水溶性中分子量动物胸腺提取物制造技术

本发明专利技术涉及的是一种具有促进细胞增殖的药物－水溶性中分子量动物胸腺提取物，它是从哺乳动物胸腺，尤其是具有促进细胞增殖效应的乳猪胸腺蛋白；本发明专利技术主要是利用包括离心分离，透析的方法，从乳猪胸腺中制取一组具有促进细胞增殖的能力，可明显促进内皮细胞，成纤细胞生长的中分子量乳猪胸腺蛋白。本发明专利技术所述的水溶性中分子量动物胸腺提取物具有的促进细胞增殖的能力，可有效的促进人体表皮细胞的增殖和代谢，在治疗胃溃疡、十二指肠球部溃疡及促进疮面愈合方面有非常明显的效果。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种水溶性中分子量动物胸腺提取物，尤其是具有促进细胞增殖效应的乳猪胸腺蛋白，它能有效的促进细胞增殖，对治疗胃溃疡、十二指肠球部溃疡及促进创面的愈合有明显的疗效;本专利技术也是CN92105643.5的后续专利。胸腺是体内分泌激素和产生多种细胞因子的器官，胸腺产生的多肽和蛋白质能调节免疫反应。近年，国外对胸腺提取物的研究已引起重视。七十年代初期，Goldstein等人从小牛胸腺中分离出一组能调节免疫系统的多肽，生化分析表明上述胸腺肽是具有活性的单一肽类，其分子量均小于15000道尔顿，七十年中期，Hoopper等人从小牛胸腺肽的制备中第一次采用超滤技术截留分子量小于15000道尔顿的胸腺肽组份;77年Goldstin提出了分子量为3108道尔顿的制品a;79年Ahmed提出分子量为2500道尔顿的制品a7;以及81年Low提出的分子量为4982道尔顿的制品a。从上述内容可以看出，目前已经公开的研究结果，主要集中在小分子胸腺肽，分子量小于15000道尔顿，还有的学者认为，胸腺中具有生物活性的成份均是分子量在6000道尔顿以下的较小的多肽。92年，我们提出了从乳猪胸腺中提取出一组中分子量水溶性胸腺蛋白，并对其进行促细胞增殖活性的研究。在先专利仅提出了胸腺蛋白的制备，对在先专利所述的胸腺蛋白的各种物化参数的进一步研究得出本专利技术所述的水溶性中分子量动物胸腺提取物的主要活性为3～5万的水溶性胸腺蛋白，它还含有多种人体必须的维量元素和氨基酸，本专利技术所述的水溶性中分子量动物胸腺提取物对胃溃疡、十二指肠球部溃疡以及促进创伤面的愈合有非常明显的效果。本专利技术的主要目的是提供一种具有促进细胞增殖的水溶性中分子量动物胸腺提取物，尤其是乳猪胸腺蛋白，它能有效的促进细胞增殖，对治疗胃溃疡、十二指肠球部溃疡及促进创面的愈合有明显的疗效;下面简单叙述本专利技术中分子量的乳猪胸腺蛋白的制备工艺。首先，选用40-60天猪龄的健康乳猪的胸腺，拔除胸腺上的脂肪组织，在尽可能短的时间和低温条件下将胸腺高速捣碎成匀浆，将捣碎后的匀浆的温度保持在80-90℃下保持10-30分钟，然后，离心分离去沉淀，对上清液进行二次透析截留分子量3-5万道尔顿的胸腺蛋白。上述实例是用来说明本专利技术工艺，而不是用来限制本专利技术，类似的方法都在本专利技术的范畴之内。附图说明图1是不同浓度的水溶性中分子量动物胸腺提取物对内皮细胞(EC)的增殖状况。图2是不同浓度的中分子量动物胸腺提取物对小鼠3T3成纤维细胞(FC)的增殖状况。图3是水溶性中分子量动物胸腺提取物、成猪胸腺蛋白(TP)、胸腺肽注射液(TF)、肝细胞生长素注射液(HGF)对内皮细胞的增殖效应。图4是水溶性中分子量动物胸腺提取物、成猪胸腺蛋白(TP)、胸腺肽注射液(TF)、肝细胞生长素注射液(HGF)对成纤维细胞的增殖效应。图3、图4中1是水溶性中分子量动物胸腺提取物、2是成猪胸腺蛋白(TP)、3是胸腺肽注射液(TF)、4是肝细胞生长素注射液(HGF);方框中空白是试样，阴影为对照。图5是本专利技术所述的水溶性中分子量动物胸腺提取物单独或和其它药物组合以及本专利技术所述的水溶性中分子量动物胸腺提取物不同剂量互相或和盐水对照下愈合率的比较;图6、7是水溶性中分子量动物胸腺提取物在不同条件下的高效液相色谱图;本专利技术提取的中分子量乳猪胸腺提取物(TP)经高效液相色谱分析共有6个组份峰、6条电泳带，在波长200-340nm的紫外扫描中，本专利技术的胸腺提取物在280nm有一主要吸收峰，仍属一组中分子蛋白类物。本专利技术所述的中分子量乳猪胸腺提取物经用内皮细胞(EC)，小鼠3T3成纤维细胞(FC)连续增殖传代培养研究发现存在着一组能明显促进内皮细胞(EC)，小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖效应的活性组份，而且出现增殖效应与乳猪胸腺提取物最佳浓度相关的现象。