一种海参多肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术属于海洋生物技术领域，具体涉及一种海参多肽及其制备方法与应用。本发明专利技术所述海参多肽的制备方法为取海参体壁匀浆后依次经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水解后，加入乙醇沉淀多糖，离心取上清液。进一步对上清液收集截留分子量小于3kDa的组分获得分子量小于3kDa的海参多肽组分。实验结果表明本发明专利技术所述制备方法制得的海参多肽以及分子量小于3kDa的海参多肽组分均具有很好的抗氧化、抗衰老作用，可以用于制备成抗氧化、抗衰老药物或者保健品，具有良好的经济和社会效应。

Sea cucumber polypeptide and preparation method and application thereof

The invention belongs to the field of marine biotechnology, in particular to a sea cucumber polypeptide and a preparation method and an application thereof. The preparation method of the sea cucumber polypeptide of the invention is that after taking the sea cucumber body wall homogenate, it is successively hydrolyzed by trypsin and papain, and then added ethanol to precipitate the polysaccharide, and then the supernatant is centrifuged. Furthermore, the supernatant was collected and the molecular weight was less than 3kDa. The polypeptide of sea cucumber polypeptide with molecular weight less than 3kDa was obtained. The experimental results show that sea cucumber polypeptide group the preparation of sea cucumber polypeptide molecular weight and preparation method of less than 3kDa were with good antioxidant and anti-aging effect, can be used for preparation of antioxidant and anti-aging medicine or health care products, with good economic and social effect.

