一种高纯度竹荪多糖的制备方法技术

一种高纯度竹荪多糖的制备方法，首先采用热水提取获得提取液，提取液经浓缩、干燥获得竹荪提取物。然后采用不同体积分数的乙醇对竹荪提取物依次沉淀，离心收集沉淀。沉淀再经复溶、透析、醇沉后，再次离心收集沉淀并依次经过无水乙醇洗涤、挥干乙醇及干燥等工艺，得到三种不同的高纯度竹荪多糖。本发明专利技术中高纯度竹荪多糖的制备工艺简单，操作方便，能同时获得多个纯度高的多糖组分。经苯酚硫酸法测定，所得不同级分的竹荪多糖总糖含量均为90%左右。

A preparation method of high purity Dictyophora polysaccharide

A preparation method of high purity polysaccharide, extracted first extracted by hot water, the extract was concentrated and dried to obtain the extract from dictyophora. Then the volume fraction of different ethanol on Dictyophora extracts are precipitation, collected by centrifugation. After re dissolution precipitation, alcohol precipitation, dialysis, and again collected by centrifugation followed by washing with anhydrous ethanol, evaporating ethanol and drying process, get three kinds of high purity polysaccharide. The invention of high purity polysaccharide preparation process is simple, easy to operate, can also obtain a high purity polysaccharide component. The phenol sulfuric acid method, the different fractions of polysaccharide content of total sugar was 90%.

