热休克转录因子1在调控15kDa硒蛋白表达中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种热休克转录因子1在调控15kDa硒蛋白表达中的应用。本发明专利技术所提供的应用具体为热休克转录因子1在如下任一中的应用：(a1)在靶细胞中促进Sep15蛋白的表达；(a2)在靶细胞中促进Sep15基因的转录；(a3)在靶细胞中增强Sep15启动子的活性。本发明专利技术发现了转录因子HSF1能够与Sep15启动子结合，调节Sep15基因转录，促进Sep15蛋白表达。在热激及生理状态发烧的情况下，转录因子HSF1能够启动Sep15转录，提高Sep15表达，从而参与这种生理过程，帮助蛋白正确折叠或帮助蛋白解折叠递送到其他蛋白帮助其正确折叠。在内质网应激下，HSF1也能够促进Sep15表达，从而来参与到内质网蛋白质量控制中，进而促进细胞存活。本发明专利技术对于预防和/或治疗内质网应激相关疾病具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
热休克转录因子1在调控15kDa硒蛋白表达中的应用
本专利技术属于生物
，涉及一种热休克转录因子1的新用途，特别涉及一种热休克转录因子1在调控15kDa硒蛋白表达中的应用。
技术介绍
人类的热休克转录因子1(HSF1)在多个器官组织中均有表达，参与调节热休克反应、诱导热休克蛋白的表达。它具有多种生物学功能，不仅能抗凋亡、保护缺血心肌细胞、抑制心肌纤维化、参与生长发育过程，而且还能对抗炎症反应，在心肌细胞炎症反应、肺部损伤和感染、内毒素血症、全身炎症反应综合征及其他炎症相关性疾病中发挥着举足轻重的作用。Sep15是一种硒蛋白，分子大小为15kDa，在其N端有一个硫氧还蛋白结构域，这个结构域预示着它是一种二硫键还原酶或二硫键异构酶，具有氧化还原功能，与葡糖基糖蛋白(UGGT)结合而定位在内质网腔中，一起参与内质网蛋白质量控制。在很多报道中，错误折叠蛋白的积累引发的疾病有很多，例如阿尔兹海默症、帕金森疾病以及肌肉萎缩性侧面硬化病等，诱发疾病的一个主要原因之一是体内产生严重的内质网应激，那么预示着Sep15在这些疾病中也扮演着重要的角色，诱导Sep15的表达可能可以缓解这些疾病的进展。目前尚未有热休克转录因子1(HSF1)可调控15kDa硒蛋白表达的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种热休克转录因子1的新用途。本专利技术所提供的热休克转录因子1的新用途具体为热休克转录因子1在如下任一中的应用：(a1)在靶细胞中促进Sep15蛋白的表达；(a2)在靶细胞中促进Sep15基因的转录；(a3)在靶细胞中增强Sep15启动子的活性；(a4)制备具有在靶细胞中促进Sep15蛋白表达的功能的产品；(a5)制备具有在靶细胞中促进Sep15基因转录的功能的产品；(a6)制备具有在靶细胞中增强Sep15启动子活性的产品。当然，能够促进热休克转录因子1表达的物质在如上(a1)-(a6)任一中的应用也属于本专利技术的保护范围。本专利技术还提供了一种在靶细胞中促进Sep15蛋白表达和/或促进Sep15基因转录和/或增强Sep15启动子活性的方法。本专利技术所提供的在靶细胞中促进Sep15蛋白表达和/或促进Sep15基因转录和/或增强Sep15启动子活性的方法，具体可包括如下(a)-(c)中的至少一个步骤：(a)提高所述靶细胞中热休克转录因子1的表达量；(b)对所述靶细胞进行热激处理；(c)对所述靶细胞进行衣霉素处理。所述(b)中，对所述靶细胞进行热激处理的条件具体可为42-43℃水浴1-2h，如43℃水浴1h。所述(c)中，对所述靶细胞进行衣霉素处理具体可为将所述靶细胞置于浓度为100ng-5μg/ml(具体如100ng/ml或者5μg/ml)的衣霉素溶液中12-24h。在本专利技术中，所述Sep15蛋白的氨基酸序列的GenBank登录号为NP_004252.2或NP_976086.1(01-DEC-2016版)。相应的，所述Sep15基因为可编码所述Sep15蛋白的基因。进一步，所述Sep15基因的核苷酸序列的GenBank登录号为NM_004261.4或NM_203341.2(01-DEC-2016版)。所述Sep15启动子为如下DNA分子：至少含有序列表中序列1的第1238-1808位核苷酸序列，并且从序列1的第1238位开始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延长，得到长度为571bp至1808bp的任意一个DNA片段；所述DNA分子具有启动子功能。更加具体的，在本专利技术中，所述Sep15启动子为下述a1)-a4)中任一种：a1)核苷酸序列为序列表中序列1的第1238-1808位核苷酸所示的DNA分子；a2)核苷酸序列为序列表中序列1的第626-1265位核苷酸所示DNA分子；a3)核苷酸序列为序列表中序列1的第626-1808位核苷酸所示DNA分子；a4)核苷酸序列为序列表中序列1的第1-1808位核苷酸所示DNA分子。在所述应用或方法中，所述靶细胞为动物细胞。在本专利技术实施例中，所述靶细胞具体为HEK293T细胞或Neuro2a细胞。在本专利技术中，所述应用或方法既可为用于非疾病诊断治疗的应用或方法，也可以为用于疾病诊断治疗的应用或方法。本专利技术发现了转录因子HSF1能够与Sep15启动子结合，调节Sep15基因转录，促进Sep15蛋白表达。在热激及生理状态发烧的情况下，转录因子HSF1能够启动Sep15转录，提高Sep15表达，从而参与这种生理过程，帮助蛋白正确折叠或帮助蛋白解折叠递送到其他蛋白帮助其正确折叠。在内质网应激下，HSF1也能够促进Sep15表达，从而来参与到内质网蛋白质量控制中，进而促进细胞存活。本专利技术对于预防和/或治疗内质网应激相关疾病具有重要意义。其中，所述内质网应激相关疾病，具体如阿尔兹海默症、帕金森疾病以及肌肉萎缩性侧面硬化病等。附图说明图1为HEK293T基因组DNA提取凝胶电泳。图2为各个区段在Sep15启动子上对应的位置示意图。图3为以人基因组DNA为模板PCR扩增人Sep15启动子区的琼脂糖凝胶电泳图。M：分子量标准(DL2000Marker)；1为pGL4-2055/-248PCR片段；2为pGL4-2055/-791PCR片段，3为pGL4-1430/-248PCR片段；4为pGL4-1430/-791PCR片段；5为pGL4-646/-402PCR片段；6为pGL4-2055/-1225PCR片段；7为pGL4-818/-248PCR片段；8为pGL4-818/-166PCR片段；9为pGL4-272/+909PCR片段。图4为Sep15启动子区重组质粒菌液PCR产物琼脂糖凝胶电泳图。M：分子量标准(DL2000Marker)；1-4为pGL4-2055/-248菌液PCR条带；5-12为pGL4-2055/-791菌液PCR条带，13-16为pGL4-1430/-248菌液PCR条带；17-20为pGL4-272/+909菌液PCR条带。图5为Sep15启动子区重组质粒菌液PCR产物琼脂糖凝胶电泳图。M：分子量标准(DL2000Marker)；1-4为pGL4-818/-248菌液PCR条带；5-8为pGL4-818/-166菌液PCR条带，9-11为pGL4-1430/-791菌液PCR条带；12-14为pGL4-646/-402菌液PCR条带。图6为Sep15启动子区重组质粒菌液PCR产物琼脂糖凝胶电泳图。M：分子量标准(DL2000Marker)；1-3为pGL4-2055/-1225菌液PCR条带。图7为Sep15启动子区重组质粒酶切鉴定琼脂糖凝胶电泳图。M：分子量标准(DL2000Marker)；1为pGL4-2055/-248酶切产物；2为pGL4-2055/-791酶切产物，3为pGL4-1430/-248酶切产物；4为pGL4-1430/-791酶切产物；5为pGL4-646/-402酶切产物；6为pGL4-2055/-1225酶切产物；7为pGL4-818/-248酶切产物；8为pGL4-818/-166酶切产物；9为pGL4-272/+909酶切产物。图8为Sep15启动子各片段与pGL4.10[LUC2]的重组子转染HEK293T细胞后荧光素酶活性检测。n＝4，本文档来自技高网...

