用KGF治疗糖尿病的方法技术

本发明专利技术公开一种用角化细胞生长因子治疗哺乳动物糖尿病的方法和药物组合物。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利
本专利技术涉及应用角化细胞生长因子治疗或预防糖尿病发生。本专利技术背景角化细胞生长因子(KGF)是上皮细胞特异性的生长因子，是首先在人胚胎肺成纤维细胞细胞系的条件培养基中鉴定的。Rubin等人，美国科学院院报(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)86802-806(1989)。已经在数种来源于不同发育阶段的上皮组织的基质成纤维细胞细胞系中检测了KGF信使RNA的表达，在从正常成年肾和胃肠道器官提取的RNA中，KGF的转录本也很明显。Finch等人，科学245752-755(1989)。KGF是从培养基中的成纤维细胞分泌而在体内则是在真皮而不是表皮体内表达，这一证据表明，KGF可能是角化细胞增殖的重要正常旁分泌效应子。研究已经表明在刺激组织培养基中初级或次级人角化细胞增殖方面，KGF的作用与EGF一样强 Marchese等人，细胞生理学杂志(J.Cell.Phys.144326-332(1990))。在正常成年动物的体外和体内研究表明，在毛囊形态形成，肝细胞增殖，以及肺、乳腺、胰腺、胃、小肠和大肠上皮细胞增殖方面，KGF的作用有所不同。Panos等人，临床研究杂志(J.Clin.Invest.92969-977(19930)；Ulich等人，美国病理学杂志(Am.J.Path.144862-868(1994)；Yi等人美国病理学杂志(Am.J.Path.14580-85(1994))；以及Ulich等人，临床研究杂志(J.Clin.Invest.931298-1306(1993))。尚未详细研究KGF在胚胎或新生儿发育中的作用，已经有文献表明KGF是新生小鼠精囊发育中的重要介导物。Alarid等人，P.N.A.S.911074-1078(1994)。公开的PCT专利申请WO 90/08771描述了从人胚胎成纤维细胞细胞系的条件培养基中纯化KGF，纯化KGF的部分氨基酸序列，基因的克隆，以及在菌细胞中表达所述基因以产生有生物活性的重组KGF。前述的文献公开了可以用KGF或KGF样多肽作为烧伤伤口的创伤愈合剂或刺激移植的角膜组织。事实上，已经证明，当将重组KGF局部应用于大鼠耳或猪皮肤上外科手术诱发的伤口时，KGF可促进上皮再生并使上皮厚度增加。Pierce等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.179831-840(1994))；和Staiano-Coico等人，实验医学杂志(J.Exp.Med.178865-878(1993))。专利技术概述已经发现KGF可用于治疗称为糖尿病的内科病。附图说明图1是柱形图，说明在7天内，每天以5mg/kg体重(mg/kg)的剂量皮下施用后，KGF在大鼠中的作用。在KGF治疗开始后2天，单次静脉内施用链脲菌素(55mg/kg)。在图的右半侧表示KGF治疗的糖尿病大鼠，标注为“Strep+KGF”。在其左右为三个对照组用氯化钠溶液治疗7天没有糖尿病诱发(“NaCl”)，在链脲菌素诱发糖尿病之前或之后用氯化钠溶液治疗7天(“Strep”)，用KGF治疗7天，没有糖尿病诱发(“KGF”)。在纵轴上表示每分升以mg表示的未禁食的血葡萄糖水平，是在诱发糖尿病的第5天(即开始KGF或氯化钠治疗后的第7天)测量的。每组有4只大鼠。图2是柱形图，说明根据与糖尿病有关的其它生理学测量数据，在相同大鼠模型中KGF的作用。在纵轴上左、右分别表示在KGF或氯化钠治疗的第7天的24小时内排出的禁食尿葡萄糖水平(以mg/dl计)和禁食排出的尿ml数。标注(“NaCl”，“Strep”，“Strep+KGF”，“KGF”)与图1中的意思相同。每组有4只大鼠。图3表示在诱发糖尿病后的8天期间，在相同糖尿病大鼠模型中，每天未禁食的血葡萄糖水平(以mg/dl计)。