The invention relates to a method for SNP loci of Scylla paramamosain sex identification and identification method, the base sequence is SEQIDNO:1 or SEQIDNO:2, the length is 285 BP; the chain SNP site is SEQIDNO:1 or SEQIDNO: 2 sixty-second, seventieth, seventy-fourth, 145th, 147th, 163rd, 186th and 194th. Identification methods include genomic DNA extraction from males and females, simplified genomic library construction, high-throughput sequencing, sequence analysis and sex linked candidate SNP marker screening, as well as large sample validation of candidate SNP markers. This invention is the first identification of molecular markers linked to sex of Scylla paramamosain, has a strong guiding significance in s.paramamosain sex determination and differentiation mechanism and unisexual breeding research. The technology and the method of the invention has the advantages of accurate, sensitive and reliable, strong versatility, and need not know the genomic information, but also can be applied to the non reference genome numerous species, which has wide application potential.
【技术实现步骤摘要】
一种用于拟穴青蟹性别鉴定的SNP位点及其鉴定方法
本专利技术属于水产生物
中的海洋蟹类性别连锁分子标记筛选与遗传性别鉴定技术,特别涉及一种用于拟穴青蟹性别鉴定的SNP位点及其鉴定方法。
技术介绍
十足目是甲壳动物中较高等的类群,包括许多重要经济虾蟹类,如:凡纳滨对虾、中国对虾、斑节对虾、中华绒螯蟹、三疣梭子蟹、拟穴青蟹等。青蟹属包含4个物种:锯缘青蟹、榄绿青蟹、紫螯青蟹、拟穴青蟹,它们广泛分布于西太平洋、东南亚、澳洲、印度洋、及非洲沿岸,是世界上养殖价值最高的海水品种之一。其中,拟穴青蟹主要分布在我国东海和南海沿岸,是我国传统的海洋渔业资源和水产养殖品种。据中国渔业年鉴统计,我国的拟穴青蟹年养殖产量连年超过14万吨,其中,广东、福建、浙江、广西和海南是主产区。拟穴青蟹具有雌雄生长速度差异大的特点,雌性个体显著大于同期雄性个体(Jiangetal.,2014),且性腺发育饱满的雌性个体的市场价值远高于雄性个体,深受消费者追捧。因此,开展拟穴青蟹全雌单性育种和人工养殖,将为水产养殖业带来更高的利润,产业发展前景巨大。但截至目前,关于拟穴青蟹性别决定机制方面的研究还十分匮乏,尚不清楚其性别决定类型。我国学者在21世纪初便开展了拟穴青蟹染色体制备研究,表明其染色体数目为2n=98,但是并没有发现异型染色体(王桂忠等,2002;陈学雷等,2004)。采用AFLP技术对拟穴青蟹雌雄个体进行性别差异DNA片段筛选研究,获得了748条候选片段,但没有发现性别特异或连锁的片段(王艺磊等,2004)。通过cDNA文库和测序分析,发现了一部分与拟穴青蟹性腺发育和性别分化相 ...
【技术保护点】
一种用于拟穴青蟹性别鉴定的SNP位点,其特征在于,碱基序列为:SEQIDNO:1或SEQIDNO:2,长度为285 bp;所述SNP位点为SEQIDNO:1或SEQIDNO:2中第62位、第70位、第74位、第145位、第147位、第163位、第186位和第194位。
【技术特征摘要】
1.一种用于拟穴青蟹性别鉴定的SNP位点,其特征在于,碱基序列为:SEQIDNO:1或SEQIDNO:2,长度为285bp;所述SNP位点为SEQIDNO:1或SEQIDNO:2中第62位、第70位、第74位、第145位、第147位、第163位、第186位和第194位。2.一种拟穴青蟹性别连锁SNP标记的鉴定方法,其特征在于,主要包括以下步骤:(1)提取拟穴青蟹雌雄个体基因组DNA;(2)构建简化基因组文库,并进行高通量测序;(3)序列分析与筛选性别连锁的候选SNP标记;(4)采用大样本对性别连锁的候选SNP标记进行验证。3.根据权利要求2所述鉴定方法,其特征在于,步骤(1)中所述提取拟穴青蟹雌雄个体基因组DNA包括以下步骤:首先采集雌雄成蟹,剪取肌肉组织,在裂解液中进行匀浆;然后加入白酶K消化肌肉组织和RNaseA消化RNA,在50℃水浴锅中孵育2h;最后采用酚和氯仿分别抽提多次,用冰乙醇沉淀DNA,在37℃保温箱中干燥DNA,并溶解于无菌双蒸水中,低温保存待用。4.根据权利要求2所述鉴定方法,其特征在于,步骤(2)中所述构建简化基因组文库与高通量测序包括以下步骤:第一,采用EcoRI-HF内切酶对基因组DNA进行酶切;第二,采用AmPureBeads磁珠吸附方法对酶切产物进行纯化,并连接接头P1,室温孵育2h;第三,采用AmPureBeads磁珠吸附方法对连接产物进行纯化,并采用Bioruoter超声法将连接产物打碎至350bp左右,之后连接接头P2,室温孵育2h;第四,采用割胶回收的方法纯化连接产物,再采用PCR方法富集回收产物,然后回收长度在300-500bp的PCR产物;第五,对回收产物进行高通量测序。5.根据权利要求2所述鉴定方法,其特征在于,步骤(3)中所述序列分析与筛选性别连锁的候选SNP标记包括以下步骤:第一,采用CD-HIT-EST对F2A个体的所有序列进行聚类、过滤,获得大量适合组装的tag和re...
【专利技术属性】
技术研发人员:马洪雨,苗贵东,游翠红,杨小龙,程银伟,章跃陵,石西,
申请(专利权)人:汕头大学,
类型:发明
国别省市:广东,44
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