The present invention relates to protease variants and methods for obtaining protease variants. The present invention also relates to polynucleotides encoding these variants, nucleic acid constructs comprising these polynucleotides, vectors, and host cells, and methods of using these variants.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸对序列表的引用本申请包含计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。专利技术背景专利
本专利技术涉及相对于亲本蛋白酶在一种或多种特性中展示出改变的多种新颖蛋白酶变体，所述特性包括：洗涤性能、洗涤剂稳定性和/或储存稳定性。本专利技术的变体适合用于在例如清洁过程或清洁剂组合物中使用，例如洗衣组合物和餐具洗涤组合物，包括手洗和自动餐具洗涤组合物。本专利技术还涉及编码这些变体的分离的DNA序列、表达载体、宿主细胞以及用于产生和使用本专利技术的蛋白酶变体的方法。相关领域描述几十年来已经在洗涤剂工业中使用多种酶作为洗涤配制品的部分。从商业视角看，蛋白酶在这样的配制品中是最相关的酶，而其他酶(包括脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、半纤维素酶或多种酶的混合物)也是通常使用的。为了改进蛋白酶的成本和/或性能，对具有改变的性质，如在低温下增加活性、增加的稳定性、在给定的pH下增加比活性、改变的Ca2+依赖性、在存在其他洗涤剂成分(例如漂白剂、表面活性剂等)的情况下增加的稳定性等的蛋白酶进行着持续搜寻。广泛用于洗涤剂中的一个蛋白酶家族是枯草杆菌酶。这个...
【技术保护点】
一种蛋白酶变体，包括在对应于以下位置的一个或多个位置的取代：SEQ ID NO:3的1、2、3、4、5、7、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、36、38、39、40、41、46、47、48、49、50、54、57、58、59、60、61、62、63、65、67、69、70、71、77、79、80、81、82、83、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、105、107、109、111、...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.30 EP 14191091.91.一种蛋白酶变体，包括在对应于以下位置的一个或多个位置的取代：SEQIDNO:3的1、2、3、4、5、7、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、36、38、39、40、41、46、47、48、49、50、54、57、58、59、60、61、62、63、65、67、69、70、71、77、79、80、81、82、83、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、105、107、109、111、113、114、116、119、123、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、136、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、156、157、159、160、161、162、163、164、165、166、171、173、174、175、176、179、183、185、187、192、197、199、201、202、207、212、217、219、221、222、223、224、226、228、229、230、231、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、253、254、255、256、257、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、290、291、293、294、295、296、297、298、308、309、310或311，其中该变体与SEQIDNO:3具有至少70％序列一致性，并且该变体具有蛋白酶活性。2.如权利要求1所述的变体，其包括一个或多个选自下组的取代，该组由以下各项组成：根据SEQIDNO:3编号的A1S、A1Y、A1G、A1Q、A1R、V2M、V2K、V2S、P3S、P3L、P3T、S4M、S4G、S4W、S4D、S4F、S4R、T5W、T5C、T5Y、T5L、T5P、T5V、T5S、T7L、T7F、I11L、I11M、K12S、K12E、K12W、K12C、K12L、S13R、I14L、I14F、I14V、Y15C、Y15G、N16L、N16C、D17R、D17Q、D17L、D17M、D17E、D17C、D17A、D17V、D17K、D17S、D17T、Q18R、Q18E、Q18G、Q18C、Q18T、S19Q、I20W、T21R、K22L、K22C、K22V、K22T、K22F、T23W、T23G、T24V、T24A、T24N、T24M、T24W、T24C、T24F、T24G、G25A、G25D、G25Q、G26S、S27G、S27P、S27L、S27R、S27C、G28R、G28C、G28Q、G28E、G28A、G28L、I29L、I29S、K30A、K30V、K30G、K30W、K30L、K30C、K30H