一种线虫寄生虫抗原,其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了新的后生动物寄生虫抗原、编码，它们的核酸及其在控制由蠕虫和其他后生动物寄生虫、尤其是家畜动物中的蠕虫和节肢动物寄生虫引起的疾病中的应用。本发明专利技术特别提供了预防性后生动物寄生虫抗原或其抗原片段、成分或前体和其具有抗一种或多种后生动物寄生虫的预防性抗原活性的功能等同衍生物、类似物或变异体。该抗原的特征在于能够结合胃酶抑素，并且其天然形式是一种完整的膜蛋白或蛋白复合物。本发明专利技术还提供了具有天冬氨酰蛋白酶样和／或中性内肽酶样活性特征的抗原。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新的后生动物寄生虫抗原，以及它们在控制由蠕虫和其他后生动物寄生虫(尤其是家养动物中的蠕虫和节肢动物寄生虫)引起的疾病中的应用。每种家养动物都可以寄生有许多不同的寄生虫，包括许多种蠕虫和节肢动物，这一寄生过程通常引起疾病。这些疾病中有些在经济上是相当重要的例如血矛线虫病(haemonehosis)是由捻转血矛线虫这样一种蠕虫引起的疾病，这种线虫寄生在各种反刍动物包括羊的皱胃或真胃。血矛线虫的幼虫和成熟虫是吸血虫，它通过嘴附着在胃粘膜内的小血管上。有严重寄生虫的羊可失去大量血液，导致贫血、不健壮和经常死亡。血矛线虫病主要发生于世界的热带和亚热带地区，因为捻转血矛线虫在牧场的非寄生期易出现于低温气候，并且经常是在温和气候下也不能过冬。从经济观点看也具有非常重要意义的是非吸血线虫Ostertagia ostertagi和Ostertagia(Teladorsagia)circumcincta(O.circumcincta最近被再分类为T.Circumcincta，只是新的名称尚未被广泛应用)。分别感染有O.ostertagi和O.circumcincta的牛和羊不能够健康成长，如果不治疗会引起死亡，胃线虫病(Ostertagiosis)是当今动物饲养中发生问题的主要蠕虫感染之一。其他有经济重要性的寄生虫包括下列蠕虫家族的各种寄生虫毛圆线虫属，细颈线虫属，网尾(线虫)属，古柏线虫属，蛔虫属，恶丝虫属，鞭虫属，园线虫属，片吸虫属，结节线虫属，仰口(线虫)属，后圆线虫属。除家畜外，宠物和人也会被感染，常常出现致命的后果，并且蠕虫感染和侵染会带来相当广泛严重的世界性问题。其他有意义的后生动物寄生虫包括许多节肢动物种类，尤其是蜘蛛和昆虫类的成员，特别是外寄生物如吸血(血液寄生)昆虫(例如昆虫外有翅亚纲和内有翅亚纲的成员)，绿头苍蝇(绿蝇属)和扁虱。这方面特别提到的是扁虱品种和牛蜱属(Boophilus，spp)、钝眼蜱属、软蜱属、扁头蜱属、璃眼蜱属、钝缘蜱属、革蜱属、硬蜱属;苍蝇，尤其是绿蝇属和蝇蛆病，吸吮和叮咬苍蝇，如厩螯蝇、羊狂蝇、Hydrotaea irritans、胃蝇属、蚋属、扰血蝇、黑角蝇属、虻属、金蝇属、丽蝇属、白蛉属、舌蝇属、皮蝇属(hypoderma spp)、皮蝇属(Dermatobia spp)、和旋锥蝇属，虱，如，Haematopinus eurysternus、Linognathus Vittuli、Solenopotes Capillatus、Linognathus ovillus、和Menacanthus spp;螨，如痒螨属、蠕螨属、疥螨属、皮疥螨属、Psorergates spp、皮刺螨属、禽刺螨属、耳癞螨属、和痂螨属;蚤类如犬栉头蚤和猫栉头蚤;羊蜱蝇类如，羊虱蝇，和臭虫如臭虫属。除了它们本身寄生的影响，许多吸血节肢动物是传播各种疾病的重要因素，例如，传播有医学和兽医学意义的致病性原虫或病毒。由于吸血节肢动物以及它们传播的疾病使得牲畜饲养者每年损失很大。对于畜牧场蠕虫和节肢动物寄生虫的控制，目前主要依靠使用抗蠕虫药、endectosides和/或杀虫剂，并配合牧场管理。这种方法经常是不令人满意的，首先，因为必须经常地使用药物，再者对抗蠕虫药和杀节肢动物药的抗药性广泛增加，第三某些牧场经常不可能有合适的牧场管理，而且即使有，也是强调最好的利用可能的放牧。曾试图通过免疫方法控制家畜的寄生虫。