结缔组织生长因子片段及其方法和用途技术

本发明专利技术涉及包含至少ＣＴＧＦ的外显子４或外显子５，并且具有促有丝分裂活性的ＣＴＧＦ片段。本发明专利技术进一步涉及使用所述ＣＴＧＦ片段鉴定调节所述ＣＴＧＦ片段之促有丝分裂活性的组合物的方法以及所鉴定的组合物。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术一般性地涉及生长因子领域，具体地涉及结缔组织生长因子(CTGF)片段及其使用方法。
技术介绍
生长因子生长因子可以广义地定义为多功能的、局部作用的细胞内信号传导多肽，它们控制个体发育以及维持组织形态和功能。许多原致癌基因的蛋白质产物已被鉴定为生长因子和生长因子受体。在正在发育的组织中，生长因子一般刺激靶细胞的增殖、分化以及器官化。生长因子的作用依赖于它们与特异性受体的结合，该结合刺激细胞内的信号传导的情况。生长因子包括，例如，血小板衍生生长因子(PDGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、转化生长因子β(TGF-β)、转化生长因子α(TGF-α)、表皮生长因子(EGF)以及结缔组织生长因子(CTGF)。据报道，这些生长因子中的每一种均刺激细胞增殖。结缔组织生长因子CTGF是一种富半胱氨酸的单体肽，分子量约38kd。正如以前所报道，CTGF对结缔组织具有促分裂活性和趋化活性。CTGF由细胞分泌，据信其在与特定的细胞受体相互作用中具有活性。CTGF是生长调节子家族中的一员，包括，例如，小鼠(fisp-12)和人的CTGF、Cyr-61(小鼠)、Cef10(鸡)和Nov(鸡)。基于序列比较，已提出该家族的成员具有一般包括至少以下之一的组件结构(1)负责结合的胰岛素样生长因子结构域，负责结合；(2)von Willebrand因子结构域，负责形成复合物；(3)血小板反应素1型重复，可能负责结合基质分子；和(4)在基质蛋白质中发现的C-末端组件，推测负责结合受体。人CTGF的cDNA序列含有一个1047个核苷酸的开放阅读框架，起始位点在大约130核苷酸处，TGA终止位点在大约1177核苷酸处，编码349个氨基酸的肽。人CTGF的cDNA序列以前已在美国专利5408040中公开。CTGF的开放阅读框架编码一个含39个半胱氨酸残基的多肽，提示是一个有多个分子内二硫键的蛋白质。肽的氨基末端含有一个预示分泌型蛋白质的疏水信号序列，并且在氨基酸序列中的28位和225位天冬酰胺残基上有两个N-连接的糖基化位点。据信，CTGF的合成及分泌由TGF-β和BMP-2，以及潜在地由TGF-β蛋白质超家族的其它成员选择性地诱导。正如本领域所报道，尽管TGF-β在软琼脂中能够刺激正常的成纤维细胞的生长，但是单独的CTGF并不能在成纤维细胞中诱导该特性。然而，已经证明CTGF的合成和作用对TGF-β刺激抗基非依赖的成纤维细胞生长是必需的。(见，例如，Kothapalli等人。细胞生长和分化(CellGrowth & Differentiation)，8(1)61-68和Boes等人。内分泌学(Endocrinology)，140(4)1575-1580)。在生物学活性方面，据报道CTGF的性质基本上是促分裂(能够刺激靶细胞增殖)。另据报道CTGF具有趋化活性。据报道，在病理学方面，全长的CTGF分子是结缔组织细胞过生长以及胞外基质过沉积的条件之一。在本领域中CTGF被描述为与涉及血管内皮细胞的迁移和增殖以及新血管生成的条件相关。涉及到这些条件的疾病和障碍包括，例如，皮肤和主要器官的纤维化、癌症，以及相关疾病和障碍诸如全身性硬皮病、血管生成、动脉粥样硬化、糖尿病型肾病和肾性高血压。(见，例如，Toshifumi等人。1999，细胞生理学杂志(Journal of CellularPhysiology)，18191)153-159；Shimo等人。1999，生物化学杂志(Journalof Biochemistry)，126(1)137-145；Murphy等人。