具有表皮生长因子受体和/或血管内皮生长因子结合特异性的配体及其使用方法技术

公开了具有血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）结合特异性的配体、具有表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）结合特异性的配体或同时具有ＶＥＧＦ和ＥＧＦＲ结合特异性的配体。也公开了使用这些配体的方法。具体地讲，描述了这些配体在癌症治疗中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有VEGF(例如人VEGF)结合特异性的配体，具有EGFR(例如人EGFR)结合特异性的配体以及具有VEGF和EGFR(例如人VEGF和人EGFR)结合特异性的配体。例如，配体可包含具有VEGF结合特异性结合位点的多肽域，具有EGFR结合特异性结合位点的多肽域，或者包含具有VEGF结合特异性结合位点的多肽域和具有EGFR结合特异性结合位点的多肽域。 本专利技术的配体提供一些优势，例如如本文所述，可修饰配体使之具有所需体内血清半衰期。因此，配体可用于控制、降低或消除治疗药(例如用于治疗癌症的毒素)的一般毒性。此外，dAb比常规抗体小很多，给予dAb比给予常规抗体的组织渗透性更好。因此，当用于治疗癌症(例如通过靶向实体瘤)时，dAb和包含dAb的配体比常规抗体更具优势。此外，许多癌症过量表达EGFR，可以给予具有EGFR和VEGF结合特异性的配体，将VEGF-抑制活性靶向肿瘤或癌细胞的环境。该方法直接给予肿瘤或癌症部位两个有利活性，即通过结合EGFR并抑制配体(例如EGF、TGFα)与受体结合，以及抑制支持肿瘤形成和发育的血管生成，而导致抗癌活性。因此，可将具有VEGF和EGFR结合特异性的配体给予癌症(例如表达EGFR的癌症)患者，以便用单一治疗药达到良好治疗。 此外，通过EGFR转导的信号可导致血管生成因子(例如VEGF)的产生。表达或过量表达EGFR的癌细胞(例如在肿瘤中)可产生高水平VEGF，其在局部起到减少肿瘤血管生成的作用。因此，可将具有VEGF和EGFR结合特异性的本专利技术配体给予患者，以便将配体的VEGF抑制活性定向给予过量表达EGFR的细胞。因此，可将抗血管生成治疗特异性给予产生VEGF的部位(例如给予过量表达EGFR的细胞)。 在某些实施方案中，配体具有VEGF结合特异性并且包含(至少一个)具有VEGF结合特异性的免疫球蛋白单可变区。在其它实施方案中，配体具有EGFR结合特异性并且包含(至少一个)具有EGFR结合特异性的免疫球蛋白单可变区。在某些实施方案中，配体具有VEGF和EGFR结合特异性，并且包含(至少一个)具有VEGF结合特异性的免疫球蛋白单可变区和(至少一个)具有EGFR结合特异性的免疫球蛋白单可变区。 如本文所述，可以精制本专利技术的配体。例如，可以精制本专利技术的配体以改变其体内血清半衰期。如有必要，配体还可包含本文所述的毒素或毒素部分。在某些实施方案中，配体包含表面活性毒素，例如自由基产生物(例如含硒毒素)或放射性核素。在其它实施方案中，毒素或毒素部分是具有胞内靶结合特异性结合位点的多肽域(例如dAb)。在具体实施方案中，配体是具有VEGF和EGFR(例如人VEGF和人EGFR)结合特异性的IgG样形式。 配体形式 如本文所述，本专利技术的配体可精制成单特异性、双特异性或多特异性配体。另见WO 03/002609中关于配体精制，其全部内容通过引用结合到本文中。所述双特异性配体包含具有不同结合特异性的免疫球蛋白单可变区。所述双特异性配体可包含重链区和轻链区的组合。例如，双特异性配体可包含VH区和VL区，其可以scFv形式连接在一起(例如使用合适的接头，例如Gly4Ser)，或者精制成双特异性抗体或其抗原结合片段(例如F(ab’)2片段)。双特异性配体并不包括互补VH/VL对，其形成能协同结合抗原或表位的常规两条链的抗体抗原结合位点。而双形式的配体却包含VH/VL互补对，其中V区具有不同的结合特异性。 另外，如有必要，双特异性配体可包含一个或多个CH区或CL区。如有必要，也可包含铰链区。这样的各区组合可以例如模拟天然抗体，例如IgG或IgM或其片段，例如Fv、scFv、Fab或F(ab’)2分子。也考虑了其它结构，例如包含VH、VL、CH1和CL区的IgG分子的单臂。