一种缘毛鸟足兰的组培快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种缘毛鸟足兰的组培快繁方法，属于植物组织培养领域，旨在通过诱导、增殖、分化、壮苗、炼苗移栽等过程获得优质的缘毛鸟足兰组培苗，建立缘毛鸟足兰组培快速繁殖技术体系；该组培快繁方法依次包括根状茎中间繁殖体的诱导步骤、增殖步骤及分化培养步骤，所述的根状茎中间繁殖体的诱导步骤，即将外植体接种到诱导培养基中进行培养；其中，所述的诱导培养基包括：MS、0.5～3.0mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤、0.1～1.0mg/L萘乙酸、0.05～0.1μmol/L La(NO

Tissue culture and rapid propagation method of border feather bird foot orchid

The invention discloses a method for tissue culturing satyrium ciliatum rapid propagation method, which belongs to the field of plant tissue culture, through induction, proliferation, differentiation, seedling, transplanting and so acquired satyrium ciliatum seedling quality, establish the technology system of rapid propagation of satyrium ciliatum tissue culture; rapid propagation the method comprises the rhizome propagation induced by intermediate steps, proliferation and differentiation culture of the tissue culture steps step, the rhizomes of the middle part of the reproductive body is induced by step, explants were induced by the culture medium; among them, the induction medium including: MS, 0.5 ~ 3.0mg/L 6 benzylaminopurine, 0.1 ~ 1.0mg/L NAA, 0.05 ~ 0.1 mol/L La (NO

【技术实现步骤摘要】
一种缘毛鸟足兰的组培快繁方法
本专利技术涉及植物组织培养领域，尤其涉及一种缘毛鸟足兰的组培快繁方法。
技术介绍
缘毛鸟足兰(SatyriumciliatunLdl.)为兰科鸟足兰属(SatyriumSw.)的一种地生兰。鸟足兰属约有89个种，绝大部分分布在非洲大陆和马达加斯加群岛，亚洲仅有鸟足兰(S.nepalenseD.Don,Prodr.)、云南鸟足兰(S.yunnanenseRolfe)和缘毛鸟足兰(SatyriumciliatunLdl.)等3个种分布，而我国仅有云南鸟足兰和缘毛鸟足兰分布，其中缘毛鸟足兰主要分布于中国的藏南、西南和湘西等地，其多生长在海拔1900～4100m的亚高山地带的稀矮灌丛下或林间草地上。缘毛鸟足兰是在具有近20000种的兰科植物中迄今为止报导过的雄性不育类型与两性类型共存的唯一例子。缘毛鸟足兰为多年生草本植物，地下有块茎，每年长出一个新块茎，越冬，第二年发芽长出新植株，老的块茎在生长季节后期萎缩，腐烂。由于块茎营养繁殖方式只能延续植株的数量，并不能增加植株数量。加上利益驱使，缘毛鸟足兰受到过度的采挖，其野生居群遭到极大的破坏，因此对其进行人工繁育刻不容缓。目前，国内外尚未有缘毛鸟足兰组织培养种苗繁殖的报道，也未有缘毛鸟足兰种苗组织培养专利的申请。
技术实现思路
