本发明专利技术的目的是提供一种取材方便、简单、经济的高稳定性抗幽门螺杆菌重组ＶａｃＡ特异性卵黄抗体。该抗体中加入了体积百分比浓度是３０～５０％的硫糖铝做为保护剂，提高了特异性卵黄抗体对酸和胃蛋白酶的稳定性，增强了抗冻融的能力，在室温下能保持卵黄抗体的活性；还可发挥硫糖铝本身对胃粘膜的保护作用；并可用于其它特异性卵黄抗体。在制备上取材方便、简单、经济，将两种液体按所述比例简单进行混合即可直接服用，可用于治疗幽门螺杆菌感染。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体，特别涉及一种 加入了保护剂的高稳定性的抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体及其 应用。
技术介绍
幽门螺杆菌(7^7icoA3cte/，pj^ar力Hp)是世界上感染率较高的细菌 之一，儿童易感，出现症状就诊时才发现,与慢性胃炎，消化性溃疡，胃腺癌 和粘膜相关性淋巴样组织淋巴瘤密切相关，世界卫生组织已将其列为第一 类致癌因子，对Hp感染的防治已引起国内外学者的高度关注。临床上现多 用抗生素治疗Hp感染，但存在患者依从性差，耐药菌株产生和反复感染等 问题，寻找新的防治Hp感染的有效措施来替代抗生素疗法具有重要的临床 意义。近年来国内外许多研究已经证实口服卵黄抗体IgY (Immunoglobulin yolk，IgY)可通过被动免疫有效防治消化道感染性疾病。细胞空泡毒素抗 原(Vacuolization cytotoxin antigen A， VacA)是Hp弓l起细胞病变的 主要毒力因素，现有技术已能克隆表达Hp的多种毒力因子，如黏附因子、 尿素酶、细胞空泡毒素抗原、毒素相关蛋白、中性粒细胞激活蛋白等重组 蛋白，制备相应的特异抗体IgY，并通过体内外实验证实了口服特异性IgY 防治Hp感染的作用。但是，口服IgY的应用受到胃肠道内酸和蛋白酶的影响，尤其是胃内 高酸和蛋白酶的的生态环境，使工gY的应用受到很大的限制。胃内生态环 境最主要的特点是酸性.，胃壁细胞，贲门、幽门腺体的分泌液构成胃液， 含有盐酸和胃蛋白酶等。Kycmg、毛小琴等的研究显示当pH〈3时，不加保 护剂的IgY液活性显著降低，剩余活性低于50%。当pH二2时，维持4h， IgY几乎完全失活。由昭红等的研究显示在pH 2.5条件下，IgY对胃蛋白 酶非常敏感，活性下降显著。李春晖等的小鼠体内中和试验亦表明胃蛋白 酶可影响IgY的中和活性。因此，许多学者对IgY抗酸性和蛋白酶的保护 剂进行了探讨。Shimizu M等通过脱水水化法用脂质体包裹卵黄抗体、Kyong AL等的 实验表明高浓度山梨醇；(30%以上)在pH3. 0条件下可显著提高IgY的稳 定性。由昭红等的研究表明10%， 30%, 50%的蔗糖和30%乳糖均可在胃蛋白酶 处理时提高特异性IgY的稳定性。Xiao YL等用pH3. 0 6. 0壳聚糖-藻酸 盐微胶囊包裹口服IgY，将其置于pH1.2的模拟胃液中，工gY释放活性维持 于61.36% 74.61%。但这些方法在制作上都较为复杂，且成本较高。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种取材方便、简单、经济的高稳定性抗幽门螺杆 菌重组VacA特异性卵黄抗体。 采用的技术方案如下一种高稳定性的抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体，其特征是在pH值7.0 7.2的抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体中加入了 硫糖铝，且硫糖铝的体积百分比浓度为30% 50%。该产品制备极为简单，仅将两种液态物质按所述的体积百分比浓度进 行简单的混合即可直接口服。其中抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗 体应保持pH值7.0 7.2，如果使用纯化的抗幽门螺杆菌重组VacA特异性 卵黄抗体则应该用pH7. 0的磷酸二氢钠缓冲溶液将其稀释至限定的PH值。硫糖铝作为保护剂加入到抗幽门螺杆菌重组VacA特异性卵黄抗体中。它是含8个硫酸根的蔗糖硫酸酯铝盐，分子量为2086.74，非结晶形式，弱碱性。