一种金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法及其用途技术

本发明专利技术涉及一种金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法及其用途，方法基于肾上腺素、乙二胺四乙酸二钠盐与稀土元素铽在碱性溶液中形成稳定的三元络合物，该三元络合物能发射出Tb(III)的特征荧光。在此三元络合物中加入十六烷基三甲基氯化铵作为增敏剂，能显著增强三元络合物的荧光强度。肾上腺素浓度在7.0×10

Method for detecting epinephrine by metal terbium fluorescent probe and use thereof

The invention relates to a method for metal terbium fluorescence probe for the detection of adrenaline and its use method, epinephrine, two sodium ethylenediaminetetraacetic acid and rare earth element terbium based on the alkaline solution to form a stable complex of three yuan, three yuan of the complexes can emit Tb (III) fluorescence characteristics. The addition of sixteen alkyl three methyl ammonium chloride as sensitizer in the three element complex can significantly increase the fluorescence intensity of the three element complex. Epinephrine concentration was 7 * 10

【技术实现步骤摘要】
一种金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法及其用途
本专利技术涉及药物分析和生物分析
，具体涉及一种金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法及其用途。
技术介绍
肾上腺素(E)是哺乳动物(含人类)中枢神经系统重要的神经传递物质，属于自然产生的儿茶酚胺类物质之一，它在机体内的浓度大小影响多种生理过程，其代谢的紊乱可导致某些疾病的发生。肾上腺素盐酸盐药物在医学上常用来治疗急性心力衰竭、过敏性休克、哮喘、鼻充血、低血压等疾病。肾上腺素是第一个获得结晶形式的激素。由于肾上腺素具有邻苯二酚结构，所以有较强的还原性，在空气或水溶液中易被氧化，稳定性差。在人体内，肾上腺素经由下列一系列生化反应过程形成：酪氨酸→多巴→多巴胺→去甲肾上腺素→肾上腺素(Mohammad,M.K.,M.A.Seikh.andH.L.Sang.SpectrofluorimetricEstimationofNorepinephrineUsingEthylenediamineCondensationMethod.J.fluoresce.2007,17(3):427–436.)。因此，研究其测定方法尤其是微量肾上腺素的测定方法对生理机能和临床医学研究具有重要的实际意义。目前测定肾上腺素的方法主要有高效液相色谱法，电化学法，荧光法和化学发光法等。高效液相色谱法对样品前处理要求较高，检测速度较慢，技术难度高，对实际生物样品的检测有一定的局限性。电化学分析法目前报道较多的是化学修饰电极法，该方法测定生物样品，稳定性较差且修饰电极的电极使用寿命较短，方法有待进一步完善。荧光法具有操作简便、灵敏度高、低成本等特点，在肾上腺素等药物的测定中具有独特的优越性。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服高效液相色谱法对样品前处理要求较高，检测速度较慢，技术难度高等缺点，提供一种金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法及其用途，本专利技术中，Tb(III)与乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)形成络合物，加入肾上腺素作为协同配体，可形成稳定的三元络合物Tb(III)―EDTA―E，该三元络合物能发射出Tb(III)的特征荧光。在此三元络合物体系中加入阴离子表面活性剂十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)作为增敏剂，能显著增加三元络合物的荧光强度，在302nm激发波长下，三元络合物在545nm处发射出铽的特征荧光；与不加增敏剂的体系相比，加入增敏剂后三元络合物的荧光强度增大了4倍多。据此建立了肾上腺素的检测方法，该方法灵敏度高，操作简单，检出限低。根据本专利技术的第一个方面，本专利技术提供了一种金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法，包括以下步骤：1)在10mL的比色管中，依次分别加入肾上腺素水溶液、Tb(III)-EDTA水溶液、NaOH水溶液和十六烷基三甲基氯化铵水溶液，用水稀释到刻度，摇匀，静置20min使其充分反应得供试品溶液；2)反应完毕后取供试品溶液，置于1cm比色皿，在激发波长302nm，发射波长545nm处测定体系的荧光强度I值，同时测定试剂空白的荧光强度I0值；供试品溶液中肾上腺素测量的相对荧光强度定义为△I，其中△I＝I–I0；所述试剂空白I0值的测定除不加肾上腺素外，其余步骤同步骤1)；所述Tb(III)-EDTA水溶液由等摩尔的Na2EDTA或其水合物与TbCl3或其水合物在无机碱的水溶液中制备而成。