将上述方式制备的水溶性中分子量动物胸腺提取物进行各项试验，具体内容如下。样品包括中分子量动物胸腺提取物;胸腺肽注射液(TF)，由广东省生物制品研究所提供;促肝细胞生长素注射液，由广东省阳江制药厂提供。内皮细胞(EC)的制备与在先专利相同。传代培养时，用D-Hanks＇液轻洗细胞单层2-3遍。用0.06%胰蛋白酶在室温下消化1-2分钟，弃消化液，加入内皮细胞培养液，用吸管吹打20-30次，制成细胞悬液。以1∶2-3比率传代。用于实验的为2-3代细胞，经V因子相关抗原(VR.Ag)的抗体检测，确认为血管内皮细胞后方作为生物效应测定用细胞。小鼠3T3成纤维细胞(FC)由第一军医大学珠江医院提供(培养基为1640培养基加20%小牛血清)。本专利技术的动物胸腺提取物生物效应测定和CN92105643.5相同，即将各检测样品(胃安素口服液、成年猪胸腺蛋白、胸腺肽注射液(TF)、肝细胞生长素注射液(HGF)，按不同浓度(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml)分别加入3孔细胞中平行检测。每份样品设立3孔空白对照(与盐水做对照)。不同浓度的中分子量动物胸腺提取物对内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖状况见图1，图2。图1、图2提示，本专利技术的水溶性中分子量动物胸腺提取物对内皮细胞、小鼠3T3成纤维细胞均有明显的促增殖生物效应，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01)，而且增殖效应与水溶性中分子量乳猪胸腺蛋白的最佳浓度有关(0.2mg-0.4mg/ml)。各种不同检测样品对内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖效应的影响比较，结果见图3，图4。图3、4表明本专利技术的水溶性中分子量动物胸腺提取物有明显促进内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖的作用;而成年猪胸腺蛋白、胸腺肽注射液(TF)、促肝细胞生长素注射液(HGF)三种被检样品均无明显促内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖活性，与对照组比较无明显差异(P＞0.05);另外，促肝细胞生长素注射液(HGF)对内皮细胞(EC)虽然有低水平的刺激现象，但与水溶性中分子量动物胸腺提取物相比仍有显著性差异，与成年猪胸腺蛋、胸腺太注射液(TF)结果比较无明显意义。说明其中确存在着一组能提高内皮细胞(EC)、小鼠3T3成纤维细胞(FC)增殖的活性组份。正如图6、7以及相应的表1和表2中所给出的数据，本专利技术述的水溶性中分子量动物胸腺提取物经高效液相色谱分析共有6个组份峰、6条电泳带，这是在波长261nm的条件下测定的六个主要吸收峰;其具体测定值见表1、2，图谱见图6、7。表1对本专利技术胸腺提取物组份分析(图谱见图6)9310:30:23No.RTMatchAreaLefttimeRighttime261nmtimePeakPurePeakPurePeakPure12.7133.560.3327710.1116831.972.634.792.7925.1475.210.0387920.0291754.794.986.075.2736.4583.290.0092980.0077446.106.236.956.6647.5958.500.0586970.0343376.957.469.147.75610.1399.940.0010070.0010079.789.8110.5310.53711.4310.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水溶性中分子量动物胸腺提取物，它是从乳猪（或其它哺乳动物）胸腺中提取出的一组具有的生物活性并可明显促进内皮细胞、成纤细胞生长的分子量为３～５万道尔顿的水溶性胸腺蛋白；另外，本专利技术所述的胸腺提取物还含有多种微量元素和氨基酸，本专利技术所述胸腺提取物的高效液相色谱在波长２６１ｎｍ的条件下分析共有６个主要吸收（组份）峰、６条电泳带；水溶性中分子量动物胸腺提取物在波长２８０ｎｍ的紫外扫描中有一主要吸收峰；。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈光明，谢汝锦，杨富强，王东晓，张宜俊，黄英，邵岩，
申请(专利权)人：通化欣洛维药业有限公司，
类型：发明
国别省市：22[中国|吉林]