口服干扰素的广谱免疫和抗病毒基因调节作用制造技术

将人α－干扰素口服给予包括人在内的被感染动物，以在动物中诱导抗病毒／免疫调节应答。本文描述了对病毒（包括禽流感）产生抗性或减轻该病毒接触作用的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】口服干扰素的广谱免疫和抗病毒基因调节作用与相关申请案交互参考本申请要求美国2006年3月8日申请的临时专利申请序列号 60/780,079的优先权。本专利技术涉及使用由天然a-干扰素的混合物和任选其他可激活免 疫应答的组分组成的a-干扰素对抗病毒感染例如禽流感(AVI)的作 用。人类细胞的病毒感染会引起由1型干扰素特别是a-千扰素介导 的固有免疫应答(第一道防线)。这通常会引起免疫"级联"的激活， 如干扰素-a (作为该免疫"交响乐"的一类指挥)，将时间和组成该免如果免疫交响乐的指挥尤其是a-干扰素失活，交响乐团的成员则会不 规律地、不按顺序地演奏等等，其累积作用对人体并非有益而是有害 的。致命急性人类病毒通常可灭活a-干扰素以在人体内占得一席之 地。具有这种行为方式的原型病毒为禽流感病毒、SARS病毒、类天 花病毒和其他可在数小时或数日内杀死人类宿主的病毒(在动物中可 观察到类似作用)。近期对于肺病理学的研究(尸检)表明伴随着对免疫交响乐的指 挥即a-干扰素的破坏/失活，某些介质/"演奏者"过度反应，导致对肺 的免疫介导性损害，可导致死亡。基于动物的研究和人类数据(在本 文中作为题述专利技术(subjectinvention)报导)表明短暂地施药于口腔/颊 粘膜的小剂量a-干扰素可在严重感染发生之前或其前期阶段适当地 重新调节免疫失常和可能引起死亡的免疫失调。对禽流感肺病理学的研究不仅显示出组织损伤害也显示出氧化 损伤、肺水肺和出血。干扰素-a可 在短暂的口腔接触中通过诱导抗病毒/免疫调节基因逆转这些变化。本文记录了 385种该类相关基因，其可被AlferonN暂时诱导以完成 对致命病毒的协作攻击。Geiss等(Proc Natl Acad-Sci，2002年8月6日，99巻，16期) 报导了大流行禽流感中的肺上皮病变是由"阻断干扰素-调节基因的 表达"引起的。其他研究者指向"炎性反应的彻底激活"，这主要是由 TNF (肿瘤坏死因子)的不当表达引起的，其为一种在实施本专利技术中 被有效下调的免疫调节淋巴因子。很明显，题述专利技术重新激活相关干扰素免疫调节途径而不会显著 上调炎性细胞因子-TNF就是研究最充分的原型实例。本文描述的治疗步骤中的a-干扰素组分优选基于AlferonN注射 剂@,美国市售的唯一被批准的天然、多种类a-干扰素。它是第一个 天然来源的多种类干扰素，是至少7种a-干扰素组成的稳定混合物。 相反，其他市售a-干扰素为使用DNA重组技术在细菌中获得的a-干扰素单分子种类。这些a-干扰素的单分子种类也缺少重要的结构性 碳水化合物组分，这是因为在细菌中没有糖基化步骤。与重组技术生产的a-干扰素种类不同，AlferonN注射剂@是由可 将多种a-干扰素种类糖基化的人白细胞生产的。反相HPLC研究显示 AlferonN注射剂⑧是由至少7种a-干扰素种类(a2、 a4、 a7、 a8、 a10、 a16、 a17)组成的稳定混合物。这一天然来源的干扰素具有独特的抗 病毒性质，使其有别于基因工程干扰素。AlferonN注射剂@具有高纯 度和7种干扰素种类组成的天然混合物的优点，其中一些例如种类 8b比其他种类例如种类2b具有更强的抗病毒活性，后者为IntronA 的唯一组分。已报导Alferon N注射剂②与其他市售重组干扰素例如 Intron A和Roferon A相比在例如慢性丙型肝炎(HCV)的治疗中具 有更好的抗病毒活性和耐受性。AlferonN注射剂为含有5,000,000国际单位(IU) /ml的注射液。对于a-干扰素的体内给药可配制成例如传统的口服、鼻腔或含服给药形式。