所述供试品溶液中Tb(III)-EDTA浓度为1.0×10-3mol/L，NaOH浓度为0.01mol/L。所述供试品溶液中十六烷基三甲基氯化铵浓度为2.0×10-4mol/L。本专利技术肾上腺素浓度在7.0×10-8～5.0×10-5mol/L范围内，体系的相对荧光强度△I(△I＝I–I0)与肾上腺素的浓度成正比。线性回归方程为△I＝16.78×10-4C+7.36，式中C为肾上腺素浓度(mol/L)，根据线性回归方程可计算出任意荧光强度所对应的肾上腺素的浓度。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法的可用于检测肾上腺素含量。含量的具体检测方法包括以下步骤：1)绘制标准工作曲线取若干支10mL比色管，按照上述的金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法制备不同浓度的系列肾上腺素标准溶液，测定体系的相对荧光强度△I，以不同的肾上腺素浓度与对应的相对荧光强度△I作图，绘制标准工作曲线得线性回归方程；所述肾上腺素标准溶液浓度为7.0×10-8～5.0×10-5mol/L；2)测定样品中肾上腺素浓度向比色管中加入肾上腺素样品溶液，测定其相对荧光强度，根据标准工作曲线确定样品中肾上腺素的含量；或者根据线性回归方程计算样品中肾上腺素的含量。所述检测方法可以排除常见金属离子和药物赋形剂的干扰，检出限可达到2.1×10-8mol/L；所述常见金属离子和药物赋形剂包括Na+(500),K+(500),Cl-(500),NO3-(500),Ca2+(100),SO32-(100),Mg2+(50),SO42-(50),Zn2+(25),Mn2+(25),PO43-(25),Fe3+(5),焦亚硫酸钠(100)，对苯二酚(100)，胱氨酸(100)，普鲁卡因(50)，淀粉(50)，葡萄糖(25)，果糖(5)，括号中的数据为干扰离子浓度和肾上腺素浓度之比(CE＝5.0×10-6mol/L)；在干扰物质存在下，与不加干扰物质相比，以体系荧光强度变化不超过±5％为标准确定是否有干扰。本专利技术的有益效果是：(1)本方法不需要合成新材料，通过增敏剂对铽三元络合物的增敏作用，实现对肾上腺素的高灵敏荧光检测。(2)对肾上腺素浓度的检测范围广，当肾上腺素浓度在7.0×10-8-5.0×10-5mol/L范围时，络合物的相对荧光强度△I与肾上腺素的浓度成正比。(3)提高了测定对象的稳定性，方便测定操作。由于形成的三元络合物具有较高的稳定性，可有效防止肾上腺素被空气中的氧氧化，形成的三元络合物溶液其荧光强度能稳定6小时以上，比其它方法测定肾上腺素时溶液的稳定性有很大提高。(4)可实现简便、快速和灵敏的检测，检出限低。(5)本方法可以为高效液相色谱和毛细管电泳等方法提供一种快速、有效的检测方法。本专利技术中Tb(III)―EDTA是指Na2EDTA与TbCl3形成的二元络合物；本专利技术中Tb(III)―EDTA―E是指Na2EDTA与TbCl3和肾上腺素形成的三元络合物；本专利技术中Tb(III)―EDTA―E―CTAC是指Tb(III)―EDTA―E在增敏剂十六烷基三甲基氯化铵(Hexadecyltrimethylammoniumchloride，简写为CTAC)存在下形成的络合体系。附图说明图1为肾上腺素、EDTA和铽离子形成三元络合物的结构式。图2为荧光激发光谱。图中曲线(1)为Tb(III)―EDTA二元络合物、曲线(2)为Tb(III)―EDTA―E三元络合物、曲线(3)为Tb(III)―EDTA―E―CTAC三元络合物在增敏剂中的荧光激发光谱。图3为荧光发射光谱。图中曲线(1)为Tb(III)―EDTA二元络合物的荧光光谱；曲线(2)为Tb(III)―EDTA―E三元络合物的荧光光谱；曲线(3)为Tb(III)―EDTA―E―CTAC三元络合物在增敏剂中的荧光光谱。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)在10mL的比色管中，依次分别加入肾上腺素水溶液、Tb(III)‑EDTA水溶液、NaOH水溶液和十六烷基三甲基氯化铵水溶液，用水稀释到刻度，摇匀，静置20min使其充分反应得供试品溶液；2)反应完毕后取供试品溶液，置于1cm比色皿，在激发波长302nm，发射波长545nm处测定体系的荧光强度I值，同时测定试剂空白的荧光强度I

【技术特征摘要】
1.一种金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)在10mL的比色管中，依次分别加入肾上腺素水溶液、Tb(III)-EDTA水溶液、NaOH水溶液和十六烷基三甲基氯化铵水溶液，用水稀释到刻度，摇匀，静置20min使其充分反应得供试品溶液；2)反应完毕后取供试品溶液，置于1cm比色皿，在激发波长302nm，发射波长545nm处测定体系的荧光强度I值，同时测定试剂空白的荧光强度I0值；供试品溶液中肾上腺素测量的相对荧光强度定义为△I，其中△I＝I–I0；所述试剂空白I0值的测定除不加肾上腺素外，其余步骤同步骤1)；所述Tb(III)-EDTA水溶液由等摩尔的Na2EDTA或其水合物与TbCl3或其水合物在无机碱的水溶液中制备而成。2.根据权利要求1所述金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法，其特征在于：所述供试品溶液中Tb(III)-EDTA浓度为1.0×10-3mol/L，NaOH浓度为0.01mol/L。3.根据权利要求1所述金属铽荧光探针检测肾上腺...

【专利技术属性】
技术研发人员：连宁，李蕾，刘丹，王欣，张国华，
申请(专利权)人：江苏理工学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32