一种坛紫菜双单倍体育种的方法技术

一种坛紫菜双单倍体育种的方法，选择杂交亲本；促使两亲本成熟的纯系丝状体放散壳孢子培养，得亲本叶状体；选择雌雄叶状体进行杂交；雌雄叶状体培养后去雄性叶状体，保留雌性叶状体单棵培养，至果孢子放出；将果孢子单个培养至萌发成杂合丝状体，打碎继续培养；取出部分丝状体促熟，释放壳孢子，过滤后培养，得F1代叶状体，挑出叶状体，取不同颜色的藻块置于葡萄糖溶液中浸泡酶解，当藻体碎片游离出单细胞或多细胞团时，挑取单个细胞培养；至培养液恢复为正常的消毒海水再继续培养，双单倍体诱导成功；将纯系丝状体吸出扩大培养并作为种质保存；再取出部分丝状体促熟，促使成熟的纯系丝状体放散壳孢子，收集壳孢子培养，得F2代纯系叶状体。

Double haploid breeding method of Porphyra haitanensis

A method of double haploid breeding of Porphyra haitanensis, selection of hybrid parents; promote pure conchocelis release conchospores two parental mature culture to parent thallus; selection of male and female were male and female to male; thallus somatic culture, retain female thallus of single tree cultivation, and carpospore will release; carpospore single cultured to germinate into heterozygous conchocelis, continue to break out some filamentous culture; ripening, release conchospores, filtered culture, F1 generation of thallus, pick the thallus, different color blocks are arranged on the glucose solution of algae soak in the enzyme solution, when algae debris free single cell or multicellular, from single cell culture medium; to restore normal water disinfection to culture, double haploid induction will be successful; pure filaments extend cultivation and suck as Germplasm Preservation, and then take out some of the filamentous mature, to promote the mature pure line filamentous release spore shell, collect shell spore culture, obtained F2 generation pure line thallus.

【技术实现步骤摘要】
一种坛紫菜双单倍体育种的方法
本专利技术涉及坛紫菜，尤其是涉及一种坛紫菜双单倍体(Doublehaploid)育种的方法。
技术介绍
坛紫菜(Pyropiahaitanensis)是我国紫菜人工栽培的两个主要种类之一，原产于我国福建沿海，是我国特有的暖温带性种类。自上世纪60年代全人工栽培取得成功以来，坛紫菜的栽培面积不断扩大，目前已成为我国南方沿海海水养殖的主要对象之一，其产量占全国紫菜总产量的75％以上，创造了极其可观的经济效益。随着坛紫菜产业的发展，对良种的需要更为迫切和多元化，传统的坛紫菜育种方法包括选择育种、诱变育种、杂交育种等，均需要经过多代的遗传纯化，才能获得性状稳定遗传的优良品系，耗费的时间长，效率低。坛紫菜的生活史可以分为形态结构完全不同的两个世代：叶状体世代和丝状体世代。叶状体世代为单倍体，是海上人工栽培和收获的对象；而丝状体世代则为双倍体，是室内人工育苗的对象，可以作为种质材料长期保存。坛紫菜生活史世代交替的减数分裂过程发生于丝状体放散的壳孢子的第一次和第二次分裂时期，随后产生的4个子细胞继续分裂，最终发育成为一株由2～4块遗传组成不同的藻块嵌合而成的叶状体(Y本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种坛紫菜双单倍体育种的方法，其特征在于包括以下步骤：1)选择杂交亲本；2)分别促使两亲本成熟的纯系丝状体放散壳孢子，收集壳孢子于消毒海水中培养以获得亲本叶状体；3)培养亲本叶状体后，分别选择健康的雌雄叶状体作为亲本，进行杂交实验；4)进行雌雄叶状体的混合培养，再去掉雄性叶状体，保留雌性叶状体进行单棵培养，直至果孢子放出为止；5)将收集到的果孢子单个培养于试管中，直至萌发成杂合丝状体，再用组织粉碎机将丝状体藻落打碎后，继续培养；6)待杂合丝状体长至足够量时，取出部分丝状体进行促熟，并促使成熟的杂合丝状体释放壳孢子，收集到的壳孢子经筛绢过滤后，置于培养瓶中培养，获得F1代叶状体；7)F1代叶状体...

【技术特征摘要】
1.一种坛紫菜双单倍体育种的方法，其特征在于包括以下步骤：1)选择杂交亲本；2)分别促使两亲本成熟的纯系丝状体放散壳孢子，收集壳孢子于消毒海水中培养以获得亲本叶状体；3)培养亲本叶状体后，分别选择健康的雌雄叶状体作为亲本，进行杂交实验；4)进行雌雄叶状体的混合培养，再去掉雄性叶状体，保留雌性叶状体进行单棵培养，直至果孢子放出为止；5)将收集到的果孢子单个培养于试管中，直至萌发成杂合丝状体，再用组织粉碎机将丝状体藻落打碎后，继续培养；6)待杂合丝状体长至足够量时，取出部分丝状体进行促熟，并促使成熟的杂合丝状体释放壳孢子，收集到的壳孢子经筛绢过滤后，置于培养瓶中培养，获得F1代叶状体；7)F1代叶状体培养后，挑出叶状体，于解剖镜下观察，分别取各个不同颜色的藻块放置于葡萄糖溶液中浸泡，然后再转移至海螺酶溶液中酶解，观察细胞解离状况，当在显微镜下观察到藻体碎片游离出大量单细胞或多细胞团时，挑取单个细胞置于96孔板的F1培养液中培养；8)用消毒海水更换1/2F1培养液，直至培养液恢复为正常的消毒海水，再继续培养，即可看到96孔板中单倍体的单细胞被诱导成了双倍体的纯系丝状体，即双单倍体诱导成功；9)将96孔板中的纯系丝状体分别吸出置于广口瓶中静水扩大培养，并作为种质保存；10)待纯系丝状体长至足够量时，取出部分丝状体进行促熟，待丝状体成熟后，促使成熟的纯系丝状体放散壳孢子，收集壳孢子于消毒海水中培养，获得F2代纯系叶状体；11)对F2代纯系叶状体进行性状测定和评价，从中挑选出符合育种预期的纯系经中试应用确认性状稳定后，即完成坛紫菜双单倍体育种。2.如权利要求1所述一种坛紫菜双单倍体育种的方法，其特征在于在步骤1)中，所述选择杂交亲本，是选择各具不同优良性状、不同性别的坛紫菜纯系藻体作为杂交亲本，且两个亲本藻体的颜色应能明显区分。3.如权利要求1所述一种坛紫菜双单倍体育种的方法，其特征在于在步骤2)中，所述分别促使两亲本成熟的纯系丝状体放散壳孢子是用充气加水流刺激法分别促使两亲本成熟的纯系丝状体放散壳孢子；所述培养的条件为：温度20±1℃，光照1000Lx，12L:12D；在步骤3)中，所述培养亲本叶状体可培养50d。4.如权利要求1所述一种坛紫菜双单倍体育种的方法，其特征在于在步骤4)中，所述进行雌雄叶状体的混合培养是按1︰1的比例进行雌雄叶状体的混合培养；所述再去掉雄性叶状体，可2周后再去掉雄性叶状体；所述单棵培养的条件可为：温度20±1℃，光照1000Lx，12L:12D。5.如权利要求1所述一种坛紫菜双单倍体育种的方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢潮添，陈昌生，徐燕，纪德华，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建,35