一种高菌量乳酸菌制剂及其制备方法与应用技术

一种高菌量乳酸菌制剂及其制备方法与应用，涉及水产养殖。高菌量乳酸菌制剂含有植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌等中的至少一种；所述植物乳杆菌含量占总菌数百分比50％～60％；所述嗜酸乳杆菌含量占总菌数百分比40％～50。将植物乳杆菌发酵液和嗜酸乳杆菌发酵液按比例均匀混合即可；混合后可加入维生素C，低聚果糖、甘露醇等中的至少一种作为保护剂。当所述高菌量乳酸菌制剂的存在形式为微生物菌粉与固体辅料的混合物时，制备方法如下：将植物乳杆菌发酵液和嗜酸乳杆菌发酵液混合，加入添加剂，浓缩冻干，添加固体辅料制成片剂、散剂、粉剂等。所述高菌量乳酸菌制剂可在制备防治对虾病害、对虾生长促进剂、饲料添加剂、水质净化剂等中应用。

【技术实现步骤摘要】
一种高菌量乳酸菌制剂及其制备方法与应用
本专利技术涉及水产养殖，尤其是涉及一种高菌量乳酸菌制剂及其制备方法与应用。
技术介绍
在水产养殖中，微生态制剂作为抗生素的替代品，一方面通过有益微生物降解养殖环境的氨氮、亚硝酸盐、硫化氢、饵料残渣、粪便排泄物等净化水质，为养殖动物营造一个良好的水体环境，防止病原菌滋生；另一方面，通过有益微生物产生代谢产物和活性物质如有机酸、抗菌肽等来抑制或者杀灭病原菌，同时提高养殖动物免疫力和抵抗力，达到防治病害的目的；再者有益微生物通过产生多种消化酶，帮助蛋白质、碳水化合物、脂肪代谢、提高饲料的利用率和转化率，达到减少资源消耗和增产的目的。乳酸菌作为常见微生态益生菌的一种，可通过大量产生有机酸、酶、细菌素等生物活性物质抑制病原菌的繁殖与定植，可维持养殖动物肠道内微生态平衡与正常的生理功能。乳酸菌是定植在动物肠道内的有益菌群，以乳酸菌为代表的专性厌氧菌群是构成定植抗力的主要力量(定植抗力指宿主对致病菌和潜在致病菌在正常微生物群中繁殖和定植的阻抗力)。乳酸菌产生的细菌素是一类具有抑菌活性的多肽或者蛋白类物质，部分细菌素的抑菌谱较广，对多种革兰氏阳性菌有较强的抑制作用。本专利技术所述乳酸菌制剂对于促进水产养殖动物生长，提高免疫力和抗病力，防治病害尤其是弧菌类病原体造成的病害方面有显著作用。乳酸菌在发酵过程中由于代谢产物乳酸及其他有机酸累积对其自身细胞生长的抑制作用，单位活菌量与其他益生菌如芽孢杆菌等相比较较低，一般条件下仅能达到芽孢杆菌的30％左右，对于乳酸菌制剂的实际应用造成很大的制约，因而可通过降低上述抑制作用的影响，延长乳酸菌的对数生长期，从而获得较高浓度的乳酸菌制剂。目前市场上与水产养殖相关的乳酸菌类制剂发酵主要采取两种方式，一种为常规厌氧培养，如多数EM菌剂，此类培养方法得到的发酵产物中乳酸菌含量较低，一般低于5×108CFU/mL，无法满足大规模水产养殖中的需求；另一种为高密度发酵培养，采取流加氨水或NaOH、KOH等方式控制发酵液pH，最后以离心方式浓缩乳酸菌发酵液，此类培养方法得到的发酵产物中乳酸菌含量一般高于1011CFU/mL，但对设备要求较高且操作复杂，发酵成本较高，限制了在大规模水产养殖中的应用。本申请人在中国专利CN103497906A中公开一种微生态制剂及其制备方法与应用，涉及水产养殖。微生态制剂含有枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌中的至少一种和植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的至少一种；植物乳杆菌包括：植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)1A07806，保藏编号CCTCCNO:M2013293；嗜酸乳杆菌包括：嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)PL7，保藏编号CCTCCNO:M2013294。在制备促进对虾或石斑鱼生长，提高对虾或石斑鱼免疫力和抗病力，防治病害，提高存活率，净化养殖水质制剂中应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高菌量乳酸菌制剂及其制备方法。本专利技术的另一目的是提供一种高菌量乳酸菌制剂的应用。所述高菌量乳酸菌制剂含有植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌等中的至少一种；所述植物乳杆菌含量占总菌数百分比50％～60％；所述嗜酸乳杆菌含量占总菌数百分比40％～50％；总量为100％。所述植物乳杆菌包括植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)1A07806；所述嗜酸乳杆菌包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)PL7；所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)1A07806的保藏编号为CCTCCNO：M2013293；所述嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)PL7的保藏编号为CCTCCNO：M2013294。所述高菌量乳酸菌制剂中，植物乳杆菌发酵液和嗜酸乳杆菌发酵液均按照本领域常规的深层液体发酵培养的方式获得，经过平板活化、一级种子培养、二级种子培养和发酵培养。具体可以通过以下方法制备得到：植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的培养：将出发菌株按平板活化、液体种子、液体发酵的顺序培养，平板和种子培养基为常规MRS培养基。经数学模型优化后，植物乳杆菌发酵培养基的主要组分及其含量如下：糖蜜4％～6％，红糖1％～2％，酵母粉0.02％～0.04％，蛋白胨0.4％～0.6％，KH2PO40.15％～0.25％，FeSO40.01％～0.02％，MnSO40.005％～0.01％，CaCO30.3％～0.5％，发酵培养条件为28～37℃，静置培养36～48h，当发酵液pH降至4.7时补加30％NaCO3及10％CaCO3混合液，12h后再补加一次，发酵结束后发酵液活菌数≥1.1×1010CFU/mL。经数学模型优化后，嗜酸乳杆菌发酵培养基的主要组分及其含量如下：糖蜜3％～5％，红糖2％～3％，酵母粉0.04％～0.06％，蛋白胨0.4％～0.6％，KH2PO40.15％～0.3％，FeSO40.01％～0.02％，MnSO40.005％～0.01％，CaCO30.3％～0.5％，发酵培养条件为28～37℃，静置培养36～48h，当发酵液pH降至4.7时补加30％NaCO3及10％CaCO3混合液，12h后再补加一次，发酵结束后发酵液活菌数≥1010CFU/mL。所述高菌量乳酸菌制剂的存在形式为微生物菌体发酵液或者微生物冻干菌体与固体辅料的混合物。当所述高菌量乳酸菌制剂的存在形式为微生物菌液时，制备方法如下：将植物乳杆菌发酵液和嗜酸乳杆菌发酵液按比例均匀混合即可；混合后可加入维生素C，低聚果糖、甘露醇等中的至少一种作为保护剂，起到协调保护作用，利于微生态制剂的保藏。当所述高菌量乳酸菌制剂的存在形式为微生物菌粉与固体辅料的混合物时，制备方法如下：将植物乳杆菌发酵液和嗜酸乳杆菌发酵液按比例均匀混合，并加入添加剂，所述添加剂可选自海藻糖、甘油、淀粉糊精、甘露醇、低聚果糖等中的至少一种，所述添加剂的添加量按质量百分比可为植物乳杆菌发酵液和嗜酸乳杆菌发酵液的1％～3％，经过浓缩冻干后作为主要活性成分，按照一定的剂型工艺，添加固体辅料制成片剂、散剂、粉剂等。所述固体辅料为本领域常规使用固体辅料，包括石灰石、硅藻土、沸石粉、活性炭、微量元素等中的至少一种。本专利技术所述高菌量乳酸菌制剂中的上述任一组合，均具有促进水产养殖动物生长，提高免疫力和抗病力，防治病害尤其是对虾红腿、烂眼、甲壳溃疡等由弧菌引起的病害，增加摄食量，提高存活率，净化养殖水质的作用。在对虾肠道增粗，对虾红腿病、烂眼病及对虾白斑病毒防治应用中具有显著效果。由此可见，所述高菌量乳酸菌制剂可在制备防治对虾病害、对虾生长促进剂、饲料添加剂、水质净化剂等中应用。所述对虾病害包括对虾红腿、烂眼、甲壳溃疡等由弧菌引起的病害。本专利技术选用的菌株特性及功能如下：植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌：所述植物乳杆菌CCTCCNO：M2013293和嗜酸乳杆菌CCTCCNO：M2013294可以定植水产动物肠道，可以调节肠道菌群平衡，能产生细菌素和乳酸，抑制病原菌生长，提高养殖动物机体免疫力和抗病力。所述高菌量乳酸菌制剂可促进水产养殖动物尤其是对虾生长，提高对虾抗病力，防治对虾病害发生，提高对虾存活率，净化养殖水质。所述高菌量乳酸菌制剂应用于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高菌量乳酸菌制剂，其特征在于其含有植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌中的至少一种；所述植物乳杆菌含量占总菌数百分比50％～60％；所述嗜酸乳杆菌含量占总菌数百分比40％～50％；总量为100％；所述植物乳杆菌包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)1A07806，保藏编号为CCTCC NO：M2013293；所述嗜酸乳杆菌包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)PL7，保藏编号为CCTCC NO：M2013294。