、V31G、V31S、A32N、A32G、V33Q、L34T、L34A、T36G、T36A、T36C、V38I、Y39S、Y39F、Y39V、T40I、T40M、T40G、T40A、T40Q、T40R、T40V、S41R、S41V、S41M、A46G、A46F、A46V、G47L、G47C、G47Q、G47V、G47R、G47S、S48W、S48F、A49G、A49Y、A49L、A49W、A49I、A49S、A49R、A49K、A49V、A49C、A49N、A49E、E50R、D54S、D54A、Q57L、Q57G、S58F、S58E、N59V、P60R、P60F、P60A、L61R、V62M、D63C、D63V、D63R、S65R、T67S、T67P、R69V、Q70G、G71W、G71A、A77V、A77S、A77C、A77G、A77I、A77L、A77M、T79L、T79A、T79G、T79N、T79V、V80H、V80T、V80L、V80N、L81T、L81N、A82C、A82T、H83Y、H83V、H83P、H83G、H83W、H83S、H83L、H83C、H83E、H83R、G85L、S86G、S86A、S86V、S86C、S86W、N87D、N87V、N87A、N87R、N87T、N87E、N87H、N87W、G88N、G88W、G88K、G88E、G88L、G88R、G88A、Q89R、Q89L、Q89C、Q89G、Q89S、Q89A、Q89K、Q89W、G90L、G90R、G90K、V91G、V91L、V91D、Y92W、Y92T、Y92F、Y92G、Y92V、G93S、G93A、V94P、V94L、A95N、A95S、P96G、P96A、P96L、P96S、P96W、P96E、Q97T、Q97W、Q97M、Q97R、Q97F、Q97A、Q97G、A98S、A98G、A98V、A98S、A98R、K99W、K99L、K99H、K99A、K99Q、K99C、K99R、K99V、K99T、L100E、L100S、L100G、W101L、A102M、A102C、A102S、A102F、Y103F、Y103H、Y103D、Y103V、V105A、G107R、N109R、N109S、S111A、S111F、S111W、S111Q、S111E、S111L、S111D、S111G、S111V、S111T、S111Y、Y113E、Y113C、Y113F、S114Y、S114L、D116V、A119G、A119T、H123S、H123E、H123Y、A125R、A125S、A125V、A125I、A125V、D126I、D126E、D126Q、D126F、D126L、D126C、D126P、D126S、D126V、E127V、A128C、A128G、A128V、S129G、S129H、S129W、R130V、R130W、R130C、R130G、R130P、R130L、R130Q、R130M、R130I、R130T、T131E、T131R、T131F、T131A、T131S、T131G、T131V、T131C、T131W、G132T、S133V、S133R、S133L、S133F、K134C、K134R、K134A、K134Y、K134W、K134L、K134G、V136M、V136S、V136L、S143G、S143Q、S144D、S144G、S144C、S144Y、A145E、A145I、A145R、A145S、A145W、A145V、K146M、K146R、D147T、D147L、D147I、D147V、D147Y、S148F、S148L、S148C、S148Y、S148R、S148T、S148A、S148D、S148V、S148Q、S148G、S148M、S148N、S148W、L149G、L149M、L149F、L149S、L149R、I150R、I150Q、I150G、A151V、A151T、A151E、S152M、S152W、S152E、S152G、S152T、S152K、S152L、S152A、A153W、A153G、A153S、Y156G、A157G、A157S、G159M、G159A、G159W、G159L、G159C、G159T、K160G、K160V、G161N、G161C、G161R、G161V、G161M、G161S、G161W、G161L、G161D、G161Y、G161A、G161I、V162C、V162W、V162N、L163Y、L163V、L163C、L163I、L163T、I164S、I164L、V165H、V165A、V165L、V165C、A166V、S171M、S171W、S171H、S171C、S171G、S173H、S173W、S173A、G174A、G174C、G174E、S175I、N176D、G179R、G183W、V185I、V185L、A187S、A187C、A192S、Q197C、N199C、T201P、T201C、Y202L、F207W、N212R、G217A、G217S、Y219F、I221V、Q222G、Q222H、E223Q、R224A、I226L、V228S、S229A、A230W、A230C、A230S、A230T、P231S、P231A、A233I、A233G、A233T、A233C、A233D、A233L、A233V、A233W、A233E、S234G、S234H、S234V、S234M、S234L、S234C、S234E、S234A、S234D、S234R、V235I、E236A、S237C、S237V、S237G、T238G、T238H、T238V、W239G、W239R、Y240F、Y240P、Y240S、Y240C、Y240R、Y240V、Y240L、Y240H、T241Q、T241E、T241S、T241W、T241D、G242H、G242S、G242V、G242K、G243