【技术实现步骤摘要】
一种海参多肽及其制备方法与应用
本专利技术属于海洋生物
，具体涉及一种海参多肽及其制备方法与应用。
技术介绍
全球人口老龄化问题日趋严峻，衰老与衰老相关疾病已成为威胁人类死亡的重要影响因素，在国内外医疗保健领域中引起了广泛的关注。衰老机理极其复杂，其相关的学说有数十种，而“衰老的氧化自由基学说”与其他学说都有一定的关联性，也是最广为接受的衰老学说之一。衰老自由基理论认为，正常情况下体内自由基的产生与清除处于一种动态平衡状态，但当体内外有害因素、疾病和衰老状态的影响下，内源性活性氧自由基不断产生而清除能力明显下降，导致活性氧物质对细胞蛋白质、脂质和DNA产生伤害，产生氧化应激，最终引起机体老化和器官功能衰退的现象。生物活性肽具有多种人体生理调节功能，有促进免疫、激素调节、抗氧化、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等作用，可以满足延缓衰老的全方位需要，且食用安全性高、易于消化吸收，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。同时，有研究表明活性肽在化妆品中具有良好的兼容性和稳定性，小分子活性多肽可以减轻皱纹、使皮肤更光滑、淡化色斑。我国海域面积辽阔，蕴藏着丰富的海洋生物资源，为研究和开发具有抗氧化、延缓衰老的生物活性物质提供了庞大的生物资源库。海参，属海参纲海参属的棘皮动物，生活在海边至8000米的海洋。海参营养丰富，是中国海产八珍之一，具有补肾壮阳、益肾补肺、温阳利水功效，可用于治肾阳虚衰所致的阳痿、腰膝酸软、遗精等症，也治肺痨、咳嗽、外咳虚喘、劳嗽有痰者。现代研究表明，海参具有提高记忆力、延缓性腺衰老，防止动脉硬化以及抗肿瘤等作用，尤其是海参体壁中胶原蛋白及其酶解后胶原肽在保健品和化妆品领域具有很好的开发应用价值。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种具有抗氧化、延缓衰老作用的海参多肽及其制备方法与应用。为实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案。一种海参多肽的制备方法，取海参体壁匀浆后依次经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水解后，加入乙醇沉淀多糖，离心取上清液。其中，所述海参体壁为新鲜的海参解刨，去内脏，体壁用水清洗3～4次得到。在一些实施方案中，本专利技术所述海参多肽的制备方法中，所述胰蛋白酶水解前还包括将匀浆后得到的肉糜干燥后加水重溶的步骤。其中，所述肉糜干燥后的重溶时水的加入量为干燥的肉糜的体积的20倍。本领域技术人员还可以按照公知的干燥的方法对海参体壁匀浆后得到的肉糜进行干燥。优选采用冷冻干燥。在一些实施方案中，所述胰蛋白酶水解具体为调节pH至8.0，加入胰蛋白酶37～55℃水解2～10小时，灭酶。进一步的，作为优选，所述胰蛋白酶的酶活为2500U/mg，每克原料干粉中胰蛋白酶的加入量为3000U。在一些实施方案中，所述木瓜蛋白酶水解具体为调节pH至5.5，加入木瓜蛋白酶50～80℃水解2～10小时，灭酶。进一步的，作为优选，所述木瓜蛋白酶的酶活为6000U/mg，每克原料干粉中木瓜蛋白酶的加入量为3000U。在一些实施方案中，所述乙醇沉淀多糖具体为先加入乙醇初步沉淀，然后加入乙醇至乙醇终浓度为60～80v/v％，静置12～20小时。进一步的，所述加入乙醇初步沉淀为按乙醇：酶解液体积比为3:5的比例加入乙醇。其中，所述乙醇沉淀多糖时加入的乙醇优选为95％乙醇。静置后离心收集上清液即获得本专利技术所述海参多肽。其中，所述离心为5000～10000rpm的转速离心10～20min。作为优选，所述离心为4℃条件下6000rpm离心15min。在一些优选实施方案中，本专利技术所述制备方法还包括上清液超滤，收集截留分子量小于3kDa的组分的步骤。进一步的，所述超滤具体为上清液加入截留分子量为3kDa超滤离心管，在6000rpm～8000rpm下离心。本领域技术人员还可以按照公知的方法对乙醇沉淀多糖后离心收集的上清液以及超滤收集的组分进行干燥。优选采用冷冻干燥。在一些实施方案中，本专利技术所述海参多肽的制备方法中，所述超滤前还包括对干燥后海参多肽加水重溶的步骤。其中，所述干燥后海参多肽的重溶优选为配制成浓度为10mg/mL的溶液。本专利技术还提供了上述制备方法制得的海参多肽。在一些实施方案中，所述海参多肽为分子量小于3kDa的海参多肽组分。百草枯是一种联吡啶阳离子类除草剂，在体内能诱导产生活性氧自由基，从分子水平上氧化多种生命物质，使机体处于氧化胁迫环境，进而出现早衰现象。本专利技术将所述海参多肽以及分子量小于3kDa的海参多肽组分分别加入到成虫初期的野生型秀丽线虫中培养，加入百草枯对秀丽线虫进行氧化胁迫造模，定时统计秀丽线虫存活的比率，检测所述海参多肽对百草枯诱导的氧化胁迫的影响，结果显示本专利技术所述海参多肽以及分子量小于3kDa的海参多肽组分均可以显著延长秀丽线虫的氧化胁迫存活率，提高秀丽线虫耐氧化胁迫条件的能力，缓解机体因氧化胁迫而产生早衰的问题。自由基是机体氧化反应中产生的有害化合物，具有强氧化性，可损害机体的组织和细胞，进而引起慢性疾病及衰老效应。因此，通过测定对自由基的清除率，可以反映以清除活性氧自由基为主的抗氧化能力。本专利技术分别将所述海参多肽以及分子量小于3kDa的海参多肽组分加水溶解配制成各受试浓度的多肽样品溶液，加入DPPH溶液，测定吸光度，计算DPPH自由基清除率。结果显示，本专利技术所述海参多肽能够有效地清除体外DPPH自由基，而且呈现浓度依赖性。表明本专利技术所述海参多肽以及分子量小于3kDa的海参多肽组分均有较好的体外抗氧化效果。活性氧类(ROS)是生物有氧代谢过程中的一种副产品，具有较强的氧化活性，在体内主要包括超氧阴离子(O2-)、羟自由基(.OH)和过氧化氢(H2O2)等。过高的活性氧水平会损坏细胞和基因结构，在许多疾病及衰老的发生中起着重要作用。体内存在一道抗氧化防御系统，如超氧化物歧化酶(SOD)是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢；过氧化氢酶(CAT)是一种酶类清除剂，又称为触酶，是以铁卟啉为辅基的结合酶，可促使H2O2分解为分子氧和水，清除体内的过氧化氢，从而使细胞免于遭受H2O2的毒害，是生物防御体系的关键酶之一；丙二醛(MDA)常用作膜脂过氧化程度的指标，能够间接测定膜系统受损程度及受试物的抗膜脂过氧化的能力。本专利技术利用相关的抗氧化检测试剂盒来测定体内抗氧化酶SOD、CAT的活力，以及膜脂过氧化产物MDA的含量，可评价海参多肽以及分子量小于3kDa的海参多肽组分的体内抗氧化能力。结果显示，海参多肽以及分子量小于3kDa的海参多肽组分均可增强秀丽线虫体内SOD、CAT酶活力，而使MDA含量显著降低。表明本专利技术所述海参多肽以及分子量小于3kDa的海参多肽组分可通过提高机体抗氧化防御系统的功能来达到抗氧化、延衰作用，从而缓解由氧化胁迫引起的衰老现象。本专利技术分别将所述海参多肽以及分子量小于3kDa的海参多肽组分加入到成虫初期的野生型秀丽线虫中培养后统计一次秀丽线虫的存活情况，检测所述海参多肽对秀丽线虫寿命的影响。结果显示，本专利技术所述海参多肽以及分子量小于3kDa的海参多肽组分均能够延长秀丽线虫在自然条件下的存活时间，具有延缓衰老进程的作用。线粒体可通过多种途径参与衰老的过程。在氧化应激的条件下，线粒体功能的下降，细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海参多肽的制备方法，其特征在于，取海参体壁匀浆后依次经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水解后，加入乙醇沉淀多糖，离心取上清液。

【技术特征摘要】
1.一种海参多肽的制备方法，其特征在于，取海参体壁匀浆后依次经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水解后，加入乙醇沉淀多糖，离心取上清液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括上清液超滤，收集截留分子量小于3kDa的组分的步骤。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，胰蛋白酶水解具体为调节pH至8.0，加入胰蛋白酶37～55℃水解2～10小时，灭酶。4.根据权利要求1-3任意一项所述的制备方法，其特征在于，所述木瓜蛋白酶水解具体为调节pH至5.5，加入木瓜蛋白酶50～80℃水解2～10小时，灭酶。5.根据权利要求1-4任意一项所述的制备方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭晓蕾，梁明，马忠华，张婷，丁刘刚，秦垂新，毛新亮，
申请(专利权)人：无限极中国有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44