口服给药制剂包括含水溶液、糖浆、酏剂、粉末、颗粒、 片剂和胶嚢，它们通常包含传统的辅料例如粘合剂、填充剂、润滑剂、 崩解剂、润湿剂、混悬剂、乳化剂、防腐剂、緩冲盐、芳香剂、着色 剂和/或甜味剂。优选适当的途径给予a-干扰素用于治疗，包括口服、鼻腔和局部(包括透皮、含服和舌下)给药。应理解优选的途径可随着接受者的 疾病和年龄、感染的性质和所选择的活性成份而变化。该组分的建议剂量取决于患者的临床状况和临床医师在治疗相 似感染中的经验。作为总体指导原则，用于全身感染的AlferonN注 射剂@的剂量为5百万至1千万单位(59)，每周三次。到目前为止的 经验为高于3 IU/磅患者体重的剂量。以液体溶液形式在500 - 2000IU/ 曰的范围内给予口服a-干扰素(Alferon LDO)并以体重为150磅的 患者为P出进行计算，这是3.3 - 13.3IU/lb/日。我们的经验表明超过450 IU的a-干扰素剂量水平可得到有利结 果，这大于3IU/;t体重。这些用量与Cummins在美国专利5,190,304 中使用的以口服或作为锭剂或片剂给予咽粘膜的a-干扰素的量形成 反差并且更大。已报道低剂量的a-干扰素与口腔粘膜接触后可在动物和人体中 引起生物学作用。但是达到全身抗病毒作用的低剂量口服a-干扰素的 最优剂量和/给药方案需由临床医师确定。天然来源的a-干扰素 (Alferon N Injection )已^皮批准用于治疗尖锐湿疣。它的活性剂量 显著低于重组a-干扰素。实施例1本研究用于测定Alferon在短尾猕猴中对流感病毒H5N1感染的 预防作用。用流感病毒H5N1感染短尾猕猴(食蟹猴)，结果显示短尾猴的 临床表现与被禽流感H5N1病毒感染的人类的临床表现相似，因此可以使用被流感病毒H5N1感染的短尾猕猴作为人类感染的冲莫型 (Rimmelzwaan等，Avian Dis.2003; 47(3增刊1): 931-3， Kuiken等，Vet Patho1,2003年3月；40 ( 3 ): 304— 10， Rimmelzwaan等，J.Vriol. 2001年7月；75 ( 14): 6687-91 )。将上述猕猴H5N1感染模型用于测定给短尾猕猴口腔粘膜给药 (在用流感病毒A/Vietnam 1194〃04(H5N1)进行气管内刺激5天前)Alferon并之后以各种剂量连续十天单次给药后Alferon在短尾猕猴中的预防作用。为安全和实际操作(口腔粘膜给药AWeron，用流感病毒H5Nl感 染)考虑在每一步骤前将动物麻醉。该实验包含四组动物，每组三只。 A组接受10mg/kg Alferon的治疗，B组25mg/kg Alferon, C组 62.5mg/kgAlferon, D组使用安慰剂。未观察到不良反应。在感染后第5天进行安乐死时，显微肺损伤表明用62.5mg/kg Alferon治疗的C组动物肺部显示出分离的黑红区域或弥散的黑色区 域，与其他組动物相反。这与也表明该组动物左颅和尾部肺叶存在低 级原发性非典型肺炎的显《效观察结果一致。口腔粘膜给予Alferon预防性治疗猕猴显示出在被治疗动物中外 观和組织病变减少的有利剂量依赖作用。实施例2研究A:持续10天每日口服给予500 IU或1000 IU Alferon (由 稀释Alferon注射剂制备的含水緩冲液中)治疗无症状HIV感染受试 者，其CD4水平〉400。应用Paxgene技术分离RNA，从治疗前、中、 后收集的血液中分离外周血白细胞的RNA。应用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在包括人在内的动物中诱导抗病毒／免疫调节应答的方法，其包括口服给予被感染的动物或人α干扰素。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：WA卡特，D斯特拉耶，
申请(专利权)人：半球生物制药公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]