【技术特征摘要】
1.一种高菌量乳酸菌制剂，其特征在于其含有植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌中的至少一种；所述植物乳杆菌含量占总菌数百分比50％～60％；所述嗜酸乳杆菌含量占总菌数百分比40％～50％；总量为100％；所述植物乳杆菌包括植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)1A07806，保藏编号为CCTCCNO：M2013293；所述嗜酸乳杆菌包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)PL7，保藏编号为CCTCCNO：M2013294。2.如权利要求1所述一种高菌量乳酸菌制剂的制备方法，其特征在于所述高菌量乳酸菌制剂中，植物乳杆菌发酵液和嗜酸乳杆菌发酵液均按照本领域常规的深层液体发酵培养的方式获得，经过平板活化、一级种子培养、二级种子培养和发酵培养。3.如权利要求2所述一种高菌量乳酸菌制剂的制备方法，其特征在于所述平板活化、一级种子培养、二级种子培养和发酵培养具体方法为：植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的培养：将出发菌株按平板活化、液体种子、液体发酵的顺序培养，平板和种子培养基为常规MRS培养基；经数学模型优化后，植物乳杆菌发酵培养基的主要组分及其含量如下：糖蜜4％～6％，红糖1％～2％，酵母粉0.02％～0.04％，蛋白胨0.4％～0.6％，KH2PO40.15％～0.25％，FeSO40.01％～0.02％，MnSO40.005％～0.01％，CaCO30.3％～0.5％，发酵培养条件为28～37℃，静置培养36～48h，当发酵液pH降至4.7时补加30％NaCO3及10％CaCO3混合液，12h后再补加一次，发酵结束后发酵液活菌数≥1.1×1010CFU/mL；经数学模型优化后，嗜酸乳杆菌发酵培养基的主要组分及其含量如下：糖蜜3％～5％，红糖2％～3％，酵母粉0.04％～0.06％，蛋白胨0....

【专利技术属性】
技术研发人员：邵宗泽，单大鹏，李旭，林剑辉，王丽萍，
申请(专利权)人：国家海洋局第三海洋研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35