【技术保护点】
热休克转录因子1在如下任一中的应用：(a1)在靶细胞中促进Sep15蛋白的表达；(a2)在靶细胞中促进Sep15基因的转录；(a3)在靶细胞中增强Sep15启动子的活性；(a4)制备具有在靶细胞中促进Sep15蛋白表达的功能的产品；(a5)制备具有在靶细胞中促进Sep15基因转录的功能的产品；(a6)制备具有在靶细胞中增强Sep15启动子活性的产品。

【技术特征摘要】
1.热休克转录因子1在如下任一中的应用：(a1)在靶细胞中促进Sep15蛋白的表达；(a2)在靶细胞中促进Sep15基因的转录；(a3)在靶细胞中增强Sep15启动子的活性；(a4)制备具有在靶细胞中促进Sep15蛋白表达的功能的产品；(a5)制备具有在靶细胞中促进Sep15基因转录的功能的产品；(a6)制备具有在靶细胞中增强Sep15启动子活性的产品。2.能够促进热休克转录因子1表达的物质在如下任一中的应用：(a1)在靶细胞中促进Sep15蛋白的表达；(a2)在靶细胞中促进Sep15基因的转录；(a3)在靶细胞中增强Sep15启动子的活性；(a4)制备具有在靶细胞中促进Sep15蛋白表达的功能的产品；(a5)制备具有在靶细胞中促进Sep15基因转录的功能的产品；(a6)制备具有在靶细胞中增强Sep15启动子活性的产品。3.一种在靶细胞中促进Sep15蛋白表达和/或促进Sep15基因转录和/或增强Sep15启动子活性的方法，包括如下(a)-(c)中的至少一个步骤：(a)提高所述靶细胞中热休克转录因子1的表达量；(b)对所述靶细胞进行热激处理；(c)对所述靶细胞进行衣霉素处理。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述(b)中，对所述靶细胞进行热激处理的条件是42-43℃水浴1-2h。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述(c)中，对所述靶细胞进行衣...

【专利技术属性】
技术研发人员：田静，黄燕妹，邹琛，刘琼，倪嘉缵，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东,44