地榆多糖的分离纯化方法技术

本发明专利技术公开一种地榆多糖的分离纯化方法，由下述步骤组成：将地榆粉碎，按１∶４～５的量浸于蒸馏水中，５０～６５℃水浴１５～３０小时；以３０００～５０００ｒｐｍ离心１０～１６ｍｉｎ，取上清液，以活性炭脱色，得地榆多糖水提物溶液；用有机溶剂以常规方式去除地榆多糖水提物溶液中的蛋白；选取内径和高度比为１∶２５～５０的层析柱；凝胶过滤层析，以波长为２８０ｎｍ检测收集液，真空冷冻干燥地榆多糖的提取液，即得地榆多糖。利用本发明专利技术制备的地榆多糖，纯度达９０％以上，且本发明专利技术的方法设备及环境要求低，方法简便，成本低，灵活实用，利于推广、开发和应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种中药有效成分的分离方法，尤其涉及一种从中药地榆中分离纯化地榆多糖的方法。
技术介绍
地榆多糖是中药地榆的有效成分，是从中药地榆分离得到的一种多糖，地榆多糖是α-葡萄糖苷酶的抑制剂，可用于糖尿病的治疗及减肥，对人体副作用小，与临床上使用的α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物——阿卡波糖(Acarbose，商品名拜糖苹，为德国拜耳公司产品)相比活性更强。α葡萄糖苷酶(EC3.2.1.20；a-glucosidase)，是一类能够从含有α糖苷键底物催化水解葡萄糖基的酶的总称。在生理功能上主要从多糖、二糖的非还原端切下葡萄糖，人体对淀粉等食品的最终消化都依赖于小肠黏膜细胞刷状缘上α葡萄糖苷酶的作用。α葡萄糖苷酶抑制剂是七十年代后期研究开发的一类口服降糖药物，其作用机理为竞争性抑制α葡萄糖苷酶，抑制来自双糖、多糖、低聚糖的消化、吸收，有效推迟并减轻糖尿病人餐后血糖升高尤其是并发症的发生，取得较好的治疗效果，至今仍广泛应用。地榆多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用属竞争性抑制，故可根据服用者的需要选择不同剂量，对于目前的减肥大军，尤其青年女性可避免节食的痛苦，若能解决地榆多糖的制备和配方，将会大大方便减肥者的使用，扩大地榆的利用。经检索，关于目前尚无公开报道。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术要解决的问题是提供一种从中药地榆中分离纯化地榆多糖的方法。本专利技术的，由下述步骤组成(1)将地榆粉碎至颗粒直径为200～300μm，与水以体积比计，按1∶4～5的量浸于蒸馏水中，50～65℃水浴15～30小时；(2)以3000～5000rpm离心10～16min，取上清液，以活性炭脱色，得地榆多糖水提物溶液；(3)用有机溶剂以常规方式去除地榆多糖水提物溶液中的蛋白；(4)选取内径和高度比为1∶25～50的层析柱；向柱内加入葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的60％～90％；(5)凝胶过滤层析步骤(4)，洗脱液为蒸馏水，流速为0.3～0.6ml/min，以波长为280nm检测收集液，洗脱液曲线有两个吸收峰，收集第二个峰洗脱液，即为地榆多糖的提取液 (6)以常规方法真空冷冻干燥地榆多糖的提取液，即得浅棕色的粉末——地榆多糖。其中，步骤(1)所述水浴温度优选是60℃，水浴时间优选是20～25小时。其中，步骤(2)所述离心速度优选是4000rpm，离心时间优选是10min。其中，步骤(3)所述有机溶剂优选是乙醇。其中，步骤(4)所述层析柱的内径和高度比优选为1∶30～40。其中，步骤(4)所述向柱内加入的具有分子筛作用的物质量优选为柱体积的70％～80％。其中，上述葡聚糖凝胶选用SephadexG-75～SephadexG-200。其中，上述葡聚糖凝胶优选SephadexG-150。其中，步骤(5)所述流速优选为0.4ml/min。利用本专利技术提出的，可以制备出纯度达90％以上的地榆多糖，根本解决了地榆多糖分离难，纯度低，质量不稳定的不足，且本专利技术的方法设备及环境要求低，方法简便，成本低，灵活实用，利于推广、开发和应用。采用本专利技术的分离纯化方法制备出的地榆多糖，经试验证实，对α葡萄糖苷酶活性有显著的抑制作用，试验结果表明本专利技术方法制备出的地榆多糖对α葡萄糖苷酶活性的抑制率达99.9％，而目前临床上使用的α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物——阿卡波糖(Acarbose，商品名拜糖苹，为德国拜耳公司产品)对α葡萄糖苷酶活性的抑制率仅为81.5％，说明本专利技术的分离纯化方法已比现有方法有明显的提高，具备了商业应用和推广价值。