百合多糖纯化的乙醇浓度梯度工艺方法技术

本发明专利技术提供一种适用于工业化生产的百合多糖纯化工艺，即乙醇浓度梯度纯化百合多糖新工艺。它在百合多糖浓缩液经醇沉、去蛋白一次后，利用７５％－９５％浓度梯度的乙醇溶液循环洗涤２－５次，制得纯度大于７０％的百合多糖纯品，同时百合多糖得率为百合中百合多糖含量的６８％以上，同时由于减少了氯仿的使用次数和使用量，从而可减少百合多糖中氯仿残留量８０％以上，工艺流程简单高效、经济和环保，适合工业化生产应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种百合多糖提取工艺方法，尤其是一种适用于工业化生产的百 合多糖的纯化工艺。
技术介绍
作为一种中医引用两千多年的中药，百合有着明确、显著的疗效(参见《神 龙本草经》、《别录》和《圣惠方》中的记载)。'百^中药功效特点主要表现在"滋 补与保健"上，即养阴清热、润肺止渴、宁心安神和补中益气之效。在百合有效 成分中百合多糖极具的功能性和经济价值，它的功能性主要包括良好的增强免疫 调节的作用、抗肿瘤性、抗氧化、滋补强壮及抗衰老作用和明显的降血糖功能， 百合多糖在百合中的百分含量处于百合成分含量的前三位。百合多糖提取可为开 发生产百合多糖滋补与保健产品，以及开发多糖新型药物提供原料。现有实验室用的浸提、乙醇沉淀、脱蛋白的百合多糖提取工艺一般得到的是 百合粗多糖，而要得到较纯的百合多糖，目前通常是采用两种工艺方法 一是在 实验室里通过层析柱的方法，该法提取量小，生产效率低，且百合多糖损失量大， 多糖得率不高，难以应用在工业生产中；二是利用正丁醇/氯仿混合液通过3-5个循环(Svage法)进行提纯，但该法氯仿用量大，残留量大，毒性强，污染严 重，成本也高，纯化效率低，对工业化生产不利。经对现有技术文献的检索发现，目前国内外没有与百合多糖提取相关专利文 献报道，在非专利文献中，有百合多糖提取工艺相关文献报道，如层析柱的方法 (刘成梅，付桂明等，百合多糖的纯化与化学结构鉴定研究，食品科学，2002， 23 (5): 114)和Svage法(刘成梅，万茵等，百合多糖脱蛋白方法的研究，食 品科学，2002， 23 (1): 89)，但尚无的 有关报道，也无百合多糖提取产业化方面的报道。
技术实现思路
针对百合多糖纯化工艺技术的上述不足，本专利技术提供一种适用于工业化生产的百合多糖的纯化工艺，即乙醇浓度梯度纯化百合多糖新工艺，它在保证百合多 糖的纯度和得率的同时，减少氯仿的用量，从而降低毒性溶剂的污染，降低生产 成本，提供工业生产的适用性。本专利技术是高效提取高纯度的百合多糖的新型工艺。本专利技术是通过以下技术方案实现的，本专利技术在百合多糖浓縮液经醇沉、去蛋 白一次后，利用75%-95%浓度梯度的乙醇溶液循环洗涤2-5次，制得高纯度的百 合多糖。釆取多次洗涤的目的是变性并去除蛋白酶，氨基酸杂质，同时低浓度的 乙醇可以带走大部分小分子量的寡糖，乙醇浓度梯度纯化重复的次数越多，产物 越纯越高，但多糖损失越大。利用本专利技术乙醇浓度梯度纯化，可以在得到纯度大于70%的百合多糖纯品， 百合多糖得率为百合中百合多糖含量的80%,同时可减少百合多糖中氯仿残留量 65%以上，工艺流程简单高效、经济和利于环保。具体实施例方式以下结合实例详细说明本专利技术。实施例一将新鲜百合球茎，自然晾干后在6(TC左右烘至全干，然后打碎过筛备用。 称取百合粉经85%乙醇于8(TC下回流约10h，过滤。滤渣用用去离子水55。C下浸 提5h，过滤，得百合多糖浸提液粗品。百合多糖浸提液经减压浓縮后以四倍体积的90%的乙醇沉淀，过滤取沉淀加水溶解后采用Svage法去蛋白一次(Svage法为加入等体积氯仿/正丁醇混合液， 混合液中氯仿/正丁醇的体积比5:2,充分振荡)，沉淀后取上清液，得到粗制百 合多糖溶液。采用粗百合多糖饱和溶液加蛋白酶进一步酶解蛋白，然后用四倍体 积乙醇沉淀。取沉淀分别用75%乙醇、85%和95%的纯乙醇洗涤并重复2次(梯度 乙醇溶液洗涤法)，最后一个循环用丙酮，乙醇洗涤，沉淀干燥后得到百合多糖 精提产由此例乙醇浓度梯度纯化2次制备得到的百合多糖纯品，其纯度为75%以上， 百合多糖得率为百合中百合多糖含量的86%，同时减少百合多糖中氯仿残留量约 80%，具有工艺流程简单、经济和环保等工艺优点。