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度竹荪多糖的制备方法
本专利技术属于天然产物多糖制备
，具体涉及一种竹荪多糖的制备方法。
技术介绍
竹荪是世界上名贵的大型食用菌之一，营养丰富、味道鲜美，素有“菌中皇后”、“山珍之王”的称号。竹荪含有蛋白质、多种氨基酸、维生素、多糖和多种微量元素等营养成分。竹荪多糖广泛存在于竹荪子实体的细胞壁中，研究表明竹荪多糖具有抗肿瘤、抗凝血、抗炎症、刺激免疫以及降血压、降血糖等疗效，是竹荪中重要的活性物质。目前，竹荪多糖的制备一般是采用热水提取、稀碱提取或者稀酸提取，然后经过浓缩、醇沉等步骤得到竹荪粗多糖。粗多糖再经脱蛋白和柱层析等工艺得到纯多糖。如杜昱光等人公布的高纯度竹荪多糖的制备方法是首先将原料经预处理，热水抽提，醇析，透析和洗涤等得到粗多糖，然后采用DEAE-纤维素柱进行层析分离获得高纯度竹荪多糖（专利申请公开号为CN1165148A）。王飞娟等制备得到的具有抑制肿瘤细胞生长的红托竹荪菌托多糖也是经过水提醇沉、脱蛋白和SephadexG-75柱层析获得（专利申请公开号为CN101029087A）。专利申请号为CN104262500A公布的“一种具有免疫活性的新型红托竹荪多糖及其制备方法和应用”则是依次采用离子交换层析、凝胶过滤层析、超滤分离和凝胶过滤柱层析四步分离法对竹荪多糖进行纯化。这些竹荪多糖制备方法耗时费力，不适宜进行大规模的应用和竹荪多糖相关产品的开发与应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高纯度竹荪多糖的制备方法，该方法高效快速，有效保存竹荪多糖生物活性，极大地提高了竹荪多糖的纯度。另外，本法工艺过程绿色环保，没有采用任何有害试剂，能够保证食品的安全性。本专利技术是通过以下技术方案实现的。本专利技术所述的一种高纯度竹荪多糖的制备方法，其特征是按如下步骤。（1）将干燥的竹荪子实体粉碎，然后采用90~100℃热水提取，料液比(g/mL)为1:10~1:30，提取时间为2~6h，提取次数为1~3次。合并提取液。提取液经浓缩、干燥等工艺获得竹荪提取物。（2）称取一定量竹荪提取物，加水溶解，溶解温度为20~50℃，质量体积比（g/mL）为1:5~1:30。（3）向步骤（2）的溶液中缓慢加入体积分数为95%~100%的乙醇溶液，直至体系中乙醇体积分数达到20%，于4~25℃静置8~14h，将上述醇沉体系3000~4800r/min离心分离10~20min，分别收集沉淀和上清液。（4）向步骤（3）的离心分离所得上清液中继续加入体积分数为95%的乙醇溶液，直至体系中乙醇体积分数达到40%，于4~25℃静置8~14h，将上述醇沉体系3000~4800r/min离心分离10~20min，分别收集沉淀和上清液。（5）向步骤（4）的离心分离所得上清液中继续加入体积分数为95%的乙醇溶液，直至体系中乙醇体积分数达到60%，于4~25℃静置8~14h，将上述醇沉体系3000~4800r/min离心分离10~20min，分别收集沉淀和上清液。（6）向步骤（5）的离心分离所得上清液中继续加入乙醇溶液（乙醇体积分数为95%）直至体系中乙醇体积分数达到80%，于4~25℃静置8~14h，将上述醇沉体系3000~4800r/min离心分离10~20min，分别收集沉淀和上清液。（7）分别将步骤（4）、（5）和（6）中离心分离所得沉淀物加水复溶，转移至装入透析袋（截留分子量3500Da）中，放置于冰盒中用蒸馏水透析48~72h，得三个透析液浓缩。（8）将步骤（7）中的三个透析液浓缩，分别加入乙醇溶液（乙醇体积分数为95~100%），直至体系中乙醇体积分数达到80%，于4~25℃静置8~14h，将上述三个醇沉体系分别3000~4800r/min离心分离10~20min，离心所得沉淀物再用无水乙醇洗涤2~4次，干燥得到三个高纯度竹荪多糖组分。本专利技术步骤（1）中提取液浓缩至原体积的1/5~1/20，干燥方式采用喷雾干燥或冷冻干燥。本专利技术步骤（1）中提取液经浓缩、干燥即得竹荪提取物。竹荪提取物呈暗黄色粉末，易溶于水，苯酚硫酸法测得糖含量为80%以上，完全酸水解之后只有葡萄糖检出，液相色谱图在13~19min具有两个明显的特征峰（见附图1）。本专利技术以竹荪为原料，通过提取及乙醇分级沉淀技术同时获得三个级分的高纯度竹荪多糖样品，其主要优点是：1、多糖制备步骤简单，所得多糖纯度高，所得多糖的总糖含量达到85%以上，最高可以达到98%；2、制备工艺绿色环保，可为天然产物中高纯度多糖提供参考，应用前景广。附图说明图1为实施例1中高纯度竹荪多糖凝胶色谱示差信号图。具体实施方式本专利技术将通过以下实施例作进一步说明。实施例1。称取100g竹荪子实体粉末，90℃热水浴条件下，1:30料液比（g/mL）提取2h，提取2次后合并提取液，然后将提取液浓缩至800mL左右，采用真空干燥获得竹荪提取物。称取50g竹荪提取物，按质量体积比（g/mL）1:10的比例加500mL水溶解后，加入质量分数为95%的乙醇沉淀多糖，体系中的乙醇体积分数控制在20%，置于4℃静置8h，离心（4800r/min，10min），弃去沉淀。向上清液中继续加入乙醇至体系中的乙醇体积分数为40%，置于4℃静置10h。离心得到沉淀用无水乙醇洗涤两次，再次离心收集沉淀，加水复溶后，透析三天。透析液经浓缩、醇沉、离心、无水乙醇洗涤、真空干燥得到40%乙醇沉淀组分，记为A1。同样的继续加入乙醇溶液得到体系乙醇体积分数为60%，80%的多糖组分，分别记为A2和A3。实施例2。称取100g竹荪子实体粉末，90℃热水浴条件下，1:20料液比（g/mL）提取2h，提取3次后合并提取液，然后将提取液浓缩至400mL左右，采用冷冻干燥获得竹荪提取物。称取50g竹荪提取物，按质量体积比（g/mL）1:10的比例加500mL水溶解后，加入质量分数为95%的乙醇沉淀多糖，体系中的乙醇体积分数控制在20%，置于10℃静置10h，离心（3000r/min，20min），弃去沉淀。向上清液中继续加入乙醇至体系中的乙醇体积分数为40%，置于10℃静置12h。离心得到沉淀用无水乙醇洗涤两次，再次离心收集沉淀，加水复溶后，透析三天。透析液经浓缩、醇沉、离心、无水乙醇洗涤、真空干燥得到40%乙醇沉淀组分，记为B1（糖含量：97.3%）。同样的继续加入乙醇溶液得到体系乙醇体积分数为60%，80%的多糖组分，分别记为B2（糖含量：95.0%）和B3（糖含量：89.2%）。实施例3。称取100g竹荪子实体粉末，95℃热水浴条件下，1:30料液比（g/mL）提取2h，提取2次后合并提取液，然后将提取液浓缩至600mL左右，喷雾干燥获得竹荪提取物。称取25g竹荪提取物，按质量体积比（g/mL）1:20的比例加500mL水溶解后，加入质量分数为95%的乙醇沉淀多糖，体系中的乙醇体积分数控制在20%，置于4℃静置10h，离心（4800r/min，15min），弃去沉淀。向上清液中继续加入乙醇至体系中的乙醇体积分数为40%，置于4℃静置12h。离心得到沉淀用无水乙醇洗涤两次，再次离心收集沉淀，加水复溶后，透析两天。透析液经浓缩、醇沉、离心、无水乙醇洗涤、真空干燥得到40%乙醇沉淀组分，记为C1（糖含量：93.7%）。同样的继续加入乙醇本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高纯度竹荪多糖的制备方法，其特征是按如下步骤：（1）将干燥的竹荪子实体粉碎，然后采用90~100℃热水提取，料液比（g/mL）为1:10~1:30，提取时间为2~6 h，提取次数为1~3次，合并提取液；提取液经浓缩、干燥等工艺获得竹荪提取物；（2）称取一定量竹荪提取物，加水溶解，溶解温度为20~50 ℃，质量体积比（g/mL）为1:5~1:30；（3）向步骤（2）的溶液中缓慢加入体积分数为95%~100%的乙醇溶液，直至体系中乙醇体积分数达到20%，于4~25 ℃静置8~14 h，将上述醇沉体系3000~4800 r/min离心分离10~20 min，分别收集沉淀和上清液；（4）向步骤（3）的离心分离所得上清液中继续加入体积分数为95%的乙醇溶液，直至体系中乙醇体积分数达到40%，于4~25 ℃静置8~14 h，将上述醇沉体系3000~4800 r/min离心分离10~20 min，分别收集沉淀和上清液；（5）向步骤（4）的离心分离所得上清液中继续加入体积分数为95%的乙醇溶液，直至体系中乙醇体积分数达到60%，于4~25 ℃静置8~14 h，将上述醇沉体系3000~4800 r/min离心分离10~20 min，分别收集沉淀和上清液；（6）向步骤（5）的离心分离所得上清液中继续加入体积分数为95%的乙醇溶液，直至体系中乙醇体积分数达到80%，于4~25 ℃静置8~14 h，将上述醇沉体系3000~4800 r/min离心分离10~20 min，分别收集沉淀和上清液；（7）分别将步骤（4）、（5）和（6）中离心分离所得沉淀物加水复溶，转移至装入透析袋（截留分子量3500 Da）中，放置于冰盒中用蒸馏水透析48~72 h，得三个透析液浓缩；（8）将步骤（7）中的三个透析液浓缩，分别加入体积分数为95~100%的乙醇溶液，直至体系中乙醇体积分数达到80%，于4~25℃静置8~14 h，将上述三个醇沉体系分别3000~4800 r/min离心分离10~20 min，离心所得沉淀物再用无水乙醇洗涤2~4次，干燥得到三个高纯度竹荪多糖组分。...