在诱发糖尿病后一天开始，一些动物每天用KGF皮下给药(3mg/kg)治疗(Strep+KGF)，其余的用氯化钠溶液进行预治疗和后治疗(pre-and Post-treated)，作为对照(“Strep+NaCl”，)。还用氯化钠治疗的非糖尿病组的动物(“NaCl”)作为另外的对照。每组有6只大鼠。图4表示在诱发糖尿病后的6天内，在相同大鼠模型上，禁食条件下的尿葡萄糖水平(以mg/dl计)，在这种情况下，从诱发疾病后的第2天开始。KGF治疗从诱发糖尿病后的1天开始。图中的符号意思与图3中的相同。每组有6只大鼠。图5表示每24小时的尿排出量，以ml数表示，试验组与图3和4中的试验组相同，在诱发糖尿病后的第2、5和8天测量。图中的符号意思与图3中的相同。每组有6只大鼠。图6表示在该试验中每组大鼠的平均水摄取量。大鼠饮水不限，将饮水量以24小时内饮用的ml数表示。每组有6只大鼠。图7说明KGF类似物对由链脲菌素诱发的Sprague-Dawley大鼠糖尿病的作用。图8是天然KGF的核苷酸(SEQ ID NO1)和氨基酸序列(SEQID NO2)(给编码天然KGF的成熟形式的核苷酸用SEQ ID NO1的201-684位碱基表示，KGF的成熟形式则用SEQ ID NO2的32-194位氨基酸残基表示。本专利技术的详细描述用具有天然多肽的某些或所有生物学特性的任何形式的角化细胞生长因子均可实施本专利技术的方法。所述形式包括从生物体液、细胞和组织中分离并纯化的，或用化学合成或通过在已经用编码DNA或RNA转化的异源宿主细胞中表达的重组方法而得到的。在前文提到的WO90/08771中描述了用于生产角化细胞生长因子的重组方法。本领域专业人员熟知的其它方法也适用于相同的目的。作为实例，可以将编码KGF蛋白质的核苷酸序列或其部分序列插入到适宜的表达载体，即含有插入蛋白质编码序列之转录和翻译所必需的元件的载体中。也可以由天然KGF基因和/或其连接区提供必需的转录和翻译信号。可以用各种宿主-载体系统以表达蛋白质编码序列。这些包括但不限于用病毒(痘病毒，腺病毒等)感染的哺乳动物细胞系统；用病毒(如棒状病毒)和诸如含酵母载体的酵母或用噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA转化的细菌这样一些微生物感染昆虫细胞系统。这些载体的表达元件其长度和特异性可以有所不同。根据所用的宿主-载体系统，可以采用多种适宜的转录和翻译元件中的任何一种。可以使用任何以前描述的将核苷酸片段插入到载体中的方法，以构建含嵌合基因的表达载体，所述嵌合基因由适宜的转录/翻译控制信号和蛋白质编码序列组成。这些方法可包括体外重组DNA和合成技术以及体内重组(遗传重组)。用第二个核酸序列可以调节核酸序列编码的KGF蛋白质或肽片段的表达，以便在用重组DNA分子转化的宿主细胞中表达KGF蛋白质或肽。例如，用本领域已知的任何启动子/增强子元件可以控制KGF的表达。可用于控制KGF表达的启动子包括，但不限于，SV40早期启动子区，在劳氏肉瘤病毒3′长末端重复中所含的启动子，疱疹胸苷激酶启动子，金属硫蛋白基因的调节序列，原核表达载体，如β-内酰胺酶启动子，或tac启动子，含胭脂碱合成酶启动子区(Herrera-Estrella等人)的植物表达载体，或花椰菜花叶病毒35S RNA启动子，以及光合酶核酮糖二磷酸羧化酶的启动子，来自酵母或其他真菌的启动子元件，如Gal4启动子，ADC(醇脱氢酶)启动子，PGK(磷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
治疗糖尿病的方法，包括给患有所述疾病的哺乳动物施用治疗有效量的角化细胞生长因子或其类似物。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：SL奥克曼，GF皮尔斯，
申请(专利权)人：安姆根有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]