免疫诊断急性肝胰腺坏死综合症的蛋白卵黄抗体及其制备工艺和应用制造技术

本发明专利技术涉及免疫诊断急性肝胰腺坏死综合症的蛋白卵黄抗体及其制备工艺和应用，所述卵黄抗体以pirA和pirB蛋白作为抗原免疫产蛋禽类，并从其卵的卵黄中提取，能够与所述pirA和pirB蛋白特异性结合。本发明专利技术制备得到的蛋白卵黄抗体具有良好的活性和特异性，具有良好的稳定性和耐高渗性，同时本发明专利技术的制备方法具有效益高、安全、成本低、环保和高效预防等特点，为急性肝胰腺坏死综合症的防治及检测提供有效途径。

Egg yolk antibody for immunological diagnosis of acute liver pancreas necrosis syndrome and preparation process and application thereof

The present invention relates to the diagnosis of acute immune liver pancreatic necrosis syndrome protein yolk antibody and its preparation process and application of the yolk antibody by pirA and pirB protein as antigen to immunize laying poultry, and extracted from the egg yolk, can be combined with the pirA and pirB protein. Has good activity and specificity of yolk antibody prepared by the invention, has good stability and high performance, and the preparation method of the invention has high efficiency, low cost, safety, environmental protection and efficient prevention etc., provide an effective way for prevention and detection of acute liver necrosis of pancreas syndrome.

【技术实现步骤摘要】
免疫诊断急性肝胰腺坏死综合症的蛋白卵黄抗体及其制备工艺和应用
本专利技术属于生物工程与水产疫病检测
，具体涉及一种抗急性肝胰腺坏死综合症毒素蛋白卵黄抗体、其制备方法及应用。
技术介绍
自2009年以来，早期死亡综合症(EMS)，又称急性肝胰腺坏死综合症(AHPNS)给亚洲，特别是东南亚和中国的对虾养殖产业造成了前所未有的冲击。除了大规模减产外，该疾病还带来了诸多负面问题，例如：对虾养殖就业问题、社会福利问题、对虾供求问题和全球对虾总体价格问题等等。2013年5月，美国亚利桑那大学水产病理实验室(UAZ-APL)定义急性肝胰腺坏死综合症(AHPNS)病原为副溶血弧菌的特异菌株，该菌株能够产生毒素并诱导健康对虾致病。2014年，在世界范围内普遍证实目前APHND的病因与副溶血弧菌所携带的毒素质粒所表达的PirA和PirB两种毒素相关。目前针对该疾病的诊断集中在对毒素质粒的基因检测。现阶段已出现了一种商业化的基因检测试剂盒和三种通过基础研究得出的不同引物设计得到的诊断方法。CN103667498A公开了副溶血性弧菌的检测方法。所述方法用于副溶血性弧菌检测的特异性引物是根据副溶血性弧菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗急性肝胰腺坏死综合症毒素蛋白卵黄抗体，其特征在于，以pirA和pirB蛋白作为抗原免疫产蛋禽类，并从其卵黄中提取，其与所述pirA和pirB蛋白特异性结合。

【技术特征摘要】
1.一种抗急性肝胰腺坏死综合症毒素蛋白卵黄抗体，其特征在于，以pirA和pirB蛋白作为抗原免疫产蛋禽类，并从其卵黄中提取，其与所述pirA和pirB蛋白特异性结合。2.根据权利要求1所述的卵黄抗体，其特征在于，所述pirA蛋白的氨基酸序列包含如SEQIDNO.1所示的片段。3.根据权利要求1或2所述的卵黄抗体，其特征在于，所述pirB蛋白的氨基酸序列包含如SEQIDNO.2所示的片段。4.一种如权利要求1-3任一项所述的抗急性肝胰腺坏死综合症毒素蛋白卵黄抗体的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)制备所述pirA和pirB蛋白抗原；(2)使用所述pirA和pirB蛋白抗原及佐剂，对产蛋禽类进行注射免疫，检取免疫禽类所产的免疫蛋；(3)取所述免疫蛋的蛋黄，分离纯化IgY卵黄抗体。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括：(a)通过PCR扩增技术获得所述pirA和pirB的基因序列，并将pirA和pirB的基因序列重组到表达载体中，构建重组载体；(b)将重组载体转化到克隆菌种，筛选含有所述pirA和pirB基因序列的阳性转化菌；(c)从所述阳性转化菌中提取所述重组载体，并转化到表达菌中，得到含有所述pirA和pirB基因序列的阳性表达菌，对所述阳性表达菌扩大培养，诱导所述pirA和pirB蛋白表达；(d)分离纯化所述pirA和pirB蛋白。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述PCR扩增的引物为：其中，所述pirA基因序列的PCR扩增引物为：上游引物如SEQIDNO.3所示，下游引物如SEQIDNO.4所示；其中，所述pirB基因序列的PCR扩增引物为：上游引物如SEQIDNO.5所示，下游引物如SEQIDNO.6所示；优选地，所述PCR退火温度为57-58℃。7.根据权利要求4-6中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述免疫产蛋鸡的方法为...

【专利技术属性】
技术研发人员：祁振强，肖宏学，
申请(专利权)人：深圳市宝舜泰科技产业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44