【技术特征摘要】
1.一种高纯度竹荪多糖的制备方法，其特征是按如下步骤：（1）将干燥的竹荪子实体粉碎，然后采用90~100℃热水提取，料液比（g/mL）为1:10~1:30，提取时间为2~6h，提取次数为1~3次，合并提取液；提取液经浓缩、干燥等工艺获得竹荪提取物；（2）称取一定量竹荪提取物，加水溶解，溶解温度为20~50℃，质量体积比（g/mL）为1:5~1:30；（3）向步骤（2）的溶液中缓慢加入体积分数为95%~100%的乙醇溶液，直至体系中乙醇体积分数达到20%，于4~25℃静置8~14h，将上述醇沉体系3000~4800r/min离心分离10~20min，分别收集沉淀和上清液；（4）向步骤（3）的离心分离所得上清液中继续加入体积分数为95%的乙醇溶液，直至体系中乙醇体积分数达到40%，于4~25℃静置8~14h，将上述醇沉体系3000~4800r/min离心分离10~20min，分别收集沉淀和上清液；（5）向步骤（4）的离心分离所得上清液中继续加入体积分数为95%的乙醇溶液，直至体系中乙醇体积分数达到60%，于4~25℃静置8...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂少平，施晓丹，张全才，李欧叶，黄延盛，殷军艺，胡流云，聂启兴，张爽，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：江西,36