具有BZ23菌株效力的脑膜炎球菌疫苗制造技术

本发明专利技术涉及药物组合物，它包括（ｉ）具有编码ＴｂｐＢ的ＤＮＡ序列的脑膜炎萘瑟氏球菌菌株的人运铁蛋白受体（ＨＴＲ）的较低分子量的亚单位（ＴｂｐＢ），其中（ｉ）中的ＤＮＡ序列（ａ）含有２个ＡｖａⅡ限制性位点，３个ＨｉｎｃⅡ限制性位点，没有任何ＶｓｐⅠ限制性位点和没有任何ＸｈｏⅠ限制性位点或者（ｂ）借助于通式５’－ＡＡＧＡＣＣＡＡＧＧＣＧＧＡＴＡＣＧＧＴＴＴＴＧＣ－３’的引物Ｐ３和通式为５’－ＧＡＡＧＡＣＧＡＧＴＣＧＧＡＡＡＣＡＡＡＧＧＧＡＴＧ－３’的引物Ｐ４，通过ＰＣＲ（多聚酶链反应）可以从该序列产生７６５到７７５个核苷酸的多聚核苷酸。这样的菌株是例如其ＤＮＡ序列编码显示于ＳＥＱＩＤＮＯ：１的ＴｂｐＢ的ＢＺ８３菌株。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于治疗或预防脑膜炎球菌感染的的新的药物组合物，该组合物含有脑膜炎萘瑟氏球菌菌株ET-5复合体，BZ83菌群的人运铁蛋白受体(HTR)的TbpB(Tbp2)亚单位。总的来说，脑膜炎是病毒来源或细菌来源。主要致病的细菌是脑膜炎萘瑟氏球菌和流感嗜血菌，它们分别涉及约40和50％的细菌脑膜炎患者。在法国脑膜炎萘瑟氏球菌的脑膜炎的记录是每年约600-800患者。在美国，每年的患者数为约2500到3000。根据荚膜多糖的特性脑膜炎萘瑟氏球菌种被亚分为血清群。虽然存在约12种血清群，但是90％的脑膜炎患者归因于3种血清群A，B和C。基于荚膜多糖的有效的疫苗的存在可阻止通过脑膜炎萘瑟氏球菌血清群A和C引起的脑膜炎。这些多糖对于2岁以下的儿童没有或较少显示免疫原性并且不诱导免疫记忆。但是，这些缺点可以通过将这些多糖与载体蛋白结合而克服。相反，不论是否是结合形式，脑膜炎萘瑟氏球菌B菌群的多糖对于人没有或几乎没有显示免疫原性。因此，特别希望找到抗由脑膜炎萘瑟氏球菌诱导的脑膜炎的疫苗，特别是基于血清群B而不是多糖的疫苗。为此，已经有人提出脑膜炎萘瑟氏球菌的外膜有不同的蛋白质。在该方面，对于人的运铁蛋白的受体引起特别的关注。总的来说，大多数的细菌的生长需要铁，并且它们已经生长出获得该金属的特异性系统。特别是对于脑膜炎萘瑟氏球菌，它是人的严格病原体，仅仅从人铁运输蛋白质例如运铁蛋白和乳铁蛋白获取铁，因为游离形式的铁的量在人体中是微不足道的(为10-18M的级别)，无论如何不足以允许细菌的生长。因此，脑膜炎萘瑟氏球菌具有人运铁蛋白的受体和人乳铁蛋白的受体，使之能够固定这些铁螯合蛋白质并且此后摄取其生长所需要的铁。脑膜炎萘瑟氏球菌菌株B16B6的人运铁蛋白受体已经由Schryvers等人从膜提取物中纯化(WO90/12591)。据认为纯化的该蛋白质基本上由2种类型的多肽组成具有高表观分子量(100千道尔顿)的多肽和具有较低表观分子量(约70千道尔顿)的多肽，如在SDS存在下经过聚丙烯酰胺凝胶电泳之后看到的。为了本专利申请的需要，特别是由Schryvers等人纯化的产物经随意定义被称之为人运铁蛋白受体(HTR)，和作为亚单位构成它的多肽。在下面的文章中，高分子量和较低分子量的亚单位分别被称之为TbpA(Tbp1)和TbpB(Tbp2)。自从Schryvers等人的先行研究以来，已经发现了脑膜炎萘瑟氏球菌种基本上被划分为相应的HTRs结构不同的2个菌株类型(WO93/6861和WO93/7172)。被称之为M982(或IM2169)的第一个类型的菌株具有与抗M982菌株的HTR的抗血清反应，但是与抗B16B6(或IM2394)菌株的HTR的抗血清不反应的TbpB；而称之为B16B6的另一个类型具有与抗B16B6(或IM2394)菌株的HTR的抗血清反应，但是与抗M982菌株的HTR的抗血清不反应的TbpB。因此在较低分子量的亚单位的水平存在抗原性的差别。但是该差别有限，因为与Griffiths等人，FEMS微生物通信(1990)6931提出的相反，被降低到2个主要类型。例如类型M982菌株是M982菌株，在专利申请EPA586266中描述了该菌株tbpB基因的序列并且在EMBL数据库中参考登记号为Z15130；菌株6940，M978和S3032具有(sic)5’tbpB基因的序列已经在WO95/33049描述；菌株BZ83和8680的tbpB基因的序列已经分别在WO95/33049和WO97/13860描述；(这些序列也存在于EMBL数据库，相应的登记号Z50732和Y09977)；或还有菌株32/94和8710其序列存在于EMBL数据库，相应的登记号为Y09617和Y09618。