基于“一测多评”法的花椒麻味物质含量检测制造技术

本发明专利技术公开了基于“一测多评”法的花椒麻味物质含量检测，包括以下步骤：(1)羟基‑β‑山椒素标准曲线的建立：(2)待测样品中羟基‑β‑山椒素的含量测定：(3)使用相对校正因子计算待测样品中羟基‑α‑山椒素和羟基‑γ‑山椒素含量。本发明专利技术的“一测多评”法与外标法相互验证，无明显差异，结果可靠。本发明专利技术方法克服了在缺乏羟基‑α‑山椒素及羟基‑γ‑山椒素对照品的情况下通过相对校正因子f及色谱峰定位计算其含量，实现花椒中主要麻味物质羟基‑α‑山椒素成分及羟基‑γ‑山椒素质量控制，为花椒的质量控制提供了新的方法。

Determination of odor compounds in Zanthoxylum bungeanum Maxim based on \one test and multiple assessments\

The present invention discloses based on the QAMs method of numb taste components were detected, which comprises the following steps: (1) the establishment of beta hydroxy sanshool standard curve: (2) to measure the determination of hydroxy beta sanshool samples: (3) using the relative correction factor calculate the sample alpha hydroxy sanshool and hydroxyl gamma sanshool content test. The \one test multiple evaluation\ method and the external standard method of the invention verify each other, and have no obvious difference, and the results are reliable. The method of the invention overcomes the content was calculated according to the relative correction factor F and the peak location in the absence of alpha hydroxy sanshool and hydroxy gamma sanshool control products, realize the pepper mainly numb taste components hydroxy alpha sanshool hydroxyl component and gamma mountain pepper quality quantity control, which provides a new method for the quality control of Chinese prickly ash.

