干热灭菌生物指示剂及其制备方法技术

本发明专利技术属于消毒灭菌中生物监测技术领域，具体涉及一种干热灭菌生物指示剂及其制备方法。干热灭菌生物指示剂由封有菌片的安瓿瓶和装有恢复培养基的塑料管组成，二者独立存在。使用本发明专利技术的干热灭菌生物指示剂进行干热灭菌器灭菌效果的监测，简单方便，操作安全，结果直观准确。

【技术实现步骤摘要】
干热灭菌生物指示剂及其制备方法
本专利技术属于消毒灭菌中生物监测
，具体涉及一种干热灭菌生物指示剂及其制备方法。
技术介绍
随着医学技术的发展，新的医疗器械和医疗材料不断出现，并且人们对健康的认识水平不断提高。在医院日常工作中，各种器械均需要消毒灭菌，灭菌效果监测合格后方能使用。干热灭菌技术利用电加热产生的高温干热空气作为杀菌因子，对微生物进行氧化、蛋白质变性以及电解质浓缩，使微生物死亡。在新的医院消毒供应中心管理规范中明确规定，干热灭菌设备应每周对其灭菌效果进行一次生物检测。在灭菌程序的验证中，尽管可通过灭菌过程某些参数的监控来评估灭菌效果，但干热生物指示剂则是评价一个灭菌程序有效性最直观的指标。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种干热灭菌生物指示剂，使用简便，结果易于观察，对干热灭菌器的灭菌性能进行更好的监测；本专利技术同时提供了干热灭菌生物指示剂的制备方法，科学合理、简单易行。本专利技术所述的干热灭菌生物指示剂是由封有菌片的安瓿瓶和装有恢复培养基的塑料管组成，二者独立存在。所述的菌片是由指示微生物和染菌载体组成。所述的指示微生物为枯草杆菌黑色变种芽孢(ATCC9372)。所述的染菌载体为玻璃纤维滤纸GF/F级。所述的安瓿瓶为蓝点曲颈易折安瓿瓶。安瓿瓶需经过热融封完全封闭，确保菌片保存时处于无菌环境，同时在灭菌时有效灭菌因子能够与菌片接触。所述的恢复培养基的组成如下，以质量体积百分比计，质量以g计，体积以mL计：所述的恢复培养基的制备方法是将胰蛋白胨、大豆蛋白胨和氯化钠加入到蒸馏水中，混合均匀完全溶解，调节pH7.2，经121℃灭菌后，即得。所述的塑料管为PET冷冻管。本专利技术所述的干热灭菌生物指示剂的制备方法，步骤如下：(1)指示微生物培养，芽孢悬液收集；(2)染菌载体上滴染芽孢悬液，干燥待用，得到菌片；(3)将菌片放于安瓿瓶内部，进行热融封；(4)恢复培养基称量配制；(5)恢复培养基灭菌后，在生物安全柜内操作，分装于塑料管中，旋紧瓶盖；(6)成品组装，外包装生产。步骤(2)中所述的菌片中菌含量为1×106cfu/片。本专利技术的干热灭菌生物指示剂的制备方法中技术参数见表1。表1干热灭菌生物指示剂的制备方法中技术参数性能要求菌含量菌含量为1×106cfu/片存活时间在温度160℃±4℃条件下，存活时间≥4.9min杀灭时间在温度160℃±4℃条件下，杀灭时间≤19minD值在温度160℃±4℃条件下，D值为1.6～1.9min本专利技术与现有技术相比，具有如下有益效果：(1)使用本专利技术的干热灭菌生物指示剂进行干热灭菌器灭菌效果的监测，简单方便，操作安全，结果直观准确。(2)本专利技术的干热灭菌生物指示剂菌片上的芽孢处于干燥状态，芽孢不会生长，抗力稳定，提高了产品质量。(3)使用本专利技术的干热灭菌生物指示剂，能够避免二次污染的发生。附图说明图1是本专利技术的结构示意图；图中：1、滴染枯草杆菌黑色变种芽孢的菌片；2、安瓿瓶；3、装有恢复培养基的塑料管。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术做进一步描述。以下实施例中的干热灭菌生物指示剂由封有菌片的安瓿瓶和装有恢复培养基的塑料管两部分组成。指示微生物为枯草杆菌黑色变种芽孢，菌片材质为玻璃纤维滤纸GF/F，安瓿瓶为1mL蓝点曲颈易折安瓿瓶，塑料管为1.5mLPET冷冻管。实施例1(一)枯草杆菌黑色变种芽孢培养1.使用250ml锥形瓶配制营养肉汤培养基50mL，121℃灭菌后使用，选取枯草杆菌黑色变种芽孢20ul进行活化，活化时间5h。2.称量药品，配制枯草杆菌黑色变种芽孢生长培养基，每个芽孢瓶中分装250mL，121℃灭菌后室温冷却至固态后使用。3.在生物安全柜中操作，将活化后的枯草杆菌黑色变种芽孢混合，每个芽孢瓶中接种10mL，混荡均匀，使接种液充分接触生长培养基表面后，倾倒出接种液。4.将芽孢瓶放于37℃细菌培养箱中培养48h。5.培养结束后收菌，每个芽孢瓶内加入15mL无菌水，使用L棒刮取芽孢生长培养基表面的芽孢，倾倒于无菌锥形瓶中，重复3次。