具有免疫调节作用的新肽制造技术

具通式（Ⅰ）Ａ－Ｘ－Ｙ－Ｃｙｓ－Ｚ－Ｂ的新肽，及此肽的制备过程及其在制备药物制剂中的应用。这些新肽是优良的免疫调节剂。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一些新肽，一种制备该肽以及一种包含所说肽的药物制剂的方法。本专利技术的多肽是优良的免疫调节剂。
技术介绍
在对一些不同疾病的治疗中长期存在着对新的安全的免疫调节剂的需要，这些疾病包括恶性疾病，自身免疫疾病，哮喘/过敏。现在的免疫调节剂如环孢菌素(Cyclosporin)A和类固醇是很有效的免疫抑制剂，但也存在与剂量相关形式的严重的副作用。对免疫系统具更高特异性，表现更少副作用的新免疫调节剂在治疗发病过程中以一种病理的免疫反应为重要组成部分的疾病时有很大益处。现有技术细胞间的信号很大程度上是通过寡或多肽原理介导的，包括细胞因子，神经肽，激素。这种信号传递的一种可能路径可能包含由胱氨酸残基巯基-二硫键相互作用介导的氧化还原酶活性。这种类型的作用能诱导蛋白质构象的改变最终使信号传到细胞核。以氧化或还原的胱氨酸为基础的氧化还原系统在炎症反应的启始，维持和/或下调控中起重要作用。今天的氧化还原系统特征在于硫氧还蛋白(TR)/硫氧还蛋白还原酶系统(TRR)(Holmgren et al，1989，生物化学杂志，264，13963)和与谷氨硫氧还蛋白(glutaredoxin)/谷胱甘肽还原酶类似系统(Bushweller et al，1992，生物化学，31，9288)和蛋白质二硫键异构酶(PDI)系统(Noiva和Lennarz 1992，J.Biol Chem.267，3553)。TR/TRR系统和相关的氧化还原系统是不同的已知免疫和炎症参数潜在调节剂，如IL＝2Rα-链表达(Espinoz-Adelgado等，1992，免疫学杂志，149，2961)，IFN-γ活性表达的调节(Deiss和Kimchi，1991，科学，252，117)，淋巴细胞的分化和效应物功能(Yodoi和Uchiyama，1992，今日免疫学，13，405-411)，嗜曙红细胞效应物功能的调节(Balcewics et al，1991，免疫学杂志，147，2170)，糖皮质激素受体的活力(Grippo et al，1985，生化杂志，260，93-97)和在怀孕期间免疫反应的调节(Clarke et al，1991，繁殖生育杂志，93，525)。TR的活性位点包含一个Cys-Gly-Pro-Cys-结构域单元(motif)的序列。选定的病毒蛋白如编码人T细胞白血病病毒X区(Shimotohno等，1985，P.N.A.S.82，302-306)和人免疫调控蛋白的基因产物，可能具有与-Cys-Gly-Pro-Cys-结构域单元同源的含半胱氨酸序列。我们认为这些蛋白可能表达氧化还原酶，或是这些酶的底物，也可是作为此活性的抑制剂。上面提到的以富半胱氨酸TR活性位点序列为基础的肽，已经生产并表现出与天然蛋白类似的生物活性。另一个具硫氧还蛋白类活性的含半胱氨酸肽的实例从hFSH-β-(81-95)获得(Grosso等，1991，分子和细胞内分泌学78，163)。在药用组合物中作为免疫调节剂的胸腺体液因子γ2(THF-γ2)类似物的使用在WO，Al，9501182(12，01，95)中有描述。此文献中公开了两个环状类似物Leu-Glu-Cys-Pro-Cys-Phe-Leu(SEQ ID NO34)和Leu-Cys-Ala-Gly-Pro-Cys-Phe-Leu(SEQ ID NO35)；它们不包含在本专利技术中。但是，此文献没有揭示含半胱氨酸序列的活性重要性。我们从病毒结构蛋白如反转录跨膜蛋白p15E和人炎症调控中的蛋白，如TGF-β中选出含半胱氨酸的结构域单元，并用其制备多肽。这些多肽进一步改进以具有最佳免疫调节特性。专利技术概述我们吃惊地发现了一组新的可作为优良免疫调节剂的多肽。本专利技术的肽包含4-15个氨基酸，并可按以下结构通式(I)描述A-X-Y-Cys-Z-B(I)其中X选自Gly，Ala，Ile，Asp，Thr，Ser，Arg或Trp；Y选自Pro，2-哌啶酸(这儿称为Pec)或Ile；Z选自Ile，Phe，Pro，Ala，Tyr或Gly；A为H，保护基团，L-或D-型具有或不具有被保护的侧链官能团和/或N-末端保护的氨基酸，或具有和不具有保护了的侧链官能团和/或N-末端保护的氨基酸序列；B为OH，NH2，保护基团，L-或D-型具有或不具有被保护的侧链官能团并以C-末端酰胺，游离羧基或保护基团为末端的氨基酸，具或不具被保护的侧链官能团并以C-末端酰胺，游离羧基或保护基团为末端的氨基酸序列；并提供通式(I)之外的下列序列Leu-Glu-Cys-Gly-Pro-Cys-Phe-Leu(SEQ ID NO34)，Leu-Cys-Ala-Gly-Pro-Cys-Phe-Leu(SEQ ID NO35)，Tyr-Ile-Pro-Cys-Phe-Pro-Ser-Ser-Leu-Lys-Arg-Leu-Leu-Ile(SEQ ID NO36)，Tyr-Ile-Pro-Cys-Phe-Pro-Ser-Ser-Leu-Lys-Arg-Leu-Ile(SEQ ID NO37)，Ser-Gly-Pro-Cys-Pro-Lys-Asp-Gly-Gln-Pro-Ser(SEQ ID NO38)和Thr-Pro-Pro-Thr-Pro-Cys-Pro-Ser(SEQ ID NO39).A和B的长度可以改变，只要满足相关的长度和可能的氨基酸或其它的取代基的标准即可。