化学结构式为d2H3oAl8(US8xAl(OH)3yH20，其硫酸蔗糖部分在碱性的氢氧化铝部分的分子之间交联，形成立体结构的桥形复合物，有显著的黏附性，带负电荷，可与许多带正电荷的化学基团、大分子物质如黏液、糖脂蛋白以及其他蛋白、肽、药物、金属等结合；也可与胃十二指肠黏膜表面的黏液结合形成复合的胶状物，起到黏膜保护作用。硫糖铝遇酸解离之后氢氧化铝凝胶发挥抗酸作用，不仅可缓解强酸环境亦可因此而消除胃蛋白酶的最适酸性环境，并且硫糖铝本身可与胃蛋白酶络合，直接、持续地抑制胃蛋白酶的蛋白分解活性。用硫糖铝作为IgY的保护剂不仅可削弱胃酸、胃蛋白酶对IgY活性的破坏，还可发挥硫糖铝本身对胃粘膜的保护作用。除VacA特异性卵黄抗体外，对其它特异性卵黄抗体也应有同样的保护作用，至今国内外未见用硫糖铝作为口服特异性IgY保护剂的报道。本专利技术的有益效果是制备过程简单、取材方便、经济，并且产品对酸 和胃蛋白酶具有较高的稳定性，还可增强其抗冻融的能力，在室温下能保持稳定性，优于上述学者报道的保护剂。高稳定性的抗幽门螺杆菌重组VacA 特异性卵黄抗体可用于治疗幽门螺杆菌感染，使IgY在胃内发挥更加有效 的防治幽门螺杆菌作用。为了进一步证实本专利技术所加硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组VacA特异性 卵黄抗体的保护作用，做了以下实验(1)酸性条件下的保护作用健康成人胃内24小时pH值的动态检测得出其变化规律，pH基线为 1. 63 士 0.34，随进食而升高，从进餐开始到下降至基线水平为胃内食物的 排空过程。模拟胃内酸性环境，以pH 1.0、 1.2、 1.5、 2.0、 3.0为观 察点，在不同酸性的抗幽门螺杆菌重组VacA IgY液中加入不同体积百分比 浓度的硫糖铝，37'C维持2h，以不加入硫糖铝的VacA IgY做对照，测定 不同酸性条件下抗体的剩余活性，结果显示pH 1.5、 pH 2.0、 pH 3.0酸 性条件下，加入硫糖铝的VacA IgY抗体的剩余活性明显高于不加硫糖铝组， 并随硫糖铝浓度增加保护作用增强。在pH1.5条件下，未加硫糖铝的IgY 抗体活性仅能保持31.8%， 50%硫糖铝可使IgY抗体剩余活性提高到50 %。在pH 2. 0条件下，未加硫糖铝的IgY抗体剩余活性为36. 1%， 30Q% 硫糖铝可使IgY抗体剩余活性提高至86. 3% ， 50%的硫糖铝可完全保持IgY 抗体活性。在pH 3. 0条件下，未加硫糖铝的IgY抗体活性能保持65. 2%， 30%硫糖铝即可使IgY抗体活性保持84. 3%，而40%以上的硫糖铝几乎可 完全保持IgY的抗体活性。上述结果表明硫糖铝对IgY活性起到明显的保 护作用，提高了 IgY对酸的稳定性。(2) 对胃蛋白酶裂解的保护作用 模拟胃内正常或高胃蛋白酶浓度，在不同酸性条件下，加入正常胃内浓度和高于正常胃内浓度的胃蛋白酶，再加入不同浓度的硫糖铝，37'C维 持4h后测定IgY的抗体剩余活性。当pH值为1.5 3.0，正常胃蛋白酶浓 度下，30%以上硫糖铝可有效保护IgY免受胃蛋白酶的破坏，且随硫糖铝 浓度增加保护作用逐渐增强。当pH 2. 0时，在正常胃蛋白酶浓度下，含30%、 50%硫糖铝的IgY抗体剩余活性分别为62.8%， 72.2%，而不加硫糖铝的 IgY抗体活性为11.6%;在高胃蛋白酶浓度下，含50%硫糖铝的IgY抗体 剩余活性为52. 6%，而不加硫糖铝的IgY抗体活性为23. 0%;当pH 3. 0 时，在正常胃蛋白酶浓度下，30%硫糖铝可维持IgY活性81. 7%达8h。(3) 对反复冻融的保护作用将抗幽门螺杆菌lj:组VacA IgY分别加入不同浓度的硫糖铝，反复冻 融7次；以同法处理的不加硫糖铝的IgY液为对照。实验结果表明反复 冻融后，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种高稳定性的抗幽门螺杆菌重组ＶａｃＡ特异性卵黄抗体，其特征是在ｐＨ值７．０～７．２的抗幽门螺杆菌重组ＶａｃＡ特异性卵黄抗体中加入了硫糖铝，且硫糖铝的体积百分比浓度为３０％～５０％。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨致邦，郭丽媛，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：85[中国|重庆]
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