一种牛血清白蛋白包覆紫杉醇脂质纳米粒制剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种牛血清白蛋白包覆紫杉醇脂质纳米粒制剂的制备方法，该方法分为(1)脂质核心(PTX‑LNP)的制备；(2)牛血清白蛋白(BSA)包覆载紫杉醇脂质纳米粒(BSA‑PTX‑LNP)的制备两步。该制备方法中加入十八胺为了增加脂质核心的电荷带正电荷，目的是与带负电荷的牛血清白蛋白通过静电作用相结合。所制备的牛血清白蛋白包覆紫杉醇脂质纳米粒制剂为药物靶向肿瘤载体系统提供了一种新的具有肿瘤细胞靶向的纳米给药系统，提高了抗肿瘤药物对肿瘤部位的靶向及肿瘤杀伤能力。

A bovine serum albumin coated method for preparing paclitaxel lipid nanoparticle preparations

The invention discloses a preparation method of a bovine serum albumin encapsulated paclitaxel lipid nanoparticles preparation, the method is divided into (1) lipid core (PTX LNP) preparation; (2) bovine serum albumin (BSA) coated with paclitaxel loaded lipid nanoparticles (BSA PTX LNP) were prepared by two step. In the preparation method, eighteen amines are added to increase the charge band positive charge of the lipid core, and the purpose is to combine the negatively charged bovine serum albumin with electrostatic action. The preparation of bovine serum albumin encapsulated paclitaxel lipid nanoparticles preparation for drug targeting tumor vector system provides a new nano tumor cell targeting drug delivery system, improve the antitumor drugs on tumor targeting and tumor killing ability.

【技术实现步骤摘要】
一种牛血清白蛋白包覆紫杉醇脂质纳米粒制剂的制备方法
本专利技术提出了一种新型的具有肿瘤细胞靶向的给药系统的制备方法即一种牛血清白蛋白包覆紫杉醇脂质纳米粒制剂的制备方法，属于医药

