化学品毒性藻红外测试的三指标评价方法技术

本发明专利技术公开了一种化学品毒性藻红外测试的三指标评价方法，该方法采用对照组与加药组的最大藻温差绝对值的比较值、对照组与加药组的平均藻温差之和的比较值和藻响应率（ψ）的三个指标评价藻对药液的响应，相较于采用加药组最大藻温差绝对值与对照组最大藻温差绝对值的正差值的一指标法，本发明专利技术方法有效降低了分析结果的偶然性，保证了测试藻对药液响应结果的质量，能够控制假结果出现率为20%，由其评价藻响应重金属的灵敏度为0.001～0.1mg/L，由其得到的测试结果的平均重现率为86.8～100％、重现性的出现率为100%，具有准确性高，重复性好，灵敏度高的特点。

【技术实现步骤摘要】
化学品毒性藻红外测试的三指标评价方法
本专利技术属于化学品急性毒性检测领域，尤其涉及一种化学品毒性藻红外测试的三指标评价方法。
技术介绍
藻类细胞具有光合磷酸化和氧化磷酸化的两套能量代谢系统，毒物作用前后藻代谢能量会产生微量变化，这种微能量变化可被红外测温仪测试，对测试藻温进行处理便能分析藻对毒物的响应。该技术具有快速、简便、价廉、可现场测试等特点，然而，该技术一直存在4个问题：一是未考虑红外测温仪测试的末位藻温波动性，每次每个测试杯只测1个藻温，与波动藻温平均值的偏差较大；二是未考虑到两个测试杯的藻温之差伴随整个测温过程，在毒性测试藻响应温差时未减去；三是用加药组和对照组只能得到1种藻温差，不能藻温差比较分析；四是只用了藻响应温差这一个指标分析藻对毒物的响应，效果较差。这4个问题的存在，使藻红外测试技术测试毒物毒性的性能较低。目前，国内外关于急性毒性的单细胞微生物测试法改进的研究报道主要有发光细菌生物毒性测试方法的改进、发光细菌毒性测试条件的优化、发光细菌急性毒性测试方法的优化、水质急性毒性发光细菌测试法的改进、对测试水质发光细菌的菌种进行改进、MenzJ等对发光细菌法进行改进。关于藻红外测试研究有敏感藻的确定方法、重金属急性毒性藻红外测试、农药急性毒性藻红外测试、有机毒害物急性毒性藻红外测试、急性毒性藻红外测试中联合作用的评价方法、藻红外测试多元有机毒物急性毒性的初步分析、急性毒性藻红外测试中联合作用评价法的重现性，有关化学品急性毒性藻红外测试技术改进方法的研究尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术针对现有藻红外测试方法测试毒物毒性性能较低的问题，提供一种化学品毒性藻红外测试的三指标评价方法。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种化学品毒性藻红外测试的三指标评价方法，包括以下步骤：(1)藻响应测试选择滇池铜绿微囊藻为供试藻，其藻密度≥3.16×109个/L；藻温测试过程：空白组3重复，对照组3重复，加药组3重复，在每个测试杯中分别加入5mL藻液，加完后测试每个测试杯的藻温；然后进行以下加药测试：①蒸馏水毒性测试时，用滴液管分别滴加蒸馏水0.05mL于加药组和对照组的测试杯中，待藻温稳定时测试每个测试杯的藻温；②待测药品的毒性测试时，用滴液管滴加0.05mL待测药液于加药组的测试杯中，用滴液管滴加蒸馏水0.05mL于对照组的测试杯中，滴加完后测试每个测试杯的藻温；(2)数据分析藻响应温差计算方法为：ΔT＝∣ΔTj∣―∣ΔTd∣，ΔT＞0加药组藻温差计算方法为：ΔTj＝(Tj-ti-Tj-t0)-(Tk-ti-Tk-t0)对照组藻温差计算方法为：ΔTd＝(Td-ti-Td-t0)-(Tk-ti-Tk-t0)式中：Tj-ti—加药后加药组的藻温；Tj-t0—加药前加药组的藻温；Tk-ti—加药后空白组的藻温；Tk-t0—加药前空白组的藻温；Td-ti—加水后对照组的藻温；Td-t0—加水前对照组的藻温；j—加药组，滴加药液；d—对照组，滴加蒸馏水；k—空白组，不滴加药液或蒸馏水；ti—测温遍数，i＝0,为加药前的测温；i＝1,2…n,为加药后第1,2…n遍测温；(3)三指标法评价藻对药液的响应当藻温差数据同时满足下面三个指标时，表示藻对药液有响应：指标①—最大藻温差比较值，︱ΔTj-max︱＞︱ΔTd-max︱；指标②—平均藻温差比较值，∣Δ〒j∣＞∣Δ〒d∣；指标③—藻响应率(ψ)，∣ΔTj∣＞∣ΔTd∣的出现次数≥6；其中：ΔTj-max—加药组的最大藻温差，ΔTd-max—对照组的最大藻温差，Δ〒j—加药组的平均藻温差，Δ〒d—对照组的平均藻温差。作为优选，步骤(1)中测藻温时，每次每个测试杯连测3个藻温，3个藻温的平均值即为测试杯的藻温。作为优选，步骤(1)中加药前测温1遍，加药后测温10遍，其中，三个重复测温完成即为测温1遍，前一遍测温完成后，按相同的测温顺序进行下一遍测温。作为优选，三指标法评价藻响应重金属的灵敏度为0.001～0.1mg/L。作为优选，所述待测药品为重金属、农药、有机药品、抗生素。相比现有技术，本专利技术具有如下有益效果：1、本专利技术采用三指标法(即最大藻温差比较值、平均藻温差比较值、藻响应率的分析法)分析藻对毒物的响应，降低了分析结果的偶然性，能够控制假结果出现率为20％，由其评价藻响应重金属的灵敏度为0.001～0.1mg/L，由其得到的测试结果的平均重现率为86.8～100％、重现性出现率为100％，具有准确性高，重复性好，灵敏度高的特点；2、本专利技术每次每个测试杯连测3个藻温，用其平均值避免了仪器测试藻温的波动性造成的偏差，用空白组、对照组、加药组三个测试组，得到两种藻温差，避免了现有测试技术只能得到一种藻温差，不能进行藻温差比较分析的问题。附图说明图1为实施例1测试杯的布局图。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式，对本专利技术的技术方案做进一步说明。本专利技术所采用的原料和设备若非特指，均可从市场购得或是本领域常用的，实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。实施例1本实施例以重金属为例对藻红外测试的三指标评价方法进行详细说明。1、试验材料藻种：滇池铜绿微囊藻(MicrocystisaeruginosainDianchiLakeinchina)及其培养基配方由中国科学院武汉水生生物研究所提供。该藻具有春化作用，为滇池水华藻种，生长快、饱和密度高，可保证实验所需的藻密度和藻用量。药品：ZnCl2，Pb(NO3)3，CuSO4，FeCl3·6H2O，MnSO4.H2O，CrCl3·6H2O，HgSO4，AlCl3·6H2O，Cd(NO3)3·4H2O。上述药液的配制要求为：取1滴药液(约0.05mL)加入5mL藻液中，使得加入藻液中的重金属浓度等于《生活饮用水卫生标准》GB5749-2006对应毒理指标重金属浓度(见各重金属毒性分析表)。其中，藻液中重金属浓度计算方法为：N＝M÷(1000×D)×(重金属原子量÷药品分子量)×1000ml÷V式中：N—藻液中药品浓度，M—药液浓度，D—移液管滴定1ml药液的滴数，V—测试杯中藻液毫升数。仪器：红外测温仪，型号ST60，灵敏度0.1℃。测试杯：直径4cm、高3cm、厚0.1～0.2cm的透明塑料容器。2、试验方法2.1、藻温测试方法藻温测试在室内条件下进行，采用散射日光或灯光采光。实验的藻液用量为5ml/杯，藻密度≥3.16×109个/L；测试杯加藻液前，藻液充分摇均；当培养时藻增长率≤0时，藻液不再用于实验；滴加药液前，药液充分摇匀。本实施例测试杯布局如图1所示，在每个测试杯中加入5mL藻液，加完后进行加药前测温记录，每次每杯连测3个藻温。然后，滴加药液，蒸馏水毒性测试时，用滴液管分别滴加蒸馏水1滴(约0.05ml)于加药组、对照组的测试杯中，重金属毒性测试时，用滴液管滴加药液1滴与加药组的测试杯中，用滴液管滴加蒸馏水1滴于对照组的测试杯中，立即进行加药后的测温记录，每次每杯连测3个藻温。测温时，红外测温仪头部距离藻液正上方10～15cm，指示红色光点对准藻液面中心时测温。每杯每次连测3个藻温，用于计算平均值。测温顺序：按如图1所示的布局从上到下，从左到右。测温遍数：三个重复测温完时即为测温1遍。药液滴入藻液后到藻本文档来自技高网...