针对上述技术的不足，本专利技术旨在提供一种通过诱导、增殖、分化、壮苗、炼苗移栽等过程成功获得了优质的缘毛鸟足兰组培苗，建立缘毛鸟足兰组培快速繁殖技术体系的缘毛鸟足兰的组培快繁方法。为了实现上述技术效果，本专利技术提供的技术方案是这样的：一种缘毛鸟足兰的组培快繁方法，依次包括根状茎中间繁殖体的诱导步骤、增殖步骤及分化培养步骤，所述的根状茎中间繁殖体的诱导步骤，即将外植体接种到诱导培养基中进行培养；其中，所述的诱导培养基包括：MS、0.5～3.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、0.1～1.0mg/L萘乙酸、0.05～0.1μmol/LLa(NO3)3、15～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L琼脂、50～100ml/L椰子汁，所述的诱导培养基的pH为5.4～5.8。需要说明的是，所述的增殖步骤为将诱导所得的根状茎接种到增殖培养基中进行培养；其中，所述的增殖培养基包括：MS、1.0～1.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤、0.1～0.5mg/L萘乙酸、15～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L琼脂、50～100ml/L椰子汁、0.2～0.5g/L活性炭，所述的增殖培养基的pH为5.4～5.8。需要说明的是，所述的分化培养步骤为将增殖培养所得的根状茎接种到分化培养基中进行培养；其中，所述的分化培养基包括：MS、0.5～1.5mg/L萘乙酸、0.01～0.05μmol/LLa(NO3)3、15～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L琼脂、0.2～0.5g/L活性炭，所述的分化培养基的pH为5.4～5.8。需要说明的是，在分化培养步骤之后还包括壮苗培养步骤，即将分化培养所得的小苗接种到壮苗培养基中进行培养；其中，所述的壮苗培养基包括：1/2MS、0.1～0.5mg/L萘乙酸、15～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L琼脂、50～100g/L香蕉汁、0.2～0.5g/L活性炭，所述的壮苗培养基的pH为5.4～5.8。需要说明的是，在壮苗培养步骤之后还包括炼苗和移栽步骤，即将试管苗根部放于自然光下至根系发白，将其放入混合基质中栽培成苗；所述的混合基质为：体积比为2:2:1的树皮、兰石、泥岩。需要说明的是，所述的根状茎中间繁殖体的诱导步骤、增殖步骤、分化培养步骤及壮苗培养步骤的培养条件均为：培养温度为25～28℃，光照强度为1500～2000lx，光照时间为12～16小时/天。需要说明的是，所述的根状茎中间繁殖体的诱导步骤的培养时间为60～90天，所述的根状茎的增殖步骤的培养时间为30～60天，所述的分化培养步骤的培养时间为40～60天，所述的壮苗培养步骤的培养时间为30～45天，所述的炼苗和移栽步骤的炼苗时间为3～5天。需要说明的是，所述的根状茎中间繁殖体的诱导步骤为：将外植体经清水冲洗、升汞消毒、无菌水漂洗后接种到诱导培养基中培养60～90天即可诱导形成根状茎中间繁殖体。需要说明的是，所述的消毒方法包括以下步骤：步骤1：将采取回实验室的外植体先在自来水冲洗下剥去外面的叶鞘至仅剩三层叶鞘，将包裹有三层叶鞘的营养芽置于超净工作台中；步骤2：于0.1％的升汞溶液中消毒30～60分钟，无菌水冲洗2～3次后剥去一层叶鞘，再置于0.1％的升汞溶液中消毒10～20分钟，无菌水冲洗3～5次后再剥去一层叶鞘，再置于0.1％的升汞溶液中消毒5～10分钟，无菌水冲洗3～5次后剥去一层叶鞘；步骤3：立即置于0.1％的升汞溶液中消毒1～3分钟，无菌水冲洗5～7次后用无菌滤纸吸干外植体表面的水分，迅速将外植体剪切成0.3～0.5cm左右的芽点并接种至诱导培养基中。需要说明的是，所述的根状茎中间繁殖体的诱导步骤之前还包括外植体采集步骤。本专利技术的有益效果为：1.通过诱导、增殖、分化、壮苗、炼苗移栽等过程成功获得了优质的缘毛鸟足兰组培苗，建立无缘毛鸟足兰组培快速繁殖技术体系；2.通过本专利技术培养获得的缘毛鸟足兰组培苗的存活率可达95％以上。具体实施例下面结合具体实施方式对权利要求书做进一步说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何人在本专利技术权利要求范围内所做的有限次的修改，仍在本专利技术权利要求范围内。实施例1(1)外植体采集：2013年春季当缘毛鸟足兰营养芽萌动时，在云南丽江县野外采集健壮无明显虫害的缘毛鸟足兰的叶鞘未打开的营养芽，采集后用湿润的白纱布包裹后立即置于保鲜盒中带回实验室。