实施例二将新鲜百合球茎洗净，沙布袋包装20公斤，投入200升的提取罐，用去离4子水95'C下浸提2h，然后转移提取液至浓縮罐。提取罐中加入去离子水，重复提取2次，转移提取液至浓缩罐。将3次提取液在浓縮罐中9(TC下抽真空浓縮，浓縮至30%出料，得百合多糖浸膏粗品。百合多糖浸膏以四倍体积的95%的乙醇沉淀，过滤取沉淀加水溶解后采用Svage法去蛋白一次(Svage法为加入等体积氯仿/正丁醇混合液，混合液中氯仿/正丁醇的体积比5:2，充分振荡)，沉淀后取上清液，得到粗制百合多糖溶液。采用粗百合多糖饱和溶液加蛋白酶进一步酶解蛋白，并用四倍体积乙醇沉淀。取沉淀分别用85%乙醇和95%以上的纯,乙醇洗涤并重复3次(梯度乙醇溶液洗涤法)，最后一个循环用丙酮，乙醇洗涤，沉淀干燥后得到百合多糖精提产品。由此例乙醇浓度梯度纯化3次制备得到的百合多糖纯品，其纯度为85%以上， 百合多糖得率为百合中百合多糖含量的81%，同时减少百合多糖中氯仿残留量约 90%，具有工艺流程简单、得率适中和环保等工艺优点。实施例三将百合球茎干片15公斤用沙布袋包装，投入200升的提取罐，用去离子水95'C下浸提2h，然后转移提取液至浓縮罐。提取罐中加入去离子水，重复提取3次，转移提取液至浓縮罐。将4次提取液在浓缩罐中9(TC下抽真空浓縮，浓縮至30%出料，得百合多糖浸膏粗品。' '' ，百合多糖浸膏以四倍体积的95%的乙醇沉淀，过滤取沉淀加水溶解后采用Svage法去蛋白一次(Svage法为加入等体积氯仿/正丁醇混合液，混合液中氯仿 /正丁醇的体积比'5:2，充分振荡)，沉淀后取上清液，得到粗制百合多糖溶液。 采用粗百食多糖饱和溶液加蛋白酶进一步酶解蛋白，并用四倍体积乙醇沉淀。取 沉淀分别用80%乙醇和90%以上的纯乙醇洗涤并重复5次(梯度乙醇溶液洗涤法)，最后一个循环用丙酮，乙醇洗涤，沉淀干燥后得到百合多糖精提产品。由此例乙醇浓度梯度纯化2次制备得到的百合多糖纯品，其纯度为95%，百 合多糖得率为百合中百合多糖含量的68%,同时减少百合多糖中氯仿残留量约 96%,具有工艺流程简单和环保等工艺优点，但得率较低。权利要求1. 本专利技术涉及一种百合多糖提取工艺方法，尤其是一种适用于工业化生产的百合多糖的纯化工艺。其特征在于，即在百合多糖浓缩液经醇沉、去蛋白一次后，利用75％-95％浓度梯度的乙醇溶液循环洗涤2-5次，制得纯度大于70％的百合多糖纯品，同时百合多糖得率为百合中百合多糖含量的68％以上，同时由于减少了氯仿的使用次数和使用量，从而可减少百合多糖中氯仿残留量80％以上。2. 如权利要求1所述的，其特征在于所 述的百合多糖浓縮液，可由鲜百合球鳞茎、百合干片为原料的水提浓縮液获 得，以及多次提取液的合并浓缩液，其提取罐可以是工业级的提取罐；3. 如权利要求1所述的，其特征在于所 述的去蛋白为Svage法，即在多糖浓縮醇沉液中加入等体积氯仿/正丁醇混合 液，混合液中氯仿/正丁醇的体积比5:2，充分振荡，反复多次，以去除蛋白 杂质。全文摘要本专利技术提供一种适用于工业化生产的百合多糖纯化工艺，即乙醇浓度梯度纯化百合多糖新工艺。它在百合多糖浓缩液经醇沉、去蛋白一次后，利用75％-95％浓度梯度的乙醇溶液循环洗涤2-5次，制得纯度大于70％的百合多糖纯品，同时百合多糖得率为百合中百合多糖含量的68％以上，同时由于减少了氯仿的使用次数和使用量，从而可减少百合多糖中氯仿残留量80％以上，工艺流程简单高效、经济和环保，本文档来自技高网...

【技术保护点】
本专利技术涉及一种百合多糖提取工艺方法，尤其是一种适用于工业化生产的百合多糖的纯化工艺。其特征在于百合多糖纯化的乙醇浓度梯度工艺方法，即在百合多糖浓缩液经醇沉、去蛋白一次后，利用７５％－９５％浓度梯度的乙醇溶液循环洗涤２－５次，制得纯度大于７０％的百合多糖纯品，同时百合多糖得率为百合中百合多糖含量的６８％以上，同时由于减少了氯仿的使用次数和使用量，从而可减少百合多糖中氯仿残留量８０％以上。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：万锕俊，李慧丽，
申请(专利权)人：上海汉素信生化科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]