一种从制备当归注射液的废弃物中提取当归多糖的方法技术

本发明专利技术涉及一种从制备当归注射液的废弃物中提取当归多糖的方法，其特征在于：将制备当归注射液所得醇沉物，加水溶解，０～１０℃静置后过滤，去沉淀，浓缩至０．１～２．０ｇ／ｍｌ；加入２．０～１０．０倍体积的无水乙醇，０～１０℃静置后过滤，沉淀、加水溶解、离心、除去沉淀，上清液进一步浓缩后，加入２．０～１０．０倍体积的无水乙醇，静置，弃上清，沉淀以无水乙醇洗涤、过滤，至乙醇洗涤沉淀时黄色褪尽；沉淀物干燥，得到当归多糖。本发明专利技术利用制备当归注射液所得废弃物来提取多糖，变“废”为宝，充分利用中药资源，简便、快捷且对环境污染小。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及。多聚糖简称多糖(Polysaccharides)，是由十个以上的单糖基通过甙链连接而成。可以以均多糖或杂多糖形式存在。近年来多糖的生物活性(主要是调节免疫功能)逐渐为人们所认识，多糖类药物被认为是一类新型、高效、低毒类药物，引起国内外医药学界重视。当归的化学成分复杂，主要分为挥发油及水溶性组分两大部分。日本学者Yamade等从东当归根中分离出分子量13500、结构为6位分枝α(1→4)的水溶性葡聚糖，其多糖组分还含有鼠李糖、岩藻糖、甘露糖、木糖等。然而因产地来源及制备方法的不同，导致多糖组分中总糖醛酸、蛋白质、己糖种类和比例不同，生物学活性差异很大。为此，找到一种简便、经济、对环境污染小的方法分离制备当归多糖，且保证其具有稳定的质量标准，对于充分开发传统植物药物当归具有重要指导意义，也将取得良好的经济效益。本专利技术提供的技术方案是一种从当归注射液提取废弃物制备当归多糖的方法，将制备当归注射液所得醇沉物，加水溶解，0～10℃静置后过滤，去沉淀，浓缩至0.1～2.0g/ml；加入2.0～10.0倍体积的无水乙醇，0～10℃静置后过滤，沉淀、加水溶解、离心、除去沉淀，上清液进一步浓缩后，加入2.0～10.0倍体积的无水乙醇，静置，弃上清，沉淀以无水乙醇洗涤、过滤，至乙醇洗涤沉淀时黄色褪尽；沉淀物干燥，得到当归多糖(ASP)。在上述方法中，将制备当归注射液所得醇沉物，加水溶解，静置后过滤，去沉淀，浓缩至0.5～1.0g/ml；加入4.0～8.0倍体积的无水乙醇，0～10℃静置后过滤，沉淀、加水溶解、离心、除去沉淀，上清液进一步浓缩后，加入4.0～8.0倍体积的无水乙醇，静置，弃上清，沉淀以无水乙醇洗涤、过滤，至乙醇洗涤沉淀时黄色褪尽；沉淀物经真空干燥或40～70℃烘干，得到当归多糖。本专利技术利用制备当归注射液所得废弃物来提取多糖，变“废”为宝，充分利用中药资源，简便、快捷且对环境污染小。实施例2从当归注射液提取废弃物制备当归多糖的方法，取制备当归注射液所得醇沉物，称重，加适量水溶解，3℃静置10小时，过滤，除去沉淀，将上清液浓缩至约0.3g/ml后，加入8倍体积的无水乙醇，6℃静置11h，过滤，沉淀加入适量的水溶解，3500rpm离心10min，除去沉淀，上清液进一步浓缩后，加入2倍体积的无水乙醇，4℃静置24h，弃上清，沉淀部分用无水乙醇洗涤、过滤，反复数次，至乙醇洗涤沉淀时黄色褪尽。沉淀物经真空干燥，即得到当归多糖ASP。1.ASP的定性实验及糖含量测定1.1试验方法1.1.1标准曲线的制作精密称取105℃恒重的葡萄糖0.10g于100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，取此溶液10ml置于100ml容量瓶中，定容至刻度，制成标准溶液。精密吸取标准溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml分别试管中，加蒸馏水稀释至2ml，两管平行；另精密吸取蒸馏水2ml作空白对照，置刻度试管中，分别加入水饱和酚溶液0.5ml，浓硫酸5.0ml，剧烈振荡10min，于30℃水浴中保温20min，在岛津UV1601分光光度计490nm处比色。1.1.2 ASP糖含量测定精密称取制得的ASP0.051g，置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，吸取该溶液2、4ml分别置于100ml容量瓶中加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，取上述两种浓度溶液各2ml，两管平行，分别加入水饱和酚溶液0.5ml，浓硫酸5.0ml，剧烈振荡10min，于30℃水浴中保温20min，在岛津UV1601分光光度计490nm处比色。