附图说明图1地榆多糖凝胶过滤层析的洗脱曲线图2大白鼠服用地榆多糖后的糖耐曲线具体实施方式实施例1(1)将地榆粉碎至颗粒直径为200～250μm，与水以质量比计，按1∶4的量浸于蒸馏水中，50℃水浴20小时；(2)以4000rpm离心10min，取上清液，以活性炭脱色，得地榆多糖水提物溶液；(3)用有机溶剂以常规方式去除地榆多糖水提物溶液中的蛋白；(4)选取内径和高度比为1∶25的层析柱；向柱内加入SephadexG-100葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的70％；(5)凝胶过滤层析步骤(4)，洗脱液为蒸馏水，流速为0.5ml/min，以波长为280nm检测收集液，洗脱液曲线有两个吸收峰，收集第二个峰洗脱液，即为地榆多糖的提取液；(见图1) (6)以常规方法真空冷冻干燥地榆多糖的提取液，即得浅棕色的粉末——地榆多糖。实施例2(1)将地榆粉碎至颗粒直径为250～300μm，与水以质量比计，按1∶5的量浸于蒸馏水中，60℃水浴30小时；(2)以4000rpm离心16min，取上清液，以活性炭脱色，得地榆多糖水提物溶液；(3)用有机溶剂以常规方式去除地榆多糖水提物溶液中的蛋白；(4)选取内径和高度比为1∶40的层析柱；向柱内加入SephadexG-150葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的80％；(5)凝胶过滤层析步骤(4)洗脱液为蒸馏水，流速为0.4ml/min；以波长为280nm检测收集液，洗脱液曲线有两个吸收峰，收集第二个峰洗脱液，即为地榆多糖的提取液；(见图1)(6)以常规方法真空冷冻干燥地榆多糖的提取液，即得浅棕色的粉末——地榆多糖。实施例3(1)将地榆粉碎至颗粒直径为200～250μm，与水以质量比计，按1∶4的量浸于蒸馏水中，55℃水浴25小时；(2)以3000rpm离心15min，取上清液，以活性炭脱色，得地榆多糖水提物溶液；(3)用有机溶剂以常规方式去除地榆多糖水提物溶液中的蛋白；(4)选取内径和高度比为1∶50的层析柱；向柱内加入SephadexG-200葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的85％；(5)凝胶过滤层析步骤(4)洗脱液为蒸馏水，流速为0.3ml/min，以波长为280nm检测收集液，洗脱液曲线有两个吸收峰，收集第二个峰洗脱液，即为地榆多糖的提取液；(见图1)(6)以常规方法真空冷冻干燥地榆多糖的提取液，即得浅棕色的粉末——地榆多糖。实施例4地榆多糖的活性测定α葡萄糖苷酶活性测定标准反应体系67mmol/L磷酸钾缓冲液(pH6.8)1.7ml，1mg/ml谷胱甘肽50ul，2mg/mla葡萄糖苷酶(Sigma公司产品)10ul，37℃保温10min，加入116mmol/L PNP 300ul，37℃ 10min，加入0.1mol/L碳酸钠10ml终止反应，400nm测释放的硝基酚量。α葡萄糖苷酶活性单位pH6.8，37℃，每分钟释放1umol/L硝基酚为一活性单位；α葡萄糖苷酶抑制剂活性单位pH6.8，37℃，使一酶活性单位失活为一抑制单位；抑制率抑制剂活力÷酶活性单位经试验测定本专利技术方法制备出的地榆多糖对α葡萄糖苷酶活性的抑制率达99.9％。实施例5大白鼠服用地榆多糖后的糖耐试验用本专利技术方法制备出的地榆多糖，以有效量200mg的量/次，对SD大鼠灌胃后，30分钟进食，分别测定餐后30分钟、60分钟、90分钟时大鼠血糖浓度，结果专利技术方法制备出的地榆多糖有明显的抑制双糖、多糖、低聚糖的消化、吸收，有效推迟并减缓餐后血糖升高的作用。见图2。实施例6用本专利技术方法制备出的地榆多糖，以有效治疗量400mg的量/天/大鼠(220g)，对SD大鼠连续灌胃10天，第10天灌胃2小时处死，取小肠黏膜，检测小肠黏膜细胞刷状缘上α葡萄糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种地榆多糖的分离纯化方法，由下述步骤组成：（１）将地榆粉碎至颗粒直径为２００～３００μｍ，与水以质量比计，按１∶４～５的量浸于蒸馏水中，５０～６５℃水浴１５～３０小时；（２）以３０００～５０００ｒｐｍ离心１０～１６ｍｉｎ，取上清液，以活性炭脱色，得地榆多糖水提物溶液；（３）用有机溶剂以常规方式去除地榆多糖水提物溶液中的蛋白；（４）选取内径和高度比为１∶２５～５０的层析柱；向柱内加入葡聚糖凝胶，加入量为柱体积的６０％～９０％；（５）凝胶过滤层析步骤（４），洗脱液为蒸馏水，流速为０．３～０．６ｍｌ／ｍｉｎ，以波长为２８０ｎｍ检测收集液，洗脱液曲线有两个吸收峰，收集第二个峰洗脱液，即为地榆多糖的提取液；（６）以常规方法真空冷冻干燥地榆多糖的提取液，即得浅棕色的粉末－地榆多糖。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张莲英，张建业，胡晓燕，赵元，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]