryo needle. The method requires less number of instruments, simple operation, and can separate a large number of oocytes or early embryos in a short time, thereby improving separation efficiency.

【技术实现步骤摘要】
一种简易分离卵母细胞或早期胚胎的方法
：本专利技术涉及生殖生物学
，特别涉及一种简易分离卵母细胞或早期胚胎的方法。
技术介绍
：卵母细胞或早期胚胎直径在100微米以上，是机体最大的细胞，肉眼可见。在生殖生物学
卵母细胞常常被分离，体外培养用于胚胎发育研究。此外，超数排卵后，早期胚胎的获得对家畜繁殖具有重要意义。而在卵母细胞培养过程中，卵母细胞的分离是一个重要环节，保证卵母细胞与组织、血细胞、颗粒细胞、白细胞等杂质分开，避免卵母细胞培养、胚胎移植、卵母细胞或胚胎分子检测等受到影响。目前，卵母细胞的获取方法主要有从活体卵巢中取卵和从摘出的卵巢中通过机械破碎法取卵两种，其中，活体取卵是借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞；另一种从刚摘出的卵巢中取卵，是将卵巢从门部纵切，去除黄体、髓质和多余脂肪组织，剪碎卵巢皮质，将破碎组织冲洗后得冲卵液；上述两种方法获取的混有卵母细胞的混合液中，会带有组织、血细胞、颗粒细胞、白细胞等杂质。常用的卵母细胞或早期胚胎分离方法有两种：一种是用捡胚管直接在显微镜下捡取，该方法的特点是步骤简单，易于操作，但该方法的缺点是如果含有卵母细胞或早期胚胎的混合液中遇到有血液混入或液体浑浊时，分离效果就会大打折扣，因为肉眼很难在浑浊的液体中找到半透明的卵母细胞或早期胚胎；第二种方法是利用Percoll密度梯度离心法分离卵母细胞，该方法的特点是能够对大量卵母细胞进行统一操作，但是也有较多缺点，需要配制不同浓度的Percoll分层液，使用离心机、冲洗Percoll；而且离心操作会对卵母细胞产生损伤，整体操作步骤较多，导致卵母细胞或早期胚胎在体外停留时间过长。
技术实现思路
：本专利技术提供一种简易分离卵母细胞或早期胚胎的方法，用以解决现有技术中在含有卵母细胞的混合液混有血液或较浑浊时难以肉眼辨别，给捡卵造成难度，或采用密度梯度分离法时对卵母细胞损伤过大，过程复杂的问题。本专利技术提供的简易分离卵母细胞或早期胚胎的方法，包括：将含有卵母细胞或早期胚胎的混合液通过孔径为100微米的滤网加压过滤，用对应的卵母细胞培养液或早期胚胎培养液冲洗滤网内的卵母细胞或早期胚胎，再将滤网放入表面皿中，用捡胚针在体视镜下收集卵母细胞或早期胚胎。较佳的，将含有卵母细胞或早期胚胎的混合液通过孔径为100微米的滤网加压过滤，包括：用无针头的注射器吸取含有卵母细胞或早期胚胎的混合液，利用注射器的压力将含有卵母细胞或早期胚胎的混合液通过孔径为100微米的滤网过滤。较佳的，用对应的卵母细胞培养液或早期胚胎培养液冲洗滤网内的卵母细胞或早期胚胎，包括：用对应的卵母细胞培养液或早期胚胎培养液冲洗滤网内的卵母细胞或早期胚胎2至3次。较佳的，再将滤网放入表面皿中，包括：将滤网放入装有对应的卵母细胞培养液或早期胚胎培养液的表面皿中。本专利技术有益效果包括：分离过程所需的仪器数量少，操作简单，且能够在短时间内分离大量卵母细胞或早期胚胎，对卵母细胞或早期胚胎的损伤小，使得卵母细胞或早期胚胎在培养时不受其他细胞或杂质的影响。该方法缩短了捡胚时间，提高了卵母细胞或早期胚胎的分离效率，缩短了卵母细胞或早期胚胎在体外的时间，降低了环境对卵母细胞或早期胚胎的影响，提高了卵母细胞或早期胚胎的成活率。具体实施方式：为了给出快速简易的卵母细胞或早期胚胎的分离方案，本专利技术提供了一种简易分离卵母细胞或早期胚胎的方法，以下对本专利技术的优选实施例进行说明。步骤一：将含有卵母细胞或早期胚胎的混合液通过孔径为100微米的滤网加压过滤。具体的，用无针头的注射器吸取含有卵母细胞或早期胚胎的混合液，利用注射器的压力将含有卵母细胞或早期胚胎的混合液通过孔径为100微米的无菌滤网过滤，此时卵母细胞或早期胚胎留在无菌滤网的里面，而其他直径小于100微米的细胞或杂质从无菌滤网滤出。步骤二：用对应的卵母细胞培养液或早期胚胎培养液冲洗滤网内的卵母细胞或早期胚胎。具体的，用卵母细胞培养液冲洗滤网内的卵母细胞，或用早期胚胎培养液冲洗滤网内的早期胚胎2至3次，能够进一步的将其他细胞和杂质滤过，冲洗卵母细胞或早期胚胎，获得较为清洁的卵母细胞或早期胚胎。步骤三：再将滤网放入表面皿中，用捡胚针在体视镜下收集卵母细胞或早期胚胎。具体的，将滤网放入装有对应的卵母细胞培养液或早期胚胎培养液的表面皿中，在该种环境下，用捡胚针在体视镜下直接收集卵母细胞或早期胚胎。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种简易分离卵母细胞或早期胚胎的方法，其特征在于，包括：将含有卵母细胞或早期胚胎的混合液通过孔径为100微米的滤网加压过滤，用对应的卵母细胞培养液或早期胚胎培养液冲洗滤网内的卵母细胞或早期胚胎，再将滤网放入表面皿中，用捡胚针在体视镜下收集卵母细胞或早期胚胎。

【技术特征摘要】
1.一种简易分离卵母细胞或早期胚胎的方法，其特征在于，包括：将含有卵母细胞或早期胚胎的混合液通过孔径为100微米的滤网加压过滤，用对应的卵母细胞培养液或早期胚胎培养液冲洗滤网内的卵母细胞或早期胚胎，再将滤网放入表面皿中，用捡胚针在体视镜下收集卵母细胞或早期胚胎。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将含有卵母细胞或早期胚胎的混合液通过孔径为100微米的滤网加压过滤，包括：用无针头的注射器吸取含有卵母细胞或早期胚胎...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴海青，郭俊，勿都巴拉，李玉荣，赵存发，马跃军，刘斌，高娃，
申请(专利权)人：内蒙古自治区农牧业科学院，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15