这些菌株以及其它菌株可以从与挪威Oslo的国家公共卫生研究院，世界健康组织合作的脑膜炎球菌保藏中心，Caugant博士处获得(参见1995年10月10日由Bachra Rokbi提交的Claude Bernard大学-lyonI之前提交的博士论文，名称为“Etude de la variabilitéantigéniqueet molěculaire du récepteur de la transférrine humainne de N.meningitidis”(脑膜炎萘瑟氏球菌的人运铁蛋白受体的抗原性和封阻剂变化的研究))。下面的表IV中提供了菌株的特性。编码B16B6菌株的TbpB的DNA的序列描述于EPA586266。编码各个TbpBs的DNA片段的研究已经显示根据其起源的类型片段的大小不同。这可能对最初由WO93/6861提供的对M982和B16B6类型的定义进行了改变。根据TbpB基因的大小定义菌株类型目前是合适的对于类型M982的TbpB约2.1-2.3千碱基和对于类型B16B6的TbpB约为1.8千碱基。蛋白质TbpB，而不是Tbp1具有可以成为潜在的候选疫苗的许多特性普遍的表达，在微生物表面的进入性，诱导细菌抗体的能力和有限的可变性，因为如已经说明的，目前已经鉴定了两个主要的菌群。借助于该发现，已经有人建议了药物组合物，它含有(i)B16B6类型的至少一个菌株的HTR和M982类型的至少一个菌株的HTR(WO93/6861)；或(ii)B16B6类型的至少一个菌株的TbpB或M982类型的至少一个菌株的TbpB(WO93/7172)。在世界范围内收集引起脑膜炎患者的菌株(单独的或流行病例)，对其研究并且基于各种标准进行划分。广泛使用的第一个方法分别基于荚膜多糖水平，2/3类型的外膜蛋白质和1类型外膜蛋白的抗原性的不同将脑膜炎球菌划分为血清群，血清型或血清亚型。此分类借助于单克隆抗体来进行。例如，将菌株M982划分为血清群B，血清型9，亚血清型P1.9(B9P1.9)。国际通用的另一个分类方法是基于某些代谢酶的电泳迁移率。这是MLEE(多位点电泳酶)，由Olyhoek等人，“萘瑟氏球菌病原体”，(1985)，SchoolnickG.K.(美国微生物学会)530；Caugant等人，微生物遗传杂志(1986)132641；Selander等人，环境微生物应用(1986)51873；Caugant等人，遗传学(1981)98464；Caugant等人，PNAS(1986)834931描述了该酶的用途。总的来说，分析了下面的15个酶苹果酸酶(MAE)，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6P)，肽酶(PEP)，异柠檬酸脱氢酶(IDH)，依赖于磷酸烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的谷氨酸脱氢酶(GD1和GD2)，醇脱氢酶(ADH)，延胡索酸酶(FUM)，碱性磷酸酶(ALK)，靛酚氧化酶(IP1和IP2)，腺苷酸激酶(ADK)和脱氢酶(UDH)。各种酶的电泳形态(或异型酶)对应于类似遗传座位的等位基因。这15种酶的等位基因的特异性结合构成了一种电泳类型(ET)。这些类型可以划分为族或复合体(群)。例如，ET-5复合体由非常紧密连接(最大遗传距离.16)的22个电泳类型组成。在下面的表中，指明了EF-5电泳类型的菌株的等位基因分布(对于15种酶的每一种指明了每个座位的等位基因数目)。在黑体指示其等位基因(一个或多个)在ET-5复本文档来自技高网...

【技术保护点】
药物组合物，它包括（ｉ）具有编码ＴｂｐＢ的ＤＮＡ序列的脑膜炎萘瑟氏球菌菌珠的人运铁蛋白受体（ＨＴＲ）的较低分子量的亚单位（ＴｂｐＢ），或（ｉｉ）所述的ＴｂｐＢ的片段，其中（ｉ）中的ＤＮＡ序列（ａ）含有２个ＡｖａⅡ限制性位点，３个ＨｉｎｃⅡ限制性位点，没有任何ＶｓｐⅠ限制性位点和没有任何ＸｈｏⅠ限制性位点或者，优选的是（ｂ）借助于通式５’－ＡＡＧＡＣＣＡＡＧＧＣＧＧＡＴＡＣＧＧＴＴＴＴＧＣ－３’的引物Ｐ３和通式为５’－ＧＡＡＧＡＣＧＡＧＴＣＧＧＡＡＡＣＡＡＡＧＧＧＡＴＧ－３’的引物Ｐ４，通过ＰＣＲ（聚合酶链式反应）可以从该序列产生７６５到７７５个核苷酸，优选的是７７２个核苷酸（ＢＺ８３组群的菌株）的多聚核苷酸。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：MJ昆廷米列特，B洛克比，
申请(专利权)人：巴斯德梅里厄血清及疫苗公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]