除极少数例外(如，牛肺蠕虫，Dictyocaulus viviparus)已经证实这种方法的不可行性，到目前为止，商业上尚没有用于防止反刍动物胃肠道线虫(包括血矛虫属和胃线虫属)和主要节肢动物寄生虫的疫苗。不过，最近几年，有一些报道描述从血矛线虫属中分离出的新蛋白，并且有预防性抗原活性，不仅可抗血矛线虫属，而且还可以抗家畜的多种相关内寄生虫(描述见Emery和Wagland，1991，Parasitology Today 7，347-349)。Munn于1977年(Tissue and Cell 1977，923-34)首次报道了与捻转血矛线虫肠细胞腔表面相关的一种螺旋状聚合细胞外蛋白-弯曲蛋白(Contortin)，而且后来作为粗制提取物大剂量(几毫克)给药时，表现可防止小羊发生血矛线虫病(Munn 1987，Parasitology 94 385-397)。因为需要大剂量以及所注射制剂的不纯，尚不清楚是否这些实验中产生的保护作用实际上是由于弯曲蛋白(contortin)本身还是由于污染疫苗的其他抗原。的确进一步的工作表明用这种弯曲蛋白制剂免疫的羊也具有抗肠膜蛋白对(doublet)H 110 D的抗体。后来表明用小剂量(几百微克)的高纯度H 11 D免疫的羊基本上可防止血矛线虫病(Munn，WO 88/00835;Munn and Smith WO 90/11086)。H 110 D目前代表了当今抗血矛线虫属最成功的疫苗成份。还发现了第三种具有预防性抗原特性的血矛线虫肠膜蛋白并命名为H45(Munn and Smith WO 90/11086)。现有技术中还有报道不成功的尚试，试图在血矛线虫属和其他蠕虫种类中识别预防性抗原。因此，如，已从成熟血矛线虫属中分离出一种45kd膜糖蛋白，将它作为免疫原用于由这种寄生虫激发的荷兰猪中时以蠕虫数表示可表现出约50%的保护作用(Sharp，Wagland and Cobon WO 92/13889)。没有描述它在羊身上的作用。没有说明这种抗原在蠕虫中的天然位置，确实也没有说明它是一种肠腔表面蛋白。有报道说血矛线虫属膜提取物的更粗制品(几乎肯定含有H 110 D)可减少羊卵虫和蠕虫数目分别达88和75%，不过也没有提供资料说明分组样本大小以及羊之间变异的情况。捻转血矛线虫自然条件下不寄生于荷兰猪。不象在其自然宿主如羊身上那样可持续几周，血矛线虫属感染荷兰猪后在达到其成熟期前几乎所有蠕虫在感染后5到7天之间即被明显地消除掉(Wagland，Abeydeera，Rothwell and Ouwerkerk 1989 International Journal for Parasitology 19 301-305)。在WO 92/13889中使用的荷兰猪激发模型中，在激发后5或6天处死动物，这样接种组和对照组之间的任何区别只反映了排斥现象加速了1或2天。这种非常微小的区别与本专利技术(也见上述的WO 88/00835和WO 90/11086)所述的羊身上的效果形成对照，并且对此文献中的这种实验室动物模型的价值产生了怀疑。后来本专利技术经实验证实了这种怀疑，发现一种血矛线虫属膜提取物的小麦芽植物血凝素结合部分对羊具有高度的保护作用，而在WO 92/13889中报道了一种基本相似的制剂在荷兰猪模型中无作用。WO 89/00163描述对一种41kd蛋白的编码基因的克隆和表达，这种蛋白来源于蛇形毛圆线虫，这种线虫是与血矛线虫相同分类家族的一个成员，并且是羊小肠的一种寄生虫。这种蛋白尚没有特征化，尽管由于用来源于表达这种基因的重组有机体的蛋白接种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预防性后生动物寄生虫抗原或其抗原片段、成份或前体以及其具有抗一种或几种后生动物寄生虫的预防性抗原活性的功能等同衍生物、类似物或变异体，该抗原的特征在于能够结合胃酶抑素，并且其天然形式是一种完整膜蛋白或蛋白复合物。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：WD史密斯，SK史密斯，J默里，S利德尔，DP诺克斯，
申请(专利权)人：马林克罗特兽药公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]