优选本专利技术的双特异性配体仅包含两个可变区，尽管几个这样的配体也能掺入同一蛋白质，例如两个这样的配体可以掺入IgG或多聚体形式的免疫球蛋白，例如IgM。或者，在另一个实施方案中，多个双特异性配体结合在一起形成多聚体。例如，两个不同双特异性配体结合在一起，产生四特异性分子。本领域技术人员可以理解，本专利技术方法所产生的双特异性配体的轻链可变区和重链可变区，可以在同一多肽链上或者在不同多肽链上。就可变区在不同多肽链上而言，它们可以通过接头、通常是柔性接头(例如多肽链)、化学连接基团而连接，或者通过本领域已知的任何其它方法而连接。 在某些实施方案中，接头可以是含有抗体可变区羧基端氨基酸和抗体恒定区氨基端氨基酸的“天然接头”。例如，天然接头可含有Vκ的羧基端氨基酸和Cκ的氨基端氨基酸(例如KVEIKRTVAAPS(SEQ ID NO706))。在其它实施方案中，接头可含比天然接头更少的Lys和Arg残基(例如LVTVSSAST(SEQ ID NO707)或(LVTVSSGGGGSGGGS(SEQ ID NO708))。如有必要，可使接头突变，以取代一些或全部带正电荷的残基(例如在天然接头中)，例如用在生理pH下不带正电荷的残基取代Lys和/或Arg。例如，Lys和/或Arg残基可以用Asn、Leu、Gln或Ser取代。这类接头具有降低蛋白酶敏感性的优势(例如丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、基质金属蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧肽酶、组织蛋白酶(例如组织蛋白酶G)、蛋白酶3)。这些接头的实例包括GQGTNVEINRTVAAPS(SEQ ID NO710)、GQGTNVEINQTVAAPS(SEQ ID NO711)、GQGTNVEIQRTVAAPS(SEQ ID NO712)或GQGTLVTVSSTVAAPS(SEQ ID NO713)。 蛋白酶(例如丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、基质金属蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧肽酶、组织蛋白酶(例如组织蛋白酶G)、蛋白酶3)在蛋白质的正常更新和代谢中起作用。然而，在某些生理状态(例如炎症状态(例如COPD)和癌症)下，组织、器官或动物体内(例如肺部、肿瘤内或其附近)存在的蛋白酶的数量会增加。这样的蛋白酶的增加可导致内源蛋白质加速降解或失活，以及所给予的治疗或诊断用肽、多肽和蛋白质的加速降解或失活。事实上，某些具有体内用途(例如用于治疗、诊断活预防疾病)的药物只有有限功效，因为它们被蛋白酶快速降解而失活。 本专利技术涉及包含能耐受蛋白酶降解的接头的配体。本专利技术的蛋白酶耐受性配体具有一些优势。例如，可将蛋白酶耐受性配体给予患者，比起蛋白酶敏感性药物而言，其活性在体内保留时间更长。因此，蛋白酶耐受性配体可在足够产生生物效应的时间周期内保持功能。 在适于蛋白酶活性的条件下，将耐受蛋白酶降解的配体或接头与蛋白酶一起孵育至少约2小时、至少约3小时、至少约4小时、至少约5小时、至少约6小时、至少约7小时、至少约8小时、至少约9小时、至少约10小时、至少约11小时、至少约12小时、至少约24小时、至少约36小时或至少约48小时，耐受蛋白酶降解的配体或接头基本上不被蛋白酶降解。将配体或接头与蛋白酶一起孵育至少约2小时之后，当不超过约25％、不超过约20％、不超过约15％、不超过约14％、不超过约13％、不超过约12％、不超过约11％、不本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）和表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）结合特异性的配体，所述配体包含至少一个具有ＶＥＧＦ结合特异性结合位点的蛋白质部分和至少一个具有ＥＧＦＲ结合特异性结合位点的蛋白质部分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：O伊纳托维奇，S霍尔姆斯，R贝克曼，刘海群，RMT德维尔德特，LS耶斯佩斯，M斯图尔特，A塞普，M普佩卡，
申请(专利权)人：杜门蒂斯有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]