1999，生物化学杂志(Journal of Biological Chemistry)，274(9)5830-5834；Wenger等人。1999，致癌基因(Oncogene)，18(4)1073-1080；Frzier等人。1997，国际生物化学和细胞生物学杂志(International Journal of Biochemistry &Cellular Biology)，29(1)153-161；Oemar等人。1997，循环(Circulation)，95(4)831-839)。另据报道，CTGF用于创伤愈合以及结缔组织、骨和软骨的修复。在这方面，在这样的障碍，诸如骨质疏松症、骨性关节炎或骨软骨炎、关节炎、骨骼障碍、肥大性疤痕、烧伤、血管肥大或伤口愈合中，已将CTGF描述为骨、组织或软骨形成的诱导物。(见，例如，美国专利5837258；Ohnishi等人。1998，分子和细胞心脏病学(Journal of Molecular and Cellular Cardiology)，30(11)2411-2422；Nakanishi等人。1997，生物化学和生物物理学研究通讯(Biochemical and Biophysical Research Communications)，234(1)206-210；Pawar等人。1995，细胞生理学杂志(Journal of Cellular Physiology)，165(3)556-565)。总之，CTGF参与多种纤维化和癌性条件，并认为在伤口愈合中发挥作用。因而，在本领域中有必要鉴定调制CTGF活性的有用方法，以治疗这些多种疾病和障碍。在本专利技术之前，没有CTGF的区域或结构域负责信号传导不同的生物学活性这样的报道。而且，在本专利技术前，没有这样的公开内容，即通过抑制CTGF的特定区域或结构域的生物学活性来治疗与细胞增殖和/或过量产生细胞外基质有关的疾病或障碍。专利技术概述本专利技术提供新的组合物和方法，用于治疗CTGF相关的疾病、障碍或失调，其中涉及到细胞增殖，例如，成纤维细胞的增殖的诱导。特别是，本专利技术的组合物包括含有CTGF C-末端区域的CTGF片段。一方面，本专利技术提供了具有促有丝分裂活性的结缔组织生长因子(CTGF)多肽的片段。本专利技术的片段包括具有由至少外显子4编码的氨基酸序列的CTGF，正如在图2中所示。片段也可以包括由至少外显子5编码的氨基酸序列，正如在图2中所示。本专利技术的CTGF片段可以包括由至少外显子4和5编码的氨基酸序列，正如在图2中所示。本专利技术也提供编码这类片段的多核苷酸序列。在另一特定的方面，本专利技术之片段包含CTGF的至少一部分外显子4或5，并且具有促有丝分裂活性。在另一方面，本专利技术的片段包含四分之一至二分之一长度的全长CTGF多肽。本专利技术还包括使用本专利技术的CTGF片段鉴定能够调制所述CTGF片段之促有丝分裂活性的组合物的方法。该CTGF片段特别可用于鉴定这样的组合物，这些组合物通过例如，抑制、压制或增加CTGF片段的促有丝分裂活性，影响该CTGF片段的活性。本专利技术权利要求书中的组合物进一步包含CTGF调制子，例如，由上面方法鉴别的抗体、反义分子、小分子和其它化合物，它们可以调制本专利技术的CTGF片段的活性。一方面，本专利技术提供抑制或压制CTGF的促有丝分裂活性的CTGF调制子。本专利技术的另一方面，例如，在需要诱导CTGF活性的指征例如，在伤口愈合、组织修复和骨修复中CTGF调制子提高了CTGF的促有丝分裂活性。在本专利技术的另一个方面，本专利技术的方法包括将有效量的CTGF片段本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有促有丝分裂活性的结缔组织生长因子（ＣＴＧＦ）多肽的片段。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：GR哥罗恩达思特，TB奈夫，
申请(专利权)人：迈阿密大学，菲博罗锦公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]