【技术保护点】
化学品毒性藻红外测试的三指标评价方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）藻响应测试选择滇池铜绿微囊藻为供试藻，其藻密度≥3.16×10

【技术特征摘要】
1.化学品毒性藻红外测试的三指标评价方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）藻响应测试选择滇池铜绿微囊藻为供试藻，其藻密度≥3.16×109个/L；藻温测试过程：空白组3重复，对照组3重复，加药组3重复，在每个测试杯中分别加入5mL藻液，加完后测试每个测试杯的藻温；然后进行以下加药测试：①蒸馏水毒性测试时，用滴液管分别滴加蒸馏水0.05mL于加药组和对照组的测试杯中，待藻温稳定时测试每个测试杯的藻温；②待测药品的毒性测试时，用滴液管滴加0.05mL待测药液于加药组的测试杯中，用滴液管滴加蒸馏水0.05mL于对照组的测试杯中，滴加完后测试每个测试杯的藻温；（2）数据分析藻响应温差计算方法为：ΔT＝∣ΔTj∣―∣ΔTd∣，ΔT＞0加药组藻温差计算方法为：ΔTj=(Tj-ti-Tj-t0)-(Tk-ti-Tk-t0)对照组藻温差计算方法为：ΔTd=(Td-ti-Td-t0)-(Tk-ti-Tk-t0)式中：Tj-ti—加药后加药组的藻温；Tj-t0—加药前加药组的藻温；Tk-ti—加药后空白组的藻温；Tk-t0—加药前空白组的藻温；Td-ti—加水后对照组的藻温；Td-t0—加水前对照组的藻温；j—加药组，滴加药液；d—对照组，滴加蒸馏水；k—空白组，不滴加药液或蒸馏水；ti—测温遍数，...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭蔚华，贺栋才，张莉，林艳，李星广，杨鹏飞，罗菲儿，
申请(专利权)人：成都蔚瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51