一种呋虫胺半抗原、完全抗原和抗体及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种呋虫胺半抗原、完全抗原、抗体的制备方法及应用，包括具有四氢‑3‑呋喃结构的新烟碱类农药呋虫胺的人工半抗原、完全抗原及抗体的制备及相应的检测方法的建立。本发明专利技术的检测方法克服了普通光度法灵敏度低，无法满足要求的问题，建立了一种灵敏度高、成本低、快速易掌握的免疫分析方法。它以1‑甲基‑2‑氨基‑3‑(四氢‑3‑呋喃甲基)胍为半抗原结构，偶联牛血清白蛋白为免疫原，偶联卵清蛋白为包被原。将免疫原经过免疫动物、从抗血清中提纯出抗体，使用该抗体建立的呋虫胺免疫分析方法具有灵敏度高、特异性强的优点，且半抗原合成方法简便，具有较好的应用前景。

Furosemide hapten, complete antigen and antibody, preparation method and application thereof

The invention discloses a dinotefuran hapten and complete antigen, antibody preparation method and application, including the establishment of new neonicotinoid dinotefuran with four hydrogen 3 furan structure of artificial hapten and complete antigen and antibody preparation and detection method. The detection method of the invention overcomes the problem that the common photometric method has low sensitivity and can not meet the requirements, and establishes an immunity analysis method with high sensitivity, low cost, fast and easy grasp. It takes 1 methyl 2 amino 3 (four hydrogen 3 methylfuran) guanidine as hapten structure, coupling bovine serum albumin as antigen, ovalbumin for coatingen coupling. Immunity after immunization, purified from animal serum antibody, analysis method has high sensitivity and specificity advantages of dinotefuran immune antibody and the establishment of the hapten synthesis method is simple and has good application prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种呋虫胺半抗原、完全抗原和抗体及其制备方法与应用
本专利技术属于小分子食品环境污染物的免疫化学和残留生物分析
，具体涉及一种呋虫胺半抗原、完全抗原和抗体及其制备方法与应用。
技术介绍
呋虫胺是由日本三井化学株式会社研发的新一代烟碱类农药，是继吡虫啉等第一代、噻虫嗪等第二代烟碱农药后的又一类具有新结构的烟碱类农药。呋虫胺分子中具有的呋喃环和开环的胍基取代了前两类氯代吡啶基、氯代噻唑基或者闭环胍基，是烟碱类农药分子结构中唯一不含卤素原子和芳香环的种类，杀虫活性和安全性更高。呋虫胺也是一种烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)激动剂，具有较好的胃毒、触杀和根部内吸性，活性高、安全性高、持效期长，杀虫谱广等优点，广泛用于水稻、蔬菜、果树中的飞虱、椿象类、二化螟、蚜虫类、粉虱类、蛾类、蓟马类等的防治，对已经产生抗药性的很多害虫具有较好的防治效果，是烟碱类农药的最新品种。即使呋虫胺的毒性较小，但是大量使用仍不免会在农产品和环境中造成残留，长期的低浓度的残留也会对人类健康和环境造成危害，特别是对家蚕、蜜蜂等生物还是具有一定的毒性，欧盟已经禁用了包括吡虫啉等在内的三种新烟碱类杀虫剂在很多种作物中的应本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种呋虫胺半抗原，其特征在于，所述呋虫胺半抗原的分子结构如式I所示：

【技术特征摘要】
1.一种呋虫胺半抗原，其特征在于，所述呋虫胺半抗原的分子结构如式I所示：2.一种呋虫胺免疫原，其特征在于，是由权利要求1所述的半抗原与牛血清半蛋白偶联而来，其分子结构如式II所示：3.一种呋虫胺包被原，其特征在于，是由权利要求1所述的半抗原与卵清蛋白偶联而来，其分子结构如式III所示：4.一种呋虫胺抗体，其特征在于，是能与权利要求2所述免疫原或权利要求3所述包被原发生特异性反应的IgG抗体。5.权利要求1所述呋虫胺半抗原的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：(1)将呋虫胺2.00-2.50g溶于无水三口瓶中的20-30mL乙醇中，连接冷凝装置，加热至乙醇回流；(2)三口瓶中通入氮气保护，磁力搅拌步骤(1)制备的呋虫胺乙醇溶液，缓慢投入8.50-11.25g二水合氯化亚锡，至完全溶解，氮气保护回流反应4-6h；(3)反应完成后往三口瓶中加蒸馏水，边加边搅拌，至不再生成浑浊物，将混合液12000rpm/min离心，弃去沉淀，再重复离心3次；(4)将上清用乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，减压旋转蒸发至干，得目标产物。6.权利要求2所述呋虫胺免疫原的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：(1)将0.1g的BSA溶于5.0mLpH＝5.0的0.01mol/L的磷酸盐缓冲液中，加入0.040-0.045g1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，完全溶解后再搅拌15min，加0.020-0.025gN-N-羟基琥珀酰亚胺，溶解后搅拌40min；(2)将权利要求1中所述的半抗原0.020-0.031g溶解到1.0mL的DMF中，将步骤(1)制备的反应液的pH调制至8.0，将溶解有半抗原的DMF溶液加至此pH为8.0的溶液中，搅拌反应过夜；(3)将步骤(2)制备的溶液在pH＝7.4的0.01mol/L的磷酸盐缓冲液中4℃下透析72h，然后12000rpm/min离心，然后进行定容，计算完全抗原浓度，测定结合比，分装冻存。7.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘景坤，崔艳梅，李勤奋，黄华平，李叶，邹雨坤，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：海南,46