将采集回实验室的营养芽先在自来水冲洗下剥去外面的叶鞘至仅剩三层叶鞘，将包裹有三层叶鞘的营养芽置于超净工作台中；于0.1％的升汞溶液中消毒30分钟，述的壮苗培养步骤的培养时间为30～45天，所述的炼苗和移栽步骤的炼苗时间为3～5天。需要说明的是，所述的根状茎中间繁殖体的诱导步骤为：将外植体经清水冲洗、升汞消毒、无菌水漂洗后接种到诱导培养基中培养60～90天即可诱导形成根状茎中间繁殖体。需要说明的是，所述的消毒方法包括以下步骤：步骤1：将采取回实验室的外植体先在自来水冲洗下剥去外面的叶鞘至仅剩三层叶鞘，将包裹有三层叶鞘的营养芽置于超净工作台中；步骤2：于0.1％的升汞溶液中消毒30～60分钟，无菌水冲洗2～3次后剥去一层叶鞘，再置于0.1％的升汞溶液中消毒10～20分钟，无菌水冲洗3～5次后再剥去一层叶鞘，再置于0.1％的升汞溶液中消毒5～10分钟，无菌水冲洗3～5次后剥去一层叶鞘；步骤3：立即置于0.1％的升汞溶液中消毒1～3分钟，无菌水冲洗5～7次后用无菌滤纸吸干外植体表面的水分，迅速将外植体剪切成0.3～0.5cm左右的芽点并接种至诱导培养基中。需要说明的是，所述的根状茎中间繁殖体的诱导步骤之前还包括外植体采集步骤。本专利技术的有益效果为：1.通过诱导、增殖、分化、壮苗、炼苗移栽等过程成功获得了优质的缘毛鸟足兰组培苗，建立无缘毛鸟足兰组培快速繁殖技术体系；2.通过本专利技术培养获得的缘毛鸟足兰组培苗的存活率可达95％以上。具体实施例下面结合具体实施方式对权利要求书做进一步说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种缘毛鸟足兰的组培快繁方法，依次包括根状茎中间繁殖体的诱导步骤、增殖步骤及分化培养步骤，其特征在于，所述的根状茎中间繁殖体的诱导步骤，即将外植体接种到诱导培养基中进行培养；其中，所述的诱导培养基包括：MS、0.5～3.0mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤、0.1～1.0mg/L萘乙酸、0.05～0.1μmol/L La(NO

【技术特征摘要】
1.一种缘毛鸟足兰的组培快繁方法，依次包括根状茎中间繁殖体的诱导步骤、增殖步骤及分化培养步骤，其特征在于，所述的根状茎中间繁殖体的诱导步骤，即将外植体接种到诱导培养基中进行培养；其中，所述的诱导培养基包括：MS、0.5～3.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、0.1～1.0mg/L萘乙酸、0.05～0.1μmol/LLa(NO3)3、15～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L琼脂、50～100ml/L椰子汁，所述的诱导培养基的pH为5.4～5.8。2.根据权利要求1所述的缘毛鸟足兰的组培快繁方法，其特征在于，所述的增殖步骤为将诱导所得的根状茎接种到增殖培养基中进行培养；其中，所述的增殖培养基包括：MS、1.0～1.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤、0.1～0.5mg/L萘乙酸、15～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L琼脂、50～100ml/L椰子汁、0.2～0.5g/L活性炭，所述的增殖培养基的pH为5.4～5.8。3.根据权利要求1所述的缘毛鸟足兰的组培快繁方法，其特征在于，所述的分化培养步骤为将增殖培养所得的根状茎接种到分化培养基中进行培养；其中，所述的分化培养基包括：MS、0.5～1.5mg/L萘乙酸、0.01～0.05μmol/LLa(NO3)3、15～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L琼脂、0.2～0.5g/L活性炭，所述的分化培养基的pH为5.4～5.8。4.根据权利要求3所述的缘毛鸟足兰的组培快繁方法，其特征在于，在分化培养步骤之后还包括壮苗培养步骤，即将分化培养所得的小苗接种到壮苗培养基中进行培养；其中，所述的壮苗培养基包括：1/2MS、0.1～0.5mg/L萘乙酸、15～30g/L蔗糖、3.5～6.0g/L琼脂、50～100g/L香蕉汁、0.2～0.5g/L活性炭，所述的壮苗培养基的pH为5.4～5.8。5.根据权利要求4所述的缘毛鸟足兰的组培快繁方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁钧淞，杨业容，韦敏，
申请(专利权)人：玉林师范学院，
类型：发明
国别省市：广西,45