一种测定醋狼毒中二萜类成分Prostratin和Pekinenin G的高效液相色谱方法技术

醋狼毒的质量控制方法，属于中药饮片质量控制领域，通过测定醋狼毒中二萜类成分Prostratin和Pekinenin G的含量来判定醋狼毒的质量。本发明专利技术对醋狼毒建立了质量控制方法，该方法提供了利用高效液相色谱法同时测定醋狼毒中Prostratin、Pekinenin G两种毒性及药效成分含量的质量控制方法，该质量标准简便，且能更好地控制药品的质量。本发明专利技术的质量控制方法，具有较强的专属性和良好的重现性，真正体现药品安全有效、质量可控。

The quality control method of vinegar of Stellera chamaejasme

The quality control method of vinegar of Stellera chamaejasme, which belongs to the field of Chinese herbal medicine quality control, quality through determination of two terpenoids of vinegar of Stellera chamaejasme in Prostratin and Pekinenin G to determine the vinegar of Stellera chamaejasme. The invention establishes a method for quality control of vinegar of Stellera chamaejasme quality control method, this method provides a RP-HPLC method for simultaneous determination of content of two kinds of toxicity and efficacy of Prostratin, Pekinenin chamaejasme vinegar G, the quality standard is simple, and can better control the quality of drugs. The quality control method of the invention has strong specificity and good reproducibility, and truly reflects the safety, effectiveness and quality control of the medicine.

