成纤维细胞生长因子-10制造技术

本文公开了人ＦＧＦ－１０多肽的编码，这种ＦＧＦ－１０多肽的ＤＮＡ（ＲＮＡ）；提供了经重组技术产生这种多肽的方法；也公开了用这种多肽刺激血管形成以治疗伤口和防止神经损伤的方法；还公开了针对这种多肽的拮抗剂和其作为治疗剂在阻止异常细胞增殖、血管过多疾病和上皮透镜状细胞增殖上的用途；还公开了检测ＦＧＦ－１０编码序列中的突变和得自宿主的样品中的ＦＧＦ－１０蛋白质浓度改变的诊断方法。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新鉴别的多核苷酸、由这些核苷酸编码的多肽、这些多核苷酸和多肽的用途以及产生这些多核苷酸和多肽的方法。具体地说，本专利技术的多肽是成纤维细胞生长因子-10/肝素结合生长因子-10，此后称作“FGF-10”。本专利技术也涉及抑制这些多肽的作用。成纤维细胞生长因子是以结合肝素为特征的一族蛋白质，因此也称作肝素结合生长因子(HBGF)。这些蛋白质不同成员的表达在各种组织中发现，并且在特定时序和空间控制下。这些蛋白质是各种中胚层源细胞、外胚层源细胞、内胚层源细胞(包括成纤维细胞、角膜和血管内皮细胞、粒细胞、肾上腺皮质细胞、软骨细胞、成肌细胞、血管平滑肌细胞、透镜状上皮细胞、黑素细胞、角化细胞、少突神经胶质细胞、星形细胞、成骨细胞和红细胞生成素细胞。每一成员具有与其它成员共有的功能，也具有其独特的功能范围。除了刺激血管内皮细胞增殖的能力外，FGF-1和2两者都是内皮细胞趋化性的，并且FGF-2已表现出能使内皮细胞透过基膜。与这些性质相适应，FGF-1和2两者均具有刺激血管生成的能力。这些生长因子的另一个重要特征是它们促进伤口愈合的能力。许多FGF族的其它成员都表现出与FGF-1和2类似的活性(如促进血管生成和伤口愈合)。FGF基团族的几个成员已表现出诱导中胚层形成的调节神经细胞、脂肪细胞和骨赂肌细胞分化的性质。与普通组织中的这些生物学活性不同，FGF蛋白质在其表达失调时作为转化蛋白质通过促进肿瘤血管化，与增加癌和肉瘤发生有关。FGF族目前由8种结构相关多肽组成。各自的基因已被克隆和测序。两个成员FGF-1和FGF-2已用许多名称说明特征，但最常见的是分别称为酸性和碱性成纤维细胞生长因子。普通基因产物影响大多数中胚层和神经外胚层来说细胞的总的增殖能力。它们能够诱导体内血管生成并且在早期发育中可起重要作用(Burgess，W.H.and Maciag，T.，Annu.Rev.Biochem.，58575-606(1989))。已通过基因转移将编码分泌形式FGF-1和真核表达载体引入到猪动脉中。这一模型确定了体内动脉壁中的基因功能。在基因转移21天后，FGF-1的表达在猪动脉中诱导内膜增厚(Nabel，E.G.，etal.，Nature，362844-6(1993))。也已进一步说明，碱性成纤维细胞生长因子可以调节神经胶质瘤的生长和发展而与其在肿瘤发生中的作用无关，并且对这些作用来说可能需要碱性成纤维细胞生长因子释放或分泌(Morrison，R.S.，et al.，J.Neurosci.Res.，34502-9(1993))。成纤维细胞生长因子(例如碱性FGF)还与Kaposis肉瘤细胞体外生长有关(Huang，Y.Q.，et al.，J.Clin.Invest.，911191-7(1993))。编码人碱性成纤维细胞生长因子的cDNA序列也已克隆到波噬菌体T7RNA聚合酶识别的转录启动子的下游。如此获得的碱性成纤维细胞生长因子已表现出促细胞分裂纤维蛋白溶酶兑激活剂合成和血管生成试验中不可区分于人胎盘成纤维细胞生长因子的生物学活性(Squires，C.H.，et al.，J.Biol，Chem.，26316297-302(1988))。US 5,155,241公开了基本上纯的哺乳动物碱性成纤维细胞生长因子和它们的产生方法。也公开了牛和人碱性成纤维细胞生长因子的氨基酸序列以及编码牛物种多肽的DNA序列。本专利技术的多肽已被推断性地鉴别为FGF族的成员之一，这是氨基酸序列同源于FGF族其它成员的结果。本专利技术的一个方面提供了新的成熟的多肽(它们是FGF-10)以及其生物学活性的，诊断或治疗上有用的片段、类似物和衍生物。本专利技术的多肽是人来源的。