一种类肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物医学技术领域，具体涉及一种类肽，尤其涉及一种类肽及其制备方法和应用，所述类肽包括乙二胺、4‑苯基苄胺、β‑苯乙胺、四亚甲基二胺、3,4‑亚甲二氧基苄胺、异丁胺、R(+)‑α‑甲基苄胺、甘氨酸和3‑氨基丙酸亚单位。本发明专利技术类肽对血清中β‑淀粉样蛋白具有高灵敏度，可以通过识别血清中的β‑淀粉样蛋白进而对病人和正常人血清进行有效地区分，为诊断和监控阿尔茨海默症疾病提供了新的选择。

Class peptide and preparation method and application thereof

The present invention relates to the field of biomedical technology, in particular to a kind of peptide, in particular to a kind of peptide and preparation method and application thereof, wherein the peptide including ethylenediamine, 4 phenyl benzylamine, beta phenylethylamine, four methylene two amine, 3,4 methylene two methoxy benzylamine, isobutylamine and R (+) alpha methylbenzylamine, glycine and 3 amino acid subunit. The present invention has high sensitivity to beta peptide amyloid protein in serum by beta amyloid recognition in the serum of patients and normal human serum were effective area, provides a new choice for diagnosis and monitoring of Alzheimer's disease.

【技术实现步骤摘要】
一种类肽及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物医学
，具体涉及一种类肽，尤其涉及一种类肽及其制备方法和应用，具体涉及一种能够检测血清中β-淀粉样蛋白含量的类肽及其制备方法和应用。
技术介绍
阿尔茨海默症(Alzheimer’sDisease,AD)是一种由淀粉样多肽的错误折叠和异常聚积造成的以进行性记忆力减退和认知功能障碍为发病症状的老年期高发病率的神经系统变性疾病。根据国际阿尔茨海默病协会(Alzheimer’sDiseaseInternational,ADI)2015年发布的《2015年全球阿尔茨海默症报告》显示，估计目前全球共有约4680万失智患者。这一数量将以每20年递增一倍的速度逐渐增加，预计到2030年将达到7470万，到2050年达1亿3150万人。这一估计比世界阿尔茨海默病2009年报告中增加了12％-13％。国际阿尔茨海默症联合会称在中国，有900万人患有痴呆症。但这一数字可能人为偏低，因为农村地区很多患者从未得到诊断。国际阿尔茨海默症联合会估计，到2050年，中国的患者数量估计将达到3000万。我国作为全球人口第一大国，目前老龄化的社会现象越来越严重，而且65岁以上的老人患阿尔茨海默症病率为6.6％，在85岁以上的老人中发病率高达30％以上。因此阿尔茨海默症成为我们必须要面对的重大社会问题。AD的发病机制复杂，至今未有定论，目前人们提出几种假说，如胆碱能神经异常学说、淀粉样蛋白级联学说、自由基与凋亡学说、tau蛋白异常修饰学说、线粒体代谢障碍学说、兴奋性氨基酸毒性学说及基因突变学说等。在众多AD的致病机理假说中，淀粉样蛋白级联假说被越来越多的研究所证实。淀粉样蛋白级联假说认为脑内淀粉样蛋白前体(amyloidproteinprecursor,APP)的异常代谢使得Aβ的产量增多、降解减少，引起Aβ的大量聚集，形成寡聚体、原纤维和纤维等聚集体，进而形成淀粉样斑块，即老年斑。Aβ虽然不是唯一的致病原因，但是Aβ在阿尔兹海默病的发展中起着核心的作用，要认为大脑内过量的β-淀粉样蛋白及其聚集形成的聚集物是诱发AD的核心因素。并且Aβ会在大脑和血液间流通，因此血清中Aβ的含量可以作为检测AD的标志物。目前，由于AD病因未明，诊断首先要根据临床表现作出痴呆的诊断，然后对病史、病程的特点、体格检查及神经系统检查、心理测试与辅助检查的资料综合分析，排除其他原因引起的痴呆，才能诊断为AD。最常用的有简易智能状态检查，是一个非常简单的测试工具。此外，阿尔兹海默病评定量表亦是国际通用的测试工具。这些检测需要医生具有丰富的经验和知识。还有一些其他的检测手段，比如影像学检查可见脑萎缩像，如侧脑室、三脑室增大；PET、SPECT、MRI可见顶叶低代谢区；脑电图检查早期α节律丧失及电位降低，常见弥散性慢波，且脑电图减慢的程度和痴呆严重程度相关；脑脊液检测tau蛋白、β淀粉样蛋白的提高等，这些方法都具有一些局限性。如CN106018827A公开一种阿尔茨海默症检测标志物及其检测方法，所述提供的一组血清差异蛋白可用于阿尔茨海默症检测，但目前的方法缺乏准确性和特异性，并且需要病人出现一定的病理特征才能够检测到。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种类肽及其制备方法和应用，可以更简便、更灵敏、更低成本、无创伤的方法检测血液中β淀粉样蛋白含量来诊断和监控AD(阿尔茨海默症)，能够有效地通过血清中的Aβ来对病人和正常人血清进行区分。为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种类肽，其特征在于，所述类肽包括乙二胺(Ⅰ)、4-苯基苄胺(Ⅱ)、β-苯乙胺(Ⅲ)、四亚甲基二胺(Ⅳ)、3,4-亚甲二氧基苄胺(Ⅴ)、异丁胺(Ⅵ)、R(+)-α-甲基苄胺(Ⅶ)、甘氨酸(Ⅷ)和3-氨基丙酸(Ⅸ)亚单位。类肽(peptoid)是以N-取代甘氨酸为单元，与多肽结构相似的非天然折叠体。它可以折叠成高生物活性和高特异性的功能单元，且其组成单元比多肽更丰富，并能够耐受蛋白酶，因此，类肽化合物具有良好的生物活性和化学性质。所述各亚单位的分子式如下所示：根据本专利技术，所述类肽包含的亚单位的顺序为(Ⅰ-Ⅱ-Ⅰ-Ⅲ)n-Ⅰ-Ⅱ-Ⅳ-Ⅴ-Ⅵ-Ⅳ-Ⅳ-Ⅶ-Ⅳ-Ⅷ-Ⅸ-Ⅲ-(Ⅸ-Ⅱ-Ⅸ-Ⅳ)n，其中，所述n为3-7的正整数。所述n例如可以是3、4、5、6或7，以及上述数值之间的具体点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本专利技术不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。本专利技术中，所设计合成的类肽是中间嵌有能特异性识别β淀粉样蛋白的类肽嵌段的两亲性类肽，该两亲性类肽在气-液界面上自组装形成表面带有特异性识别β淀粉样蛋白的类肽环的类肽纳米片层。特异性识别β淀粉样蛋白的类肽环作为分子识别探针，可结合阿尔兹海默症生物标志物β淀粉样蛋白，而类肽纳米片层作为支架展示和支撑类肽环分子识别探针。利用该类肽纳米片层，结合表面等离激元共振技术，可用于阿尔兹海默症生化检测。优选地，所述类肽具有式I所示的结构：其中，所述n为3-7的正整数。第二方面，本专利技术提供一种如第一方面所述的类肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法通过固相亚单元合成法合成。优选地，所述制备方法包括以下步骤：(1)溴乙酸在N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)的活化下与前一亚单位的氨基反应形成酰胺键；(2)加入伯胺通过亲核置换反应替换掉溴原子；(3)重复步骤(1)和(2)直至完成所有亚单位的合成。第三方面，本专利技术提供一种检测剂，所述检测剂包含如第一方面所述的类肽。优选地，所述检测剂还包含药学上接受的辅料。优选地，所述辅料为赋形剂、稀释剂、载体、调味剂、粘合剂和填充剂中的任意一种或至少两种的组合。第四方面，本专利技术如第一方面所述的类肽或如第三方面所述的检测剂在制备检测、诊断或监控与β-淀粉样蛋白相关的疾病的药物中的应用。优选地，所述疾病包括阿尔茨海默病。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：(1)本专利技术的类肽与Aβ结合能力较强，通过表面等离基元共振技术得到的本专利技术的类肽与Aβ的结合动力学常数中的平衡解离常数KD为10-10摩尔/升数量级；(2)本专利技术类肽对血清中β-淀粉样蛋白具有高灵敏度，可以通过识别血清中的β-淀粉样蛋白进而对病人和正常人血清进行有效地区分，可利用表面等离基元共振技术检测类肽对AD病人与正常人血液信号强度，可以明显区分病人与正常人；(3)本专利技术的类肽在发病早期就可进行检测，且无需给病人造成创伤，而且检测准确性高，特异性好；(4)本专利技术类肽合成简单，成本低。附图说明图1为类肽的荧光显微图像，其中，图1(a)的标尺是50μm，图1(b)的标尺是20μm；图2为类肽的原子力显微图像，其中，图2(a)的标尺是1μm，图2(b)的标尺是100nm；图3为本专利技术的类肽分子与β-淀粉样蛋白结合的表面等离基元共振检测的结果，其中，Aβ分别在2.2μM、4.6×10-1μM、9.1×10-2μM、1.8×10-2μM和3.6×10-3μM浓度下与类肽的结合过程；图4为本专利技术的类肽对AD病人与正常人血清信号的对比效果。具体实施方式下面通过具体实施方式来进一步说明本专利技术的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本专利技术，不应视为对本专利技术的具体限制。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种类肽，其特征在于，所述类肽包括乙二胺(Ⅰ)、4‑苯基苄胺(Ⅱ)、β‑苯乙胺(Ⅲ)、四亚甲基二胺(Ⅳ)、3,4‑亚甲二氧基苄胺(Ⅴ)、异丁胺(Ⅵ)、R(+)‑α‑甲基苄胺(Ⅶ)、甘氨酸(Ⅷ)和3‑氨基丙酸(Ⅸ)亚单位。