本专利技术的氨基酸可以是天然氨基酸，也可是非天然的人工合成的氨基酸或氨基酸类似物。A的保护基团的实施例为各种氨基甲酸酯和酰胺。其中优选下面的保护基团乙酰基(Ac)，9-芴甲基氨基甲酸酯(Fmoc)，1-甲基-1(4-联苯基)乙基氨基甲酸酯(Bpoc)，三苯甲基(Trt)，烯丙基氨基甲酸酯(Alloc)和叔丁基氨基甲酸酯(Boc)，特别优选的A的保护基是乙酰基(Ac)，9-芴基氨基甲酸酯(Alloc)和叔丁基氨基甲酸酯。B的保护基团实施例为各种酯，如C1-C6烷基，烯丙基，金刚烷基，苄基和叔丁基。按通式(II)，(III)和(IV)的同源二聚体也包含在本专利技术范围内。 也就是本专利技术具通式(I)的肽的同源二聚体。具通式(I)，(II)，(III)和(IV)的肽的药学上可接受的盐也在本专利技术范围内。具通式(I)包含几个半胱氨酸残基的肽可以以氧化和还原形式存在。包含分子内二硫键的氧化形式产生氧化的单体，而分子间二硫键则导致具通式(I)的肽形成头对头和头对尾的二聚体。本专利技术优选的肽是具通式(I)，(II)，(III)和(IV)的肽，其中X是Gly，Y是Pro和Z是Ile；X是Gly，Y是Pro和Z是Gly；X是Ala，Y是Pro和Z是Ala；X是Ile，Y是Pro和Z是Tyr；X是Ala，Y是Pro和Z是Ile；X是Arg，Y是Pro和Z是Ile；X是Ile，Y是Pro和Z是Ile；X是Asp，Y是Pro和Z是Ile；X是Trp，Y是Pro和Z是Ile；X是Trp，Y是Pro和Z是Gly；X是Gly，Y是Ile和Z是Ile；X是Gly，Y是Pec和Z是Ile；X是Thr，Y是Pro和Z是Tyr；X是Thr，Y是Pec和Z是Phe；X是Ala，Y是Pro和Z是Phe；X是Ser，Y是Pro和Z是Phe；X是本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含根据通式（Ⅰ）的４－１５个氨基酸Ａ－Ｘ－Ｙ－Ｃｙｓ－Ｚ－Ｂ （Ⅰ），和其同源二聚体（Ⅱ），（Ⅲ）和（Ⅳ）的肽，＊＊＊其中Ｘ选自Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ａｓｐ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ａｒｇ或Ｔｒｐ；Ｙ选自Ｐｒｏ，Ｐｅ ｃ或Ｉｌｅ；Ｚ选自Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｔｙｒ或Ｇｌｙ；Ａ为Ｈ，保护基团，Ｌ或Ｄ型有或无保护的侧链官能团和／或Ｎ－末端保护的氨基酸，或有或无保护了的侧链官能团和／或Ｎ－末端保护的氨基酸序列；Ｂ为ＯＨ，ＮＨ↓［２］，保护 基团，Ｌ或Ｄ型有或无保护的侧链官能团并以Ｃ－末端酰胺，游离羧基或保护基团为末端的氨基酸，或有或无保护的侧链官能团并以Ｃ－末端酰胺，游离羧基或保护基团为末端的氨基酸序列；前提是下面的序列排除在通式（Ⅰ）之外：Ｌｅｕ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｇ ｌｙ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ∶３４），Ｌｅｕ－Ｃｙｓ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ∶３５），Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ －Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ∶３６），Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｈｅ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ∶３７），Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｃ ｙｓ－Ｐｒｏ－Ｌｙｓ－Ａｓｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ∶３８）和Ｔｈｒ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｔｈｒ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ∶３９）；只要满足相应的长度和可能的氨基酸的标准，Ａ和Ｂ 的长度可以变化；和其中通式（Ⅰ），包含数个半胱氨酸残基的肽可以以氧化或还原形式存在，而且含分子内二硫键的氧化形式产生氧化形单体，而分子间二硫键则产生具通式（Ⅰ）肽的头对头和头对尾二聚体，以及具通式（Ⅰ），（Ⅱ），（Ⅲ），（Ⅳ）的肽的药学 上可接受的盐。...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：H伯格斯特兰，T艾力克森，K卡拉比尔列斯，M林德威尔，B沙恩斯特兰，
申请(专利权)人：阿斯特拉公司，
类型：发明
国别省市：SE[瑞典]