技术介绍
白蛋白(Albumin，Alb)由肝实质细胞合成，在血浆中的半衰期约为15-19天，是血浆中含量最多的蛋白质，占血浆总蛋白的40％-60％。白蛋白的分子结构已于1975年阐明，为含585个氨基酸残基的单链多肽，分子量为66458，分子中含17个二硫键，不含有糖的组分。在体液pH7.4的环境中，白蛋白为负离子，每分子可以带有200个以上负电荷。它是血浆中很重要的载体，许多水溶性差的物质可以通过与白蛋白的结合而被运输,这些物质包括胆红素、长链脂肪酸(每分子可以结合4-6个分子)、胆汁酸盐、前列腺素、类固醇激素、金属离子(如Cu2+、Ni2+、Ca2+)、药物(如阿司匹林、青霉素等)。具有活性的激素或药物当与白蛋白结合时，可以不表现其活性，而视为其储存形式，由于这种结合的可逆性和处于动态平衡，因此在调节这些激素和药物的代谢上，具有重要意义。目前作为载体材料使用的白蛋白包括人血清白蛋白(HumanSerumAlbumin，HSA)和牛血清白蛋白(BovineSerumAlbumin，BSA)。牛血清白蛋白(BSA)，又称第Ⅴ组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66000，等电点为4.7。其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽键的34位是一个游离巯基。白蛋白在pH4-9范围内保持稳定，在60℃加热10h而没有变化，具有良好的稳定性。在BSA的三个结构域Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ中，结构域Ⅱ和Ⅲ均有一个由疏水性及荷正电的基团所构成的袋装结构，其中能够容纳多种结构的化合物。由于BSA与HSA不仅结构相似，而且两者的氨基酸序列高度相似，且不同氨基酸均为保守性替换，而BSA更价廉易得，因此被广泛应用于医药研究领域中。近年来越来越多事实表明，仅仅发展新药不足以保证药物治疗的进步，发展合适的药物载体系统可以克服目前存在的一些问题，还可能实现药物控释和定点释药。因此，微球、微乳、纳米粒、脂质体等亚微粒药物载体输送系统研究成为药物新剂型研究中非常活跃的领域，同时研究工作者在选择性吸收和靶向给药等方面取得了显著的成就。将药物包封于这些亚微粒中可以改变药物在体内的分布、调节释药速度、提高生物利用度、增加药物对生物膜的透过性、增加药物在靶器官的分布量，从而提高疗效，减轻毒副作用。在以上给药系统中，脂质体的研究较为广泛，脂质体在体内具有良好的靶向性和生物相容性等优点，但一般脂质体也存在体内外不稳定、药物易于渗漏等问题。含药微乳由于其物理稳定性、油相对药物的溶解度等问题限制了其进一步发展。聚合物纳米粒在制备过程中可能带来潜在毒性的物质，如残留单体、有机溶剂、聚合物引发剂等，所用的生物降解性高分子材料在细胞吞噬降解后也常产生细胞毒性。因此人们将目光逐渐转向由生物相容、体内降解的天然脂质材料作为载体的脂质纳米粒。1990初开发的脂质纳米粒(LNP,lipidnanoparticles)是一种可替代乳剂、脂质体和聚合物纳米粒的新型给药系统。LNP系统既具备聚合物纳米粒物理稳定性高、药物泄漏慢的优势，又兼具了脂质体、乳剂的毒性低、能大规模生产的优点，是一种极有发展前景的新型给药系统。LNP是由具有生理相容性并可生物降解的，由拥有良好人体使用历史的脂质制备而成，具有下述优点：(1)纳米粒粒径小，平均粒径在纳米级，微米级颗粒含量极少，可用于注射给药(当颗粒径>5μm时，不宜用于注射给药)；(2)生理可接受，载体无生物毒性，制备过程中不使用有毒聚合物、单体等有毒残留物；(3)对亲脂性药物有足够的载药能力，相对脂质体载药量提高，通过工艺调整，也可以包封亲水性药物；(4)药物释放可以达到缓释、控释目的；(5)其水分散系统可以进行高压灭菌或γ辐射灭菌，具有长期的物理化学稳定性，也可将之冻干或喷雾干燥制成固体粉末；(6)通过对其表面进行特征修饰可控制靶向特定组织(靶向给药)；(7)有足以供应市场的大规模工业化生产方式；(8)价格相对较为低廉。因此，近期LNP吸引了人们越来越多的注意。近年来越来越多事实表明，仅仅发展新药不足以保证药物治疗的进步，需要发展合适的药物靶向肿瘤载体系统可以克服目前存在的一些问题，实现药物肿瘤靶向释药。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种牛血清白蛋白包覆紫杉醇脂质纳米粒制剂的制备方法，为药物靶向肿瘤载体系统提供了一种新的具有肿瘤细胞靶向的纳米给药系统，提高了抗肿瘤药物对肿瘤部位的靶向及肿瘤杀伤能力。