6.收集到的芽孢悬液进行3000转离心25min，重复4次，离心洗净，使用无菌水溶解最终得到的芽孢沉淀。7.以稀释法对最终芽孢悬液进行菌量计算，放于4℃冰箱保存。(二)枯草杆菌黑色变种芽孢菌片制作1.裁剪菌片，尺寸为3.5mm×20mm，低温灭菌后使用。2.根据第一步菌量计数结果稀释芽孢悬液，浓度为1.0×108cfu/mL，每片菌片滴染10ul，自然干燥过夜或者12h以上。3.干燥好的菌片放于蓝点曲颈易折安瓿瓶内，进行高温热融封。(三)恢复培养基配制干热灭菌生物指示剂恢复培养基的质量体积(g/mL)百分比为：胰蛋白胨1.5％大豆蛋白胨0.5％氯化钠2％蒸馏水配制，混合均匀完全溶解，调节pH7.2，经121℃灭菌后使用。将灭菌后的恢复培养基分装于无菌塑料管中，每管中加入量1.4mL，旋紧瓶盖，防止液体漏出，避免杂菌污染。(四)成品组装，外包装生产。实施例2(一)枯草杆菌黑色变种芽孢培养1.使用250ml锥形瓶配制营养肉汤培养基50mL，121℃灭菌后使用，选取枯草杆菌黑色变种芽孢20ul进行活化，活化时间5h。2.称量药品，配制枯草杆菌黑色变种芽孢生长培养基，每个芽孢瓶中分装250mL，121℃灭菌后室温冷却至固态后使用。3.在生物安全柜中操作，将活化后的枯草杆菌黑色变种芽孢混合，每个芽孢瓶中接种10mL，混荡均匀，使接种液充分接触生长培养基表面后，倾倒出接种液。4.将芽孢瓶放于37℃细菌培养箱中培养48h。5.培养结束后收菌，每个芽孢瓶内加入15mL无菌水，使用L棒刮取芽孢生长培养基表面的芽孢，倾倒于无菌锥形瓶中，重复3次。6.收集到的芽孢悬液进行3000转离心25min，重复4次，离心洗净，使用无菌水溶解最终得到的芽孢沉淀。7.以稀释法对最终芽孢悬液进行菌量计算，放于4℃冰箱保存。(二)枯草杆菌黑色变种芽孢菌片制作1.裁剪菌片，尺寸为3.5mm×20mm，低温灭菌后使用。2.根据第一步菌量计数结果稀释芽孢悬液，浓度为1.0×108cfu/mL，每片菌片滴染10ul，自然干燥过夜或者12h以上。3.干燥好的菌片放于蓝点曲颈易折安瓿瓶内，进行高温热融封。(三)恢复培养基配制干热灭菌生物指示剂恢复培养基的质量体积(g/mL)百分比为：胰蛋白胨2％大豆蛋白胨1.5％氯化钠2.5％蒸馏水配制，混合均匀完全溶解，调节pH7.2，经121℃灭菌后使用。将灭菌后的恢复培养基分装于无菌塑料管中，每管中加入量1.4mL，旋紧瓶盖，防止液体漏出，避免杂菌污染。(四)成品组装，外包装生产。实施例3(一)枯草杆菌黑色变种芽孢培养1.使用250ml锥形瓶配制营养肉汤培养基50mL，121℃灭菌后使用，选取枯草杆菌黑色变种芽孢20ul进行活化，活化时间5h。2.称量药品，配制枯草杆菌黑色变种芽孢生长培养基，每个芽孢瓶中分装250mL，121℃灭菌后室温冷却至固态后使用。3.在生物安全柜中操作，将活化后的枯草杆菌黑色变种芽孢混合，每个芽孢瓶中接种10mL，混荡均匀，使接种液充分接触生长培养基表面后，倾倒出接种液。4.将芽孢瓶放于37℃细菌培养箱中培养48h。5.培养结束后收菌，每个芽孢瓶内加入15mL无菌水，使用L棒刮取芽孢生长培养基表面的芽孢，倾倒于无本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种干热灭菌生物指示剂，其特征在于由封有菌片的安瓿瓶和装有恢复培养基的塑料管组成，二者独立存在。

【技术特征摘要】
1.一种干热灭菌生物指示剂，其特征在于由封有菌片的安瓿瓶和装有恢复培养基的塑料管组成，二者独立存在。2.根据权利要求1所述的干热灭菌生物指示剂，其特征在于所述的菌片是由指示微生物和染菌载体组成。3.根据权利要求1所述的干热灭菌生物指示剂，其特征在于所述的指示微生物为枯草杆菌黑色变种芽孢。4.根据权利要求1所述的干热灭菌生物指示剂，其特征在于所述的染菌载体为玻璃纤维滤纸GF/F级。5.根据权利要求1所述的干热灭菌生物指示剂，其特征在于所述的安瓿瓶为蓝点曲颈易折安瓿瓶。6.根据权利要求1所述的干热灭菌生物指示剂，其特征在于所述的恢复培养基的组成如下，以质量体积百分比计，质量以g计，体积以mL计：7.根据权利要求1所述的干热灭菌生物指示剂，其特征在于所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：田友昊，赵健存，屈道银，
申请(专利权)人：山东新华医疗器械股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37