1.2试验结果及分析以不同浓度的葡萄糖溶液与其OD490作回归分析得直线方程Y＝0.1426+5.08x(回归系数r＝0.998)，式中Y表示光密度，x表示葡萄糖的量。将当归多糖溶液加入苯酚和硫酸后由无色变为橙色，表明由当归醇沉物精制而得的物质确属糖类。将测定结果代入回归方程Y＝0.1426+5.08x计算，得出ASP的平均糖含量为65.5％。进一步检验硫酸-苯酚显色反应的稳定性，对标准品(葡萄糖)和ASP在显色后不同时间的OD490值进行测定，结果表明标准品和待测品(ASP)在显色后的0min～90min内OD490无明显变化，至反应后120min时，各管OD490值开始有所下降。说明硫酸--苯酚显色反应在90min以内显色稳定。结果见表1。表1.硫酸—苯酚显色反应OD490值随时间变化表管号 糖含量OD490(显色后)/mg0min 15min 30min 60min 90min 120min空白管 0 00 0 0 0 0标准管1 0.01 0.1960.195 0.198 0.199 0.197 0.1711’ 0.01 0.1970.200 0.199 0.196 0.209 0.176标准管2 0.02 0.2460.248 0.249 0.249 0.247 0.2242’ 0.02 0.2400.236 0.236 0.239 0.238 0.219标准管3 0.03 0.3090.310 0.309 0.309 0.307 0.2933’ 0.03 0.3070.309 0.308 0.309 0.305 0.290标准管4 0.04 0.3710.370 0.368 0.372 0.365 0.3504’ 0.04 0.3720.369 0.371 0.369 0.368 0.349标准管5 0.05 0.3990.401 0.403 0.400 0.398 0.3895’ 0.05 0.3970.400 0.398 0.396 0.394 0.386测定管1 0.02 0.2240.222 0.221 0.223 0.217 0.2061’ 0.02 0.2230.222 0.222 0.221 0.218 0.207测定管2 0.04 0.2920.294 0.292 0.292 0.293 0.2732’ 0.04 0.2940.293 0.292 0.292 0.288 0.275上表中n’为n的平行管，n＝1、2、3、4或5。2.DEAE-纤维素层析柱分离ASP灌制DEAE-纤维素层析柱称取DEAE-纤维素40克，用适量去离子水润湿，缓慢将润湿的DEAE-纤维素灌入直径4.5cm的层析柱中，同时缓慢搅拌以完全除去气泡，保持DEAE-纤维素层析柱顶端呈水平。用200ml 10％的氢氧化钠过柱，再用大量蒸馏水过柱，至从层析柱中流出的蒸馏水的pH值为7.0。至此DEAE-纤维素层析柱灌制完毕。将ASP溶液上样于DEAE-纤维素层析柱，依次以去离子水、酸性洗脱液(冰乙酸∶正丁醇∶蒸馏水＝2∶9∶17，体积比)及碱性洗脱液(10％NaOH，w/v)将ASP洗脱得三种组分ASP-1、ASP-2、ASP-3。ASP的3种分离组分经浓缩后，ASP-3溶液在滴入少量乙醇(约溶液体积的10％)即有大量沉淀，ASP-1溶液和ASP-2溶液中仍需加入终浓度为80％的无水乙醇才能完全沉淀。3种组分6本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从制备当归注射液的废弃物中提取当归多糖的方法，其特征在于：将制备当归注射液所得醇沉物，加水溶解，０～１０℃静置后过滤，去沉淀，浓缩至０．１～２．０ｇ／ｍｌ；加入２．０～１０．０倍体积的无水乙醇，０～１０℃静置后过滤，沉淀、加水溶解、离心、除去沉淀，上清液进一步浓缩后，加入２．０～１０．０倍体积的无水乙醇，静置，弃上清，沉淀以无水乙醇洗涤、过滤，至乙醇洗涤沉淀时黄色褪尽；沉淀物干燥，得到当归多糖。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：彭仁琇，夏雪雁，李颖，王智勇，杨静，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]