本专利技术采用以下技术方案：一种牛血清白蛋白包覆紫杉醇纳米粒制剂的制备方法，它包括以下步骤：(1)脂质核心(PTX-LNP)的制备：按比例精密称取紫杉醇、磷脂、十八胺置于茄形瓶中，加入氯仿8～12ml超声溶解，30-40℃减压蒸发成膜，加入水合介质PBS8～12ml，30-40℃水合15～30min，冰浴探头超声后即得到脂质核心溶液；所述紫杉醇与磷脂重量比为1:15～1:5；所述十八胺与紫杉醇重量比为1:6～1:3；(2)牛血清白蛋白包覆载紫杉醇脂质纳米粒制剂(BSA-PTX-LNP)的制备：按照磷脂：BSA重量比为5:1～15:1的比例称取BSA，用PBS溶液溶解后，缓慢加入步骤(1)制备得到的脂质核心溶液中，于30-40℃缓慢搅拌孵育6～10h，使BSA物理包覆于脂质核心表面，微柱离心法分离未包覆的游离蛋白，即得牛血清白蛋白包覆的紫杉醇脂质纳米粒。优选的，所述步骤(1)中紫杉醇与磷脂重量比为1:10。优选的，所述步骤(1)中十八胺与紫杉醇重量比为1:5。优选的，所述步骤(1)中超声的功率为200W，超声1s，间歇1s，总时间为3～6min。优选的，所述超声总时间为5min。优选的，所述步骤(2)中PBS溶液的pH为7.4。优选的，所述步骤(2)中磷脂：BSA的重量比为10:1。优选的，所述步骤(2)中搅拌孵育时间为8h，温度为37℃。本专利技术的制备方法中对紫杉醇脂质核心的制备采用的是加入紫杉醇、磷脂和十八胺，其加入十八胺为了增加脂质核心的电荷带正电荷，目的是与带负电荷的牛血清白蛋白通过静电作用相结合。这种结合方式是通过正负电荷静电吸引结合在一起，这个方法与白蛋白包覆紫杉醇相比，能增加载药量及良好的生物相容性。本专利技术的有益效果是：紫杉醇脂质纳米粒经BSA包覆后，肿瘤细胞对抗肿瘤药物紫杉醇的摄取大大增加，并且对肿瘤细胞的杀伤力也大大增加，其意义在于：(1)增加药物分子靶标部位的药物浓度，有利于减小药物在正常组织活细胞的分布，降低药物的毒副作用；(2)药物分子靶标部位的药物浓度增加，有利于提高该类抗肿瘤药物的疗效。附图说明图1为BSA-PTX-LNP的透射电镜下的形态图。图2为MCF-7细胞在不同药物载体及浓度的培养液中的细胞存活率。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明实施例1一种白蛋白包覆载杉醇脂质纳米粒的制备(1)脂质核心的制备：按比例精密称取紫杉醇10mg、磷脂50mg、十八胺1.7mg置于茄形瓶中，加入氯仿8～12ml超声溶解，30℃减压蒸发成膜，加入水合介质pH为7.4的PBS8～12ml，30℃本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛血清白蛋白包覆紫杉醇纳米粒制剂的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤：(1)脂质核心的制备：按比例精密称取紫杉醇、磷脂、十八胺置于茄形瓶中，加入氯仿8～12ml超声溶解，30‑40℃减压蒸发成膜，加入水合介质PBS 8～12ml，30‑40℃水合15～30min，冰浴探头超声后即得到脂质核心溶液；所述紫杉醇与磷脂重量比为1:15～1:5；所述十八胺与紫杉醇重量比为1:6～1:3；(2)牛血清白蛋白包覆载紫杉醇脂质纳米粒制剂的制备：按照磷脂：BSA重量比为5:1～15:1的比例称取BSA，用PBS溶液溶解后，缓慢加入步骤(1)制备得到的脂质核心溶液中，于30‑40℃缓慢搅拌孵育6～10h，使BSA物理包覆于脂质核心表面，微柱离心法分离未包覆的游离蛋白，即得牛血清白蛋白包覆的紫杉醇脂质纳米粒。

【技术特征摘要】
1.一种牛血清白蛋白包覆紫杉醇纳米粒制剂的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤：(1)脂质核心的制备：按比例精密称取紫杉醇、磷脂、十八胺置于茄形瓶中，加入氯仿8～12ml超声溶解，30-40℃减压蒸发成膜，加入水合介质PBS8～12ml，30-40℃水合15～30min，冰浴探头超声后即得到脂质核心溶液；所述紫杉醇与磷脂重量比为1:15～1:5；所述十八胺与紫杉醇重量比为1:6～1:3；(2)牛血清白蛋白包覆载紫杉醇脂质纳米粒制剂的制备：按照磷脂：BSA重量比为5:1～15:1的比例称取BSA，用PBS溶液溶解后，缓慢加入步骤(1)制备得到的脂质核心溶液中，于30-40℃缓慢搅拌孵育6～10h，使BSA物理包覆于脂质核心表面，微柱离心法分离未包覆的游离蛋白，即得牛血清白蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈聪慧，
申请(专利权)人：临沂大学，
类型：发明
国别省市：山东,37