本专利技术的一个方面提供了编码人FGF-10的分离的核酸分子，包括mRNA、DNA、cDNA、基因组DNA以及其反义类似物和其生物学活性的诊断或治疗上有用的片段。本专利技术的另一方面提供了经重组技术产生这种多肽的方法，所述重组技术经采用重组载体(如重组产生FGF-10蛋白质中有用的克隆和表达质粒)以及包含人FGF-10核酸序列的重组原核和/或真核宿主细胞。本专利技术的另一方面提供了为治疗目的(如促进创伤、烫伤和溃疡愈合以防止神经紊乱引起的神经损伤，并防止皮肤老化和头发脱落)使用这种多肽或编码该多肽的多核苷酸的方法。本专利技术的另一方面提供了针对这些多肽的抗体。本专利技术的另一方面提供了针对这些多肽的拮抗剂，该拮抗剂可以用于在例如治疗肿瘤和血管过多疾病中抑制这种多肽的作用。本专利技术的另一方面提供了包含长度足以特异性杂交到人FGF-10序列上的核酸分子的核酸探针。本专利技术的另一方面提供了检测与FGF-10核酸序列突变或由该序列编码的多肽的过度表达相关的疾病或疾病易感性的诊断试验方法。本专利技术的再一方面提供了为了体外与科学研究、DNA合成和DNA载体制造相关的目的使用这些多肽或编码这些多肽的多核苷酸的方法。从本专利技术的阐述，本领域技术人员会清楚本专利技术的各个方面。下列附图仅意在说明本专利技术的特定的实施方案，无意于以任何方式限制本专利技术。附图说明图1描绘了FGF-10的cDNA序列和相应的推定的氨基酸序列。所示的氨基酸序列代表蛋白质的成熟形式。使用了氨基酸的标准单字母缩写词。当试图确定多核苷酸序列时，测序不精确性是常见的问题。用373自动化DNA序列测定仪(Applied Biosystems，Inc.)完成测序。测序准确度预计大于97％。图2说明FGF-10和其它FGF族成员之间的氨基酸序列同源性，保守氨基酸用粗体表示。图3表示FGF-10蛋白质体外转录/转译后的SDS-PAGE凝胶。本专利技术的一方面提供了分离的核酸分子(多核苷酸)，该核酸分子编码具有图1的推定的氨基酸序列(SEQ ID NO.2)的成熟多肽或编码由1994年3月4日以ATCC75696保藏的克隆的cDNA编码的成熟多肽。最初在得自8周龄早期人组织的cDNA文库中发现了本专利技术的多核苷酸，接着在得自人扁机体的文库中发现全长cDNA。其结构上与成纤维细胞生长因子基因族的所有成员相关，含有编码181个氨基酸的多肽的开放读框。在顶端配对物是1)在129个氨基酸骨架内与从脑分离的FGF-9 37％相同的67％序列相似；2)在121个氨基酸区与FGF-7(角化细胞生长因子)36％相同和64％相似；3)在110个氨基酸骨架内与FGF-1(酸性FGF)33％相同和55％相似。此外，在本专利技术的多肽中，FGF/HBGF族特征GXLX(S，T，A，G)X6(D，E)CXFXE(X指任何氨基酸残基；(D，E)指D或E残基；X6指任意的6个氨基酸残基)是保守的。本专利技术的多核苷酸可以是RNA形式或DNA形式，该DNA包括cDNA、基因组DNA和合成DNA。所述DNA可以是双链的或单链的。编码成熟多肽的编码序列可以相同于图1所示的编码序列(SEQ ID NO.1)或保藏克隆的序列，或者作为遗传密码的过剩或简并的结果可以是不同的编码序列，但该序列编码与图1的DNA(SEQ ID NO.1)或保藏的cDNA所编码的相同的成熟多肽。编码图1的成熟多肽(SEQ ID NO.2)或编码由保藏的cDNA编码的成熟多肽的多核苷酸可以包括仅成熟多肽的编码序列；成熟多肽的编码序列和附加编码本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种选自下组的分离的多核苷酸：（ａ）编码具有推断的ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２氨基酸序列的多肽或者该多肽的片段、类似物或衍生物的多核苷酸；（ｂ）编码具有由ＡＴＣＣ７５６９６中包含的ｃＤＮＡ编码的氨基酸序列之多肽或者该多肽的片段、类似物或衍 生物的多核苷酸。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：JS胡，JD高卡尼，
申请(专利权)人：人类基因组科学公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]