由肝素衍生的多糖混合物、其制备方法及其药物组合物技术

本发明专利技术涉及由肝素衍生的多糖混合物，它们的制备方法和含有它们的药物组合物。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及由肝素衍生的多糖混合物，它们的制备方法与含有它们的药物组合物。肝素是动物源硫酸粘多糖混合物，尤其是由于它们的抗凝血和抗血栓形成性质而得到应用。但是，肝素有许多缺陷，这些缺陷限制其应用情况。特别地，其高抗凝血活性(抗IIa活性)可能引起出血。曾提出通过肝素酯的碱性解聚作用所得到的低分子量肝素(EP40144)；但是，这些产物还具有高抗IIa活性。本专利技术涉及由肝素衍生的多糖混合物，它们与肝素相比对活化因子X(因子Xa)和活化因子II(因子IIa)以更具有选择性的方式产生活性。更具体地，本专利技术涉及硫酸多糖混合物，它们具有由肝素构成的多糖的一般结构并且具有下述特性-它们的平均分子量为1500-3000道尔顿，抗Xa活性为100-150IU/毫克，抗IIa活性为0-10IU/毫克，抗Xa活性/抗IIa活性比高于10，-这些混合物的构成多糖含有2-26个糖结构单元，在其一端具有不饱和4，5-葡萄糖醛酸2-O-硫酸酯结构单元，这些多糖混合物呈碱金属或碱土金属盐形式。作为碱金属或碱土金属盐，优选地是钠、钾、钙和镁盐。平均分子量通过使用两个串连柱，例如以商品名TSK G3000 XL和TSK G2000 XL销售的柱，采用高压液相色谱法测定。采用折射计进行检测。使用的洗脱剂是硝酸锂，流量是0.6毫升/分钟。通过采用琼脂糖-聚丙烯酰胺凝胶(IBF)色谱分离依诺肝素(AVENTIS)制备标准物，使用这种标准物对这种系统进行校正。这种制备是根据Barrowcliffe及其同事，《Thromb.Res.》，12，27-36(1977-78)，或D.A.Lane及其同事，《Thromb.Res.》，12，257-271(1977-78)描述的技术进行的。使用软件GPC6(Perkin Elmer)计算结果。使用低分子量肝素的第一个国际标准作为标准，使用Teien及其同事，《Thromb.Res.》，10，399-410(1977)描述的发色底物，采用酰胺分解方法测量抗-Xa活性。使用低分子量肝素的第一个国际标准作为标准，采用AndersonL.O.及其同事，《Thromb.Res.》，15，531-541(1979)描述的技术测量抗IIa活性。优选地，上述混合物的抗Xa活性为125-150IU/毫克。非常特别地，上述混合物的抗Xa活性为140-150IU/毫克。平均分子量为2000-3000道尔顿。优选地，本专利技术混合物的抗IIa活性为0-5IU/毫克。更特别地，这些混合物的抗Xa活性/抗IIa活性比高于25。本专利技术的低聚糖混合物可以采用如下方法制备在有机介质中，借助pka高于20的强有机碱或咪唑酸钠，将肝素苄酯季铵盐解聚，然后将解聚的肝素苄酯季铵盐转化成钠盐，这种酯经过皂化与任选地被纯化。肝素苄酯季铵盐优选地是苄乙氧铵盐、鲸蜡基吡啶鎓盐或鲸蜡基三甲基铵盐。一般地，在例如含氯溶剂(像二氯甲烷)、四氢呋喃、茴香醚之类惰性有机溶剂中，在温度-20℃至40℃下进行解聚作用。作为pka高于20的强有机碱，可以使用1，5，7-三氮杂双环癸-5-烯、2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1，3-二甲基全氢-1，3，2-二氮杂磷杂环己三烯、胍和磷腈类的碱。胍类碱优选地是下式所示碱 式中R1是氢或烷基，R2、R3、R4和R5相同或不同，各自代表烷基。更特别地，R1是氢，R2、R3、R4和R5是甲基。属于磷腈类的强有机碱是例如根据R.Schwesinger及其同事，《Angew.Chem.Int.Ed.Engl.》26，1167-1169(1987)，R.Schwesinger及其同事，《Angew.Chem.》105，1420(1993)定义的。在磷腈类的碱中，优选地使用下式所示碱 式中R1-R7基团相同或不同，代表烷基。在上式中，烷基含有C1-6直链或支链。有利地，pka高于20的强有机碱或咪唑酸钠/肝素苄酯季铵盐的摩尔比是0.2-5，优选地1-4。