【技术特征摘要】
1.一种类肽，其特征在于，所述类肽包括乙二胺(Ⅰ)、4-苯基苄胺(Ⅱ)、β-苯乙胺(Ⅲ)、四亚甲基二胺(Ⅳ)、3,4-亚甲二氧基苄胺(Ⅴ)、异丁胺(Ⅵ)、R(+)-α-甲基苄胺(Ⅶ)、甘氨酸(Ⅷ)和3-氨基丙酸(Ⅸ)亚单位。2.根据权利要求1所述的类肽，其特征在于，所述类肽包含的亚单位的顺序为(Ⅰ-Ⅱ-Ⅰ-Ⅲ)n-Ⅰ-Ⅱ-Ⅳ-Ⅴ-Ⅵ-Ⅳ-Ⅳ-Ⅶ-Ⅳ-Ⅷ-Ⅸ-Ⅲ-(Ⅸ-Ⅱ-Ⅸ-Ⅳ)n，其中，所述n为3-7的正整数。3.根据权利要求1或2所述的类肽，其特征在于，所述类肽具有式I所示的结构：其中，所述n为3-7的正整数。4.一种如权利要求1-3中任一项所述的类肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法通过固相亚单元合成法合成；优选地，所述制备方法包...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱凌，高厚乾，赵子健，杨延莲，胡志远，刘长亮，刘明珠，
申请(专利权)人：国家纳米科学中心，
类型：发明
国别省市：北京,11