【技术实现步骤摘要】
醋狼毒的质量控制方法
本专利技术属于中药饮片质量控制领域，具体涉及一种醋狼毒的质量控制方法。
技术介绍
狼毒为大戟科大戟属月腺大戟(EuphorbiaebracteolataHayata)或狼毒大戟(EuphorbiafischerianaSteud)的干燥根，具有逐水祛痰，破积杀虫之功效，药性峻猛。《本草纲目》将其列入毒草类，临床使用不当可对皮肤、口腔及胃肠道粘膜产生强烈刺激，临床主要可引起剧烈的腹痛、腹泻、便血等消化道刺激，故应用时需炮制。醋狼毒临床应用广泛，且有肠道毒副作用，但目前尚无统一的质量控制方法，难以保证临床安全及疗效稳定。狼毒属于大戟科有毒中药。大戟科有毒中药中的二萜类成分被认为既是有毒成分又是药效成分。狼毒中也含有二萜类成分，包括西松烷型及巴豆烷型二萜类成分。本专利技术采用高效液相色谱法同时测定该药中Prostratin、PekineninG两种既是毒性成分又是药效成分的二萜类指标性成分的含量，制定了最高和最低限量，解决了醋狼毒质量控制的难题，本专利技术针对醋狼毒提供了一种实用的质量控制方法。
技术实现思路
解决的技术问题：针对现有技术尚无统一的醋狼毒质量控制方法，本专利技术提供一种醋狼毒的质量控制方法。技术方案：二萜类成分Prostratin和PekineninG在醋狼毒质量控制中的应用。具体方法为通过测定醋狼毒中二萜类成分Prostratin和PekineninG的含量来判定醋狼毒的质量。测定方法为采用高效液相色谱法测定：色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温25～35℃；双波长检测：Prostratin的检测波长236nm，PekineninG的检测波长为273nm；以乙腈-0.1％甲酸的水溶液为流动相梯度洗脱；梯度洗脱程序：0～25min，75wt.％～85wt.％乙腈；25～30min，85wt.％～100wt.％乙腈；30～31min，100wt.％～75wt.％乙腈；31～35min，75wt.％～75wt.％乙腈；流速：1mL·min-1；对照品溶液的制备：分别取相同重量的Prostratin、PekineninG对照品各2.0～10.0mg，精密称定，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，作为标准品母液；精密移取Prostratin、PekineninG单标母液0.2～0.5ml混合，体积比1:1，并定容至10mL容量瓶中，配制为混标溶液，备用；供试品溶液的制备：取醋狼毒粉末0.5～2.0g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷，加热回流提取至提取液无色，回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并转移至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；含量测定：精密吸取对照品及供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得醋狼毒中Prostratin、PekineninG含量。醋狼毒中Prostratin的含量范围在0.055wt.％～0.020wt.％；PekineninG的含量范围在0.050wt.％～0.020wt.％。有益效果：本专利技术对醋狼毒建立了质量控制方法，该方法提供了利用高效液相色谱法同时测定醋狼毒中Prostratin、PekineninG两种毒性及药效成分含量的质量控制方法，该质量标准简便，且能更好地控制药品的质量。本专利技术的质量控制方法，具有较强的专属性和良好的重现性，真正体现药品安全有效、质量可控。附图说明图1为混合对照品及12个炮制品的三氯甲烷提取物的HPLC色谱图；狼毒生品A)；狼毒醋品B)；对照品C)；prostratin1)；对照品pekineninG2)；对照品pekineninsA3)图2狼毒中二萜类成分改变HT-29细胞中AQP3mRNA水平变化图与空白组比较，1)P<0.05图3狼毒中二萜类成分刺激巨噬细胞释放炎症因子的变化图与空白组比较，1)P<0.05。具体实施方式结合具体实施方式，对本专利技术进一步说明如下：实施例11.两种成分同时测定的含量测定方法为：1.1药材、仪器与试剂自制的醋狼毒：称取100g狼毒饮片(LD)，160℃条件下不断均匀翻炒10min(CLD1)、20min(CLD2)、30min(CLD3)、40min(CLD4)至药物表面呈棕黄色。炮制三批。获得的样品名分别为CLD11、CLD21、CLD31、CLD41、CLD12、CLD22、CLD32、CLD42、CLD13、CLD23、CLD33、CLD43。Waters2695-2489PDA高效液相色谱系统；Milli-Q纯水仪；BP211D电子天平(德国Sartorius公司)；KQ-500DE型医用数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。分析用对照品：Prostratin纯度均大于98％，购自sigma；PekineninG自制(WangKL,YuHL,WuH,WangXZ,PanYZ,ChenYQ,LiuLP,JinYP,ZhangCC.AnewcasbanediterpenefromEuphorbiapekinensis.NatProdRes.NatProdRes.2015；29(15):1456-60.)，纯度大于92％。HPLC用甲醇、乙腈及甲酸均为色谱纯，超纯水；其余试剂均为分析纯。1.2方法与结果1.2.1色谱条件色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温25～35℃；双波长检测：Prostratin的检测波长236nm，PekineninG的检测波长为273nm；以乙腈-0.1％甲酸的水溶液为流动相梯度洗脱；梯度洗脱程序：0～25min，75wt.％～85wt.％乙腈；25～30min，85wt.％～100wt.％乙腈；30～31min，100wt.％～75wt.％乙腈；31～35min，75wt.％～75wt.％乙腈；流速：1mL·min-1。对照品及醋狼毒样品的HPLC图见图1。对照品溶液的制备：含量测定：精密吸取对照品及供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得醋狼毒中Prostratin、PekineninG含量。1.2.2对照品溶液的制备分别取相同重量的Prostratin、PekineninG对照品各2.0mg，精密称定，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度，作为标准品母液。精密移取Prostratin、PekineninG单标母液0.2mL混合，体积比1:1，并定容至10mL容量瓶中，配制为混标溶液，备用。1.2.3供试品溶液的制备供试品溶液的制备：取醋狼毒粉末1.0g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷，加热回流提取至提取液无色。回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并转移至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。1.2.4线性关系考察取1.2.2项下的混合对照品溶液，精密稀释至母液的1/2、1/4、1/8、1/16、1/32，制备6个浓度水平的对照品溶液，进样分析，以峰面积和进样浓度建立每个目标分析物的回归方程。结果见表1，所有化合物在检测范围内有较好的线性。线性回归分析结果表明标准曲线的相关系数值>0.9990。数据呈现良好的重现性。表1两种化合物的线性回归方程、相关系数、线性范围1.2.6精密度试验精密吸取1.2.2项下的混合对照品溶液10μL本文档来自技高网...

【技术保护点】
二萜类成分Prostratin和Pekinenin G在醋狼毒质量控制中的应用。

【技术特征摘要】
1.二萜类成分Prostratin和PekineninG在醋狼毒质量控制中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于具体方法为通过测定醋狼毒中二萜类成分Prostratin和PekineninG的含量来判定醋狼毒的质量。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于测定方法为采用高效液相色谱法测定：色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温25~35℃；双波长检测：Prostratin的检测波长236nm，PekineninG的检测波长为273nm；以乙腈-0.1%甲酸的水溶液为流动相梯度洗脱；梯度洗脱程序：0～25min，75wt.％~85wt.％乙腈；25～30min，85wt.％~100wt.％乙腈；30～31min，100wt.％~75wt.％乙腈；31～35min，75wt.%～75wt.%乙腈；流速：1mL•min-1；对照品溶液的制备：分别取相同重量的Prostrat...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘莲，黄剑宇，郁红礼，吴皓，王奎龙，王卫，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32