更特别地，肝素苄酯季铵盐的酯化率是50-100％，优选地70-90％。这种酯化率相应于肝素的糖醛酸酯化摩尔百分数。一般地，在温度15-25℃下，使用醋酸钠醇溶液，优选地使用10％(重量/体积)醋酸钠在甲醇中的溶液处理反应介质，可使解聚的肝素苄酯季铵盐转化成钠盐。添加的醋酸盐的重量当量优选地比参加解聚反应的肝素苄酯季铵盐质量高出3倍。一般地，在温度0-20℃下，优选地在0-10℃下，在含水介质中，借助例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂之类碱金属氢氧化物进行皂化反应。一般地，使用1-5摩尔当量碱金属氢氧化物。优选地，在2-3摩尔当量碱金属氢氧化物存在下进行皂化反应。采用任何已知的解聚肝素纯化方法，特别地根据在专利EP 0 037319中描述的方法，可以任选地纯化最后产物。优选地，在温度10-50℃，在含水介质中，借助过氧化氢进行纯化。优选地，这种操作在20-40℃下进行。肝素苄酯季铵盐可以按照下述反应流程进行制备a)借助氯化苄乙氧铵转化呈钠盐形式的肝素，以便得到肝素苄乙氧铵，b)借助苄基氯酯化前面得到的苄乙氧铵盐，并且用醋酸钠醇溶液处理，以便得到肝素苄酯钠盐，c)肝素苄酯钠盐被转盐(transalification)成季铵盐，优选地苄乙氧铵盐，鲸蜡基吡啶鎓盐或鲸蜡基三甲基铵盐。在温度约15-25℃下，在含水介质中通过让过量氯化苄乙氧铵与呈钠盐形式的肝素作用，进行步骤a)的反应。有利地，氯化苄乙氧铵/呈钠盐形式的肝素的摩尔比是2-3，更特别地2.5。所使用的呈钠盐形式的原料肝素优选地是猪的肝素。这种肝素可以按照专利FR 2 663 639中描述的方法进行预先纯化，以降低其硫酸软骨素B含量。优选地，在温度25-45℃下，优选地在30-40℃下，在含氯有机溶剂(例如氯仿、二氯甲烷)中进行步骤b)的酯化反应。然后，通过使用10％(重量/体积)醋酸钠在例如甲醇之类醇中的溶液沉淀回收呈钠盐形式的酯。一般地，每个反应介质体积使用1-1.2体积醇。调整苄基氯的量和反应时间，以便酯化率达到50-100％，优选地70-90％。优选地，每1重量份肝素苄乙氧铵盐，使用0.5-1.5重量份苄基氯。同样优选地，反应时间是10-35小时。在温度10-25℃下，在含水介质中，借助季铵氯化物，优选地借助氯化苄乙氧铵、氯化鲸蜡基吡啶鎓或氯化鲸蜡基三甲基铵，进行步骤c)的转盐反应。有利地，季铵氯化物/肝素苄酯钠盐的摩尔比是2-3。呈钠盐形式的本专利技术混合物可以转化成其它碱金属或碱土金属盐。采用在专利US 4 168 377中描述的方法，任选地将一种盐转化成另一种盐。本专利技术的混合物无毒，因此可以用作药物。本专利技术的混合物可以用作抗血栓形成剂。特别地，它们对预防静脉血栓形成、动脉形成血栓病症，尤其是在心肌梗塞的情况下是有效的。它们在预防和治疗平滑肌细胞增生、血管生成以及作为动脉粥样硬化和动脉硬化症的神经保护剂也是有效的。本专利技术还涉及药物组合物，这些组合物含有作为活性组分的本专利技术多糖混合物以及任选地与其配合的一种或多种惰性赋性剂。这些药物组合物例如是可皮下或静脉注射的溶液。它们通过肺(吸入)途径也是有效的。根据患者年龄、体重和健康状况改变剂量。对于成人而言，这种剂量一般是每天肌内或皮下用药20-100毫克。下面的实施例说本文档来自技高网...

【技术保护点】
硫酸多糖混合物，它们具有由肝素构成的多糖的一般结构，并且具有下述特性： －它们的平均分子量为１５００－３０００道尔顿，抗Ｘａ活性为１００－１５０ＩＵ／毫克，抗Ⅱａ活性为０－１０ＩＵ／毫克，抗－Ｘａ活性／抗Ⅱ－ａ活性比高于１０， －这些混合物的构成多糖含有２－２６个糖结构单元，在其一端具有不饱和４，５－葡糖醛酸２－Ｏ－硫酸酯结构单元， 这些多糖混合物呈碱金属或碱土金属盐形式。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：J戴兹，C派奎特，E佩林，C韦斯可夫，
申请(专利权)人：阿文蒂斯药物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]