T、G243N、G243F、G243A、G243V、Y244R、Y244W、N245E、N245L、N245A、N245R、T246G、T246R、T246V、T246I、I247A、I247G、I247W、I247L、I247M、I247Y、I247Q、S248F、A253S、T254G、P255A、H256M、H256A、V257I、V257L、V257T、V257D、V257S、V257C、G259A、L260G、L260Y、L260C、A261L、A261S、A262I、A262G、K263V、I264F、I264V、W265A、W265I、W265L、S266Y、S266T、S266G、S266I、S266W、A267W、A267M、A267K、A267G、N268C、N268L、N268E、N268W、N268V、N268G、N268R、N268A、T269C、T269M、T269V、T269W、T269L、T269G、T269S、S270G、S270H、S270V、S270R、S270L、S270C、L271C、L271V、L271A、L271Y、L271R、L271E、L271F、L271T、L271K、L271S、L271G、S272G、S272N、S272D、S272V、S272R、H273F,H273L、H273G、H273W、H273A、H273R、H273D、H273K、H273Q、S274R、S274W、S274A、S274G、S274F、S274E、S274M、S274H、Q275L、Q275T、Q275K、Q275H、Q275G、Q275V、Q275S、Q275E、Q275C、Q275W、Q275P、L276G、T278V、T278C、T278G、T278L、T278Q、T278Y、T278R、E279R、E279G、E279C、E279V、L280V、L280K、L280G、Q281S、Q281G、N282G、N282C、N282D、N282A、N282S、N282R、N282E、N282K、N282L、R283G、R283A、R283C、R283K、R283M、A284S、K285P、K285C、K285V、K285R、V286P、V286R、V286D、V286C、V286M、V286E、Y287L、Y287Q、Y287M、K290L、K290R、K290V、K290H、G291S、I293V、G294C、A295M、G296V、G296R、G296Y、G296R、T297V、T297S、G298L、P308C、P308T、P308G、R309L、V310C、V310A、V310H、V310G、V310Q、V310R、V310T、K311Y、K311H、K311C和K311V，其中该变体与SEQIDNO:3具有至少70％序列一致性，并且该变体具有蛋白酶活性。3.如权利要求1-2中任一项所述的变体，其中该变体与亲本相比或与具有SEQIDNO:3的蛋白酶相比具有改进的洗涤剂稳定性。4.如权利要求1-3中任一项所述的变体，其中该变体是选自下组，该组由以下各项组成：a)与SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少75％序列一致性的多肽；b)由多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中、或高严格条件下与(i)SEQIDNO:1的成熟多肽编码序列、(ii)编码SEQIDNO:2的成熟多肽的序列、或(iii)(i)或(ii)的全长补体杂交；c)由与SEQIDNO:1的成熟多肽编码序列或者编码SEQIDNO:2的成熟多肽的序列具有至少75％一致性的多核苷酸编码的一种多肽；以及d)SEQIDNO:2的成熟多肽的片段，该片段具有蛋白酶活性。5.如权利要求1-4中任一项所述的变体，其中该变体与SEQIDNO:3的成熟多肽具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列一致性。6.如权利要求1-5中任一项所述的变体，其中相比于SEQIDNO:3，改变的总数为1-20个，例如1-10个和1-5个，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个改变。7.一种洗涤剂组合物，其包括根据权利要求1至6中任一项所述的变体。8.如权利要求7所述的洗涤剂组合物，其进一步包括一种或多种洗涤剂组分。9.根据权利要求7-8中任一项所述的洗涤剂组合物，其进一步包括一种或多种选自下组的另外的酶，该组由以下各项组成：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶，或其任何混合物。10.根据权利要求7-9中任一项所述的洗涤剂组合物，其处于条、均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个室的袋、规则的或压缩的粉末、颗粒、膏、凝胶、或规则的、压缩的或浓缩的液体的形式。11.根据权利要求7-10中任一项所述的洗涤剂组合物在清洁过程例如洗衣或硬表面清洁例如餐具洗涤中的用途。12.一种用于获得蛋白酶变体的方法，该方法包括将在对应于以下位置的一个或多个位置的取代引入亲本蛋白酶：SEQIDNO:3的1、2、3、4、5、7、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、36、38、39、40、41、46、47、48、49、50、54、57、58、59、6...
【专利技术属性】
技术研发人员：S克罗格斯加德，RT伦哈德，EP弗里斯，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK
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