【技术实现步骤摘要】
基于“一测多评”法的花椒麻味物质含量检测
本专利技术涉及基于“一测多评”法的花椒麻味物质含量检测。
技术介绍
花椒的麻味物质主要集中在花椒果皮的油腺细胞，研究表明，花椒中的不饱和脂肪酸酰胺类成分为花椒中的麻味物质。目前，已有学者从花椒中鉴定出了25种麻味物质，包括α-山椒素，β-山椒素，γ-山椒素，羟基-α-山椒素，羟基-β-山椒素，羟基-γ-山椒素等。其中，羟基-α-山椒素，羟基-β-山椒素，羟基-γ-山椒素是花椒中最主要的麻味物质。花椒的麻味是花椒品质评价的主要的表现形式之一，目前仍没有市售的花椒麻味物质对照品，并且现行的花椒国家标准和地方标准没有对花椒的麻味进行客观定量评价。因此，有必要对花椒中麻味成分进行分离，通过同时测定多个麻味物质指标性成分，实现对花椒中的麻味物质含量检测。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供基于“一测多评”法的花椒麻味物质含量检测，包括以下步骤：(1)羟基-β-山椒素标准曲线的建立：a、对照品溶液的制备：取羟基-β-山椒素对照品，加甲醇配制成对照品溶液；b、对照品溶液的测定：配制系列浓度的对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，得到羟基-β-山椒素的标准曲线；色谱条件如下：检测波长：270±5nm；色谱柱：C18色谱柱；流动相：乙腈：水＝40％：60％；(2)待测样品中羟基-β-山椒素的含量测定：c、供试品溶液的制备：取待测样品，加甲醇提取，过滤得供试品溶液；d、供试品溶液的测定：取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，以步骤b相同的色谱条件检测，根据步骤(1)的标准曲线得到待测样品中羟基-β-山椒素的含量；(3)使用相对校正因子计算待测样品中羟基-α-山椒素和羟基-γ-山椒素含量。进一步地，所述C18色谱柱为PhenomenexC18色谱柱、WatersBridgeC18或AgilentEclipsePlusC18色谱柱。进一步地，所述色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm。进一步地，所述高效液相色谱仪为Agilent1260、岛津LC-2010A或Waterse2695。进一步地，步骤c中，所述提取是超声提取。进一步地，所述超声提取的时间为30分钟。进一步地，步骤c中，所述甲醇与待测样品的体积质量比为100mL：1g。进一步地，所述色谱条件的柱温为20～30℃，优选30℃。进一步地，所述色谱条件的流速为0.6～1.0mL·min-1，优选1.0mL·min-1。进一步地，所述步骤(3)的相对校正因子是通过下述步骤得到的：取羟基-α-山椒素、羟基-γ-山椒素和羟基-β-山椒素对照品，加甲醇配制成混合对照品溶液；取混合对照品溶液，注入高效液相色谱仪，以步骤b相同的色谱条件检测，得到羟基-α-山椒素、羟基-γ-山椒素和羟基-β-山椒素的标准曲线；以羟基-β-山椒素为内参物，根据相对响应因子f计算公式：计算羟基-α-山椒素、羟基-γ-山椒素与羟基-β-山椒素之间的相对应因子，取其均值；其中，相对响应因子f计算公式如下：式中A为色谱峰面积、W为成分的质量浓度，下标n代表待测成分，下标s代表内参物。本专利技术还提供了本专利技术的含量检测用于检测花椒、花椒油、藤椒、藤椒油及其产品中麻味物质的含量检测。经试验证明，本专利技术色谱条件可以有效将羟基-α-山椒素，羟基-β-山椒素，羟基-γ-山椒素分离，从而准确测定它们的含量。并且，本专利技术的“一测多评”法与外标法相互验证，无明显差异，结果可靠。另外，专利技术人分离制备得到的羟基-β-山椒素对照品已被中检所授权，可以作为花椒的对照品使用。从而本专利技术方法可以克服在缺乏羟基-α-山椒素及羟基-γ-山椒素对照品的情况下通过相对校正因子f及色谱峰定位计算其含量，实现花椒中主要麻味物质羟基-α-山椒素成分及羟基-γ-山椒素质量控制，为花椒的质量控制提供了新的方法。因此，本专利技术的方法可以用于花椒、藤椒及其产品的检测。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为混合对照品溶液HPLC色谱图(1—羟基-α-山椒素；2—羟基-β-山椒素；3—羟基-γ-山椒素)图2为供试品溶液HPLC色谱图(1—羟基-α-山椒素；2—羟基-β-山椒素；3—羟基-γ-山椒素)具体实施方式实施例11仪器Agilent1260高效液相色谱仪，G1311C四元泵，G1329B自动进样器，G1316A柱温箱，G1362A二极管阵列检测器(美国Agilent公司)；Waterse2695高效液相色谱仪，四元泵，2998PDA检测器；Shimadzu岛津LC-2010A，SIL-20A自动进样器，SPD-20A检测器，CTO-20A柱温箱，LCsolution色谱工作站软件(日本岛津公司)；BP211D电子分析天平(德国Sartouris股份有限公司)。2材料和试剂花椒：四川汉源花椒局提供。花椒麻味物质对照品：羟基-α-山椒素(自制，纯度98.35％)；羟基-β-山椒素(自制，已申请成国家对照品，纯度98.27％)；羟基-γ-山椒素(自制，纯度98.54％)。甲醇：色谱级，美国sigma公司。乙腈：色谱级，美国sigma公司。3HPLC色谱条件色谱柱PhenomenexC18柱(250mm×4.6mm，4μm)；以乙腈(A)：水(B)＝40％：60％为流动相，等度洗脱45min，柱流量1.0min/mL，检测波长270nm，柱温30℃，进样量10μL。4一测多评法的建立4.1相对校正因子的确定4.1.1混合对照品溶液的制备分别精密称定羟基-α-山椒素，羟基-β-山椒素，羟基-γ-山椒素对照品适量置于100mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，配成质量浓度分别为1.70mg/mL，0.475mg/mL，0.189mg/mL的对照品溶液，作为对照品储备溶液。精密吸取上述对照品储备液各1mL，置10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，配成对照品中间液。然后，分别精密移取上述对照品中间液各2mL，置10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，配成混合对照品溶液。将上述混合对照品溶液保存于4℃冰箱中备用，备用。4.1.2供试品溶液制备精密称取花椒粉(过四号筛)约0.5g精确至(0.0001g)，置具塞锥形瓶中，加入50mL甲醇，超声振荡30min过滤后即得。分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，结果见图1、图2。4.1.3线性、定量限与检测限分别精密吸取4.1.1项下混合对照品溶液2、5、10、15、20、25、30μL进样分析，以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，绘制标准曲线；以最低浓度的对照品溶液逐级稀释，分别以信噪比为3和10的浓度作为检测限和定量限，见表1。表1线性关系及定量限、检测限4.1.4相对校正因子的计算在“2”项下确定的HPLC色谱分析条件下，精密吸取“4.1.1”项下的混合对照品溶液，分别进样2、5、10、15、20、25、30μL。以羟基-β-山椒素本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于“一测多评”法的花椒麻味物质含量检测，其特征在于：包括以下步骤：(1)羟基‑β‑山椒素标准曲线的建立：a、对照品溶液的制备：取羟基‑β‑山椒素对照品，加甲醇配制成对照品溶液；b、对照品溶液的测定：配制系列浓度的对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，得到羟基‑β‑山椒素的标准曲线；色谱条件如下：检测波长：270±5nm；色谱柱：C

【技术特征摘要】
2017.01.11 CN 20171001792081.基于“一测多评”法的花椒麻味物质含量检测，其特征在于：包括以下步骤：(1)羟基-β-山椒素标准曲线的建立：a、对照品溶液的制备：取羟基-β-山椒素对照品，加甲醇配制成对照品溶液；b、对照品溶液的测定：配制系列浓度的对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，得到羟基-β-山椒素的标准曲线；色谱条件如下：检测波长：270±5nm；色谱柱：C18色谱柱；流动相：乙腈：水＝40％：60％；(2)待测样品中羟基-β-山椒素的含量测定：c、供试品溶液的制备：取待测样品，加甲醇提取，过滤得供试品溶液；d、供试品溶液的测定：取供试品溶液，注入高效液相色谱仪，以步骤b相同的色谱条件检测，根据步骤(1)的标准曲线得到待测样品中羟基-β-山椒素的含量；(3)使用相对校正因子计算待测样品中羟基-α-山椒素和羟基-γ-山椒素含量。2.根据权利要求1所述的含量检测，其特征在于：所述C18色谱柱为PhenomenexC18色谱柱、WatersBridgeC18或AgilentEclipsePlusC18色谱柱。3.根据权利要求2所述的含量检测，其特征在于：所述色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm。4.根据权利要求1-3任一项所述的含量检测，其特征在于：所述高效液相色谱仪为Agilent1260、岛津LC-2010A或Waterse2695...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴纯洁，陶兴宝，彭伟，袁星，
申请(专利权